列当中Crenatoside神经保护作用的机制研究

目的:从列当中苯乙醇苷类成分Crenatoside(OC4)对D-半乳糖所致急性损伤的保护作用中,探讨调节cAMP/PKA/CREB信号通路的机制。方法:(1)根据MTT法检测细胞存活率确定给药OC4的剂量,以及D-半乳糖诱导PC12神经细胞损伤模型的剂量和作用时间。OC4孵育24 h后,ELISA法检测cAMP、PKA和BDNF的含量;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量; Western Blotting免疫印迹分析检测CREB、p-CREB蛋白的表达水平。结果:给予PC12细胞16 g/L D-半乳糖40h后,MTT检测细胞存活率达(46. 67±6. 59)%,与对照组比较差异具有显著性意义(P <0. 05),表明成功建立了细胞衰老模型。OC4作用24 h后,与D-半乳糖组相比,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平提高(P <0. 05),MDA和LDH水平下降(P <0. 05)(r MDA=-0. 850,P <0. 05);(r LDH=-0. 927,P <0. 05),p-CREB表达增加(P <0. 05),并且有剂量依赖性(r=0. 903,P <0. 01)。PKA特异性抑制剂H-89作用1 h后,p-CREB表达减少,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平显著降低(P <0. 05),MDA和LDH水平升高(P <0. 05)。结论:列当中Crenatoside对D-半乳糖诱导的PC12神经细胞损伤有明显的保护作用,其机制与上调cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

RP-HPLC同时测定向日葵列当中苯乙醇苷类化合物crenatoside和类叶升麻苷

目的：建立同时测定向日葵列当中crenatoside和类叶升麻苷含量的HPLC法。方法：采用反相高效液相色谱法，用Agilent ZORBAX SB-C18 （4.6 mm250 mm，5 μm）柱，以乙腈-0.01%冰醋酸溶液（18∶82） 为流动相，流速1.0 mL·min^-1，检测波长330 nm，柱温30 ℃，在30 min内分离检测了这两种化合物。结果：RP-HPLC测定的crenatoside和类叶升麻苷线性范围分别在在1.08-16.2 μg（r=0.999 9）和1.00-15.0 μg（r=0.999 8），平均加样回收率分别为97.23%，96.27%，RSD分别为1.21%，1.66%。结论：该方法简便，精密度、重复性良好，结果准确可靠，可以作为向日葵列当及其相关制剂的质量控制。

Crenatoside的脑源性神经营养因子乙酰化修饰对阿尔茨海默病损伤模型的保护作用研究

目的:探讨在β淀粉样肽25-35[Amyloid beta-peptide(25-35),Aβ25-35]诱导的损伤模型中,肉苁蓉中Crenatoside(OC4)是否参与对脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的乙酰化修饰而发挥抗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)作用。方法:设置正常对照组、模型组(Aβ25-3520μmol·L-1)、OC4给药组(50和100μg·m L-1)、组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)组(5 nmol·L-1)、阳性药人参皂苷rd(ginsenoside rd,GSrd)组(20μg·m L-1)。探讨:(1)流式细胞术检测细胞凋亡情况。(2) ELISA法检测组蛋白乙酰化酶(histone acetyltransferase,HATs)、HDAC2和BDNF的含量变化。(3) Western Blotting检测HATs腺病毒E1A相关蛋白P300和HDAC2的表达水平变化。(4)染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)检测BDNF基因exonⅣ区组蛋白H3乙酰化水平的变化和HDAC2含量变化。结果:药物干预后凋亡情况出现不同程度好转。OC4组、TSA组及GSrd组作用48 h后,HATs表达增加,P300/CBP表达增加,HDAC2表达下降,BDNF水平提高。BDNF基因exonⅣ组蛋白H3乙酰化水平升高,HDAC2水平降低。结论:肉苁蓉OC4可能通过抑制Aβ25-35引起的HDAC2活化,使其依赖的组蛋白H3乙酰化水平升高,诱导持续的BDNF基因转录激活,从而起到保护PC12细胞的作用。

