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cya/crp基因缺失对鸡白痢沙门菌生物学特性影响的研究
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作者 茹鹏辉 王文婕 +2 位作者 钱满 廖成水 张春杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期9-16,共8页
为了解crp/cya基因对鸡白痢沙门菌毒力和生物学特性的影响,本研究构建缺失1182 bp cya基因的重组自杀性质粒pREΔcya,并经酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌χ7213作为供体菌,分别以鸡白痢沙门菌C79-13株和本研究室前期构建的其crp基... 为了解crp/cya基因对鸡白痢沙门菌毒力和生物学特性的影响,本研究构建缺失1182 bp cya基因的重组自杀性质粒pREΔcya,并经酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌χ7213作为供体菌,分别以鸡白痢沙门菌C79-13株和本研究室前期构建的其crp基因缺失株C79-13Δcrp(简写为Δcrp)为受体菌,利用重组自杀性质粒介导的同源重组技术构建C79-13菌株的单基因缺失株Δcya以及双基因缺失株ΔcrpΔcya,并均经PCR和测序鉴定。将这3株菌连续传60代后每隔10代分别利用PCR鉴定cya基因缺失的遗传稳定性;利用玻片凝集试验鉴定各菌株的血清型,并鉴定各菌株的生化反应特性;绘制各菌株的生长曲线分析缺失株与亲本株的生长特性;通过微量结晶紫法检测各菌株的生物被膜(BF)形成能力。PCR和测序鉴定结果显示Δcya、ΔcrpΔcya均正确构建,且cya基因缺失均具有稳定的遗传性。血清型及生化鉴定结果显示,菌株Δcya、Δcrp、ΔcrpΔcya均保留了C79-13的O9血清型,而失去了发酵蔗糖、鼠李糖、葡萄糖、麦芽糖等糖类的能力。生长曲线及BF形成能力的检测结果显示,各缺失株的生长速度较亲本株相比均显著降低,尤其双基因缺失株ΔcrpΔcya的生长速度极显著下降(P<0.01),且基因缺失株BF的形成能力均极显著降低(P<0.01),其中双基因缺失株BF的形成能力更低。将3株缺失菌及亲本菌分别以不同的剂量(5×10^(8)cfu/只~7×10^(11)cfu/只)经腹腔注射感染雏鸡进行毒力试验,计算各菌株对雏鸡的半数致死量(LD_(50))。将各缺失株以10^(7) cfu/mL两次经灌服免疫雏鸡,100μL/只,二免后7 d各组雏鸡均以5.0×10^(8)cfu/mL经腹腔注射亲本菌株C79-13进行攻毒试验,500μL/只,在42 d的观察期内观察并记录各组鸡的发病及死亡情况,计算各基因缺失株对雏鸡的免疫保护率。结果显示,缺失株Δcya、Δcrp、ΔcrpΔcya对雏鸡的LD_(50)分别为2.84×10^(9) cfu/mL、1.41×10^(10)cfu/mL、2.51×10^(11)cfu/mL,与亲本菌株C79-13相比,各缺失株LD_(50)分别升高约1.1×10^(3)倍、5.7×10^(3)倍、1.0×10^(5)倍;各组雏鸡攻毒后出现精神沉郁症状,且有部分鸡死亡,PBS对照组鸡出现排稀便症状,且全部死亡。Δcya、Δcrp及ΔcrpΔcya对雏鸡的免疫保护率分别为60%、80%、50%。表明各基因缺失株均能够对雏鸡提供一定的免疫保护效果,且单基因缺失株Δcrp的免疫效果最好。本研究首次对鸡白痢沙门菌crp、cya基因生物学功能做了初步研究,并证实缺失株Δcrp有望作为一种鸡白痢沙门菌基因缺失疫苗的候选菌株,为研制安全有效的沙门菌弱毒活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡白痢沙门菌 crp/cya基因 缺失株 生物学特性
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鼠伤寒沙门氏菌SL1344株△crp△cya缺失株的构建及其生物学特性初步研究 被引量:13
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作者 李正 程相朝 +5 位作者 张春杰 李银聚 李静 张明亮 田芳华 杨宁宁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期534-538,共5页
为研制更加安全并保持良好免疫原性的弱毒株鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)及疫苗活载体,本研究通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,将已缺失cya基因的SL1344株进一步缺失crp基因,构建S.typhi-murium SL1344△crp△cya双基因缺失突变... 为研制更加安全并保持良好免疫原性的弱毒株鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)及疫苗活载体,本研究通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,将已缺失cya基因的SL1344株进一步缺失crp基因,构建S.typhi-murium SL1344△crp△cya双基因缺失突变株,并对其生物学特性进行初步研究。