列当中苯乙醇苷类成分的含量测定

列当为列当科中重要的药用植物。该研究建立了列当中主要活性成分毛蕊花糖苷和crenatoside,以及总苯乙醇苷类化合物含量测定的方法,并测定15个列当样品中上述成分的含量,对其资源利用价值进行评价。研究采用高效液相色谱法测定列当中毛蕊花糖苷和crenatoside的含量,紫外分光光度法测定总苯乙醇苷的含量。结果显示列当中含量最高的成分是毛蕊花糖苷,其次为crenatoside;15个样品中毛蕊花糖苷、crenatoside和总苯乙醇苷的含量差异较大,毛蕊花糖苷的含量在1.15%~15.60%,crenatoside在0.83%~4.47%,总苯乙醇苷在6.78%~27.43%。采集时间对药材主要成分含量影响较大,盛花期采集的列当,苯乙醇苷类成分含量较高。结果表明2种含量测定方法操作简便、准确、重复性良好,可用于评价列当药材的质量以及资源利用价值。

蒙药列当的化学成分研究

目的:研究蒙药列当(Orobanche coerulescens Steph)的化学成分,为进一步明确其中的有效成分奠定基础。方法:利用普通硅胶柱色谱、大孔树脂柱色谱、Sephadex LH-20色谱技术及重结晶等方法进行分离、纯化,并利用波谱技术和理化性质确定了化合物的结构。结果:从中分离得到9个化合物,分别鉴定为:甘露醇①,β-谷甾醇②,豆甾醇③,二十烷酸-1-甘油酯④,β-胡萝卜苷⑤,琥珀酸⑥,Crenatoside⑦,麦角甾苷⑧,D-松醇⑨。结论:其中化合物③,④,⑦,⑧,⑨为首次从该植物中获得。

HPLC同时测定黄花列当中3个苯乙醇苷的含量

目的：建立HPLC法同时测定黄花列当中3个苯乙醇苷类化合物（毛蕊花糖苷、crenatoside、2’-乙酰毛蕊花糖苷）的含量。方法：采用Inertsil C18（4.6 mm×250 mm,5.0μm）色谱柱,乙腈-0.l%磷酸水溶液（22∶78）为流动相,流速1.0 mL·min^-1,柱温25℃,检测波长330 nm。结果：毛蕊花糖苷、crenatoside和2’-乙酰毛蕊花糖苷在30 min内得到良好的分离,且进样量分别在0.104～5.20μg（r=0.999 8）、0.106～2.65μg（r=1.000 0）、0.058～1.15μg（r=1.000 0）范围内呈现良好线性;平均回收率（n=3）在96.24%～102.7%之间。13批黄花列当样品中毛蕊花糖苷、crenatoside、2’-乙酰毛蕊花糖苷3种成分的含量范围分别为1.40%～11.53%、1.35%～3.22%和0.15%～1.63%,其中含量高的2个成分是毛蕊花糖苷和crenatoside;不同产地的药材成分含量差异较大。结论：本方法操作简便,准确、重现性良好,可用于黄花列当药材和饮片的质量检测。

A Diterpene Endoperoxide from Microtoena insuavis （Hance） Prain ex Dunn

A novel endoperoxlde diterpene, 7a-hydroxy-abieta-8（14）-en-18-oi 9α,13α-endoperoxide （compound 1）, was isolated from the stems of Microtoena insuavis （Hance） Prain ex Dunn, along with 4,4＇-dlhydroxytruxillic acid （compound 2）, gallic acid （compound 3）, ellaglc acid （compound 4）, 3-O-methylellaglc acid 3＇-O-α- rhamnopyranoslde （compound 5）, 3＂＇-O-methylcrenatoslde （compound 6）, crenatoslde （compound 7）, aptgenin （compound 8）, succinic acid （compound 9）, β-sitosterot （compound 10）, and β-daucosterol （compound 11）. The structures of these compounds were elucidated on the basis of spectral evidence.