双基因缺失株的构建是以含有重组自杀性质粒pRE△crp的大肠杆菌χ7213为供体菌,SL1344△cya为受体菌进行接合转移,两步法筛选crp/cya基因双缺失突变株,并通过PCR和测序鉴定。对双缺失菌株的生物学特性鉴定表明,SL1344△crp△cya血清型与亲本株SL1344△cya及野生株SL1344保持一致,并且能够稳定遗传缺失后的crp基因;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化,生长速度也更为缓慢;对雏鸡致病性测定试验显示,双缺失株毒力比SL1344至少降低了约106倍。实验结果表明,S.typhimurium SL1344△crp△cya缺失株具有良好的遗传稳定性,毒力明显降低,为深入研究以S.typhimurium为载体的口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门氏菌SL1344 crp/cya基因双缺失 重组自杀性质粒
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减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(pYA3493)宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究 被引量:4
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作者 尚珂 张俊峰 +6 位作者 程相朝 张春杰 李银聚 陈桂华 颜云飞 翟崇凯 赵战勤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期358-363,共6页
目的:开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcya C78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasd C78-1,再将携带asd基因的互补质粒p YA3493... 目的:开发应用于猪的稳定携带异源基因的口服活疫苗载体。方法:本研究在减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcya C78-1的基础上,运用自杀性质粒pREasd介导的细菌同源重组技术,构建缺失株ΔcrpΔcyaΔasd C78-1,再将携带asd基因的互补质粒p YA3493电转至上述菌株,构建ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)宿主-载体平衡致死系统,并进一步研究其生物学特性。结果:PCR及测序结果共同表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)构建成功。生物学特性检测结果表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的血清型与亲本株ΔcrpΔcya C78-1和疫苗株C500相同,并能够稳定遗传缺失型asd基因片段;其生长速度略慢于ΔcrpΔcya C78-1,且二者均明显慢于疫苗株C500;其生化特性结果也与ΔcrpΔcya C78-1基本相同。小鼠口服攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)的毒力与ΔcrpΔcya C78-1基本相当,但其半数致死量约为疫苗株C500的412倍。结论:上述结果表明,减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)有潜力作为高效表达外源基因的口服活疫苗载体。 展开更多
关键词 自杀性质粒 宿主-载体平衡致死系统 ΔcrpΔcyaΔasdC78-1(PYA3493) 口服活疫苗载体
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副猪嗜血杆菌血清7型crp基因缺失株的部分生物学特性
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作者 徐引弟 蔡旭旺 +8 位作者 徐晓娟 王治方 张家庆 朱文豪 雷亚楠 张立宪 李海利 焦文强 王克领 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期1372-1379,共8页
副猪嗜血杆菌(HPS)是引起猪格拉瑟病(Glasser’s disease)的病原菌,给全球和中国规模化养猪业造成了重大经济损失。副猪嗜血杆菌血清型众多,其中血清7型是近年来分离比例越来越高的血清型,也是危害越来越严重的血清型。crp是最重要的系... 副猪嗜血杆菌(HPS)是引起猪格拉瑟病(Glasser’s disease)的病原菌,给全球和中国规模化养猪业造成了重大经济损失。副猪嗜血杆菌血清型众多,其中血清7型是近年来分离比例越来越高的血清型,也是危害越来越严重的血清型。crp是最重要的系统调控因子之一,在细菌感染过程中对细菌适应环境变化起着至关重要的作用。为了筛选副猪嗜血杆菌血清7型crp基因缺失弱毒株,采用自然转化法构建了副猪嗜血杆菌血清7型临床分离株HPS7的crp基因缺失株,对HPS7及其crp基因缺失株的生长特性、生物膜形成、抗药性、毒力等进行了研究。结果表明,HPS7的crp基因缺失后,生长显著减慢,自凝速度减慢,生物膜形成能力明显减弱,对大部分抗生素的抗性降低,对豚鼠的毒力降低。以上结果说明crp基因对HPS7的生长、抗药性、毒力均有明显影响。本研究结果为筛选副猪嗜血杆菌血清7型弱毒株提供了参考。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌血清7型 crp基因缺失株 生长特性 抗药性 毒力
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鹅源鼠伤寒沙门菌crp、hfq基因缺失株的构建及生物学特性分析 被引量:2
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作者 李仕楷 刘佳琪 +6 位作者 李荣旭 苏文楠 陈亦杏 郑炜鸿 朱婉君 陈济铛 张济培 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期17-24,共8页
为构建鹅鼠伤寒沙门菌单基因缺失株并鉴定其生物学特性,本研究以广东地区鹅源鼠伤寒沙门菌流行株A29为研究对象,采用λ-Red同源重组技术,分别构建crp、hfq基因缺失株(A29Δcrp和A29Δhfq)及相应基因回补株,并分别采用相应引物经PCR鉴定... 为构建鹅鼠伤寒沙门菌单基因缺失株并鉴定其生物学特性,本研究以广东地区鹅源鼠伤寒沙门菌流行株A29为研究对象,采用λ-Red同源重组技术,分别构建crp、hfq基因缺失株(A29Δcrp和A29Δhfq)及相应基因回补株,并分别采用相应引物经PCR鉴定。通过细菌培养,对各菌株生物学特性进行比较;通过PCR鉴定各菌株的遗传稳定性;采用K-B纸片扩散法检测各菌株的药物敏感性;将各菌株纯培养物经腹腔注射4周龄小鼠,测定各菌株对小鼠的毒力,并观察感染后小鼠的临床症状及各组织剖检病变与组织病理变化。PCR和测序结果表明,正确构建各基因缺失株和相应回补株。生物学特性试验结果显示,与亲本株相比,A29Δcrp菌落直径极显著变小(P<0.001),不产酸、不产生H_(2)S,菌体极显著变短(P<0.001);A29Δhfq菌落边缘不整齐,不产生H_(2)S,菌体极显著变长(P<0.001),表明crp、hfq基因影响细菌的菌落形态、生化特性和形态特征。菌株遗传稳定试验结果显示,菌株传至60代时,基因缺失株仍能够稳定缺失。药敏试验结果显示,与亲本株比较,A29Δcrp对氨基糖苷类、碳青霉烯类、环丙沙星、甲氧苄啶、阿奇霉素等药物的敏感性降低,对四环素类药物的敏感性增强,A29Δhfq对除青霉素类、头孢唑啉以外的12种药物的敏感性增强。小鼠毒力试验结果显示,与亲本株的LD_(50)(2.479×10^(4)cfu)相比,A29Δcrp的LD_(50)(5.379×10^(5) cfu)和A29Δhfq的LD_(50)(5.012×106 cfu)均明显上升。各菌株感染小鼠后的临床症状及各组织剖检病变基本一致;组织病理变化观察显示,与亲本株相比,A29Δcrp组小鼠肝组织可见多量大小不一的坏死灶,脾组织红髓面积增大、白髓面积减小,A29Δhfq对小鼠脾脏、肝脏及脑组织损伤均较小。本研究为探究鼠伤寒沙门菌crp和hfq基因功能奠定了基础,同时也为进一步研发鹅沙门菌病疫苗提供了参考依据。 展开更多
关键词 鹅源鼠伤寒沙门菌 基因敲除 crp基因 hfq基因 生物学特性
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防御假单胞菌H78中crp基因对抗生素合成的调控作用
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作者 聂晨曦 向涛 +1 位作者 张雪洪 黄显清 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期11-15,共5页
crp基因(编码cAMP受体蛋白)作为全局调控因子广泛存在于各种细菌中,在不同菌株中表现不同的调控功能。防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)H78能产生硝吡咯菌素(Prn)、2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)和藤黄绿菌素(Plt)等多种广谱抗生... crp基因(编码cAMP受体蛋白)作为全局调控因子广泛存在于各种细菌中,在不同菌株中表现不同的调控功能。防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)H78能产生硝吡咯菌素(Prn)、2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)和藤黄绿菌素(Plt)等多种广谱抗生素。为探究P.protegens H78中crp基因对抗生素Prn、2,4-DAPG和Plt合成的调控作用,利用基因无痕敲除、HPLC分析、lacZ报告基因分析等技术,分析crp基因对抗生素Prn、2,4-DAPG和Plt合成及基因表达的影响。结果表明:H78菌株中crp基因的敲除导致Prn合成操纵子prnABCD表达显著下降;Plt合成及操纵子表达显著上升;2,4-DAPG合成及操纵子表达小幅下降。因此,P.protegens H78中crp基因对抗生素Prn合成存在显著的正调控作用,而对Plt合成存在明显的负调控作用,对2,4-DAPG合成存在一定的正调控作用。 展开更多
关键词 防御假单胞菌H78 crp基因 抗生素合成调控 硝吡咯菌素 2 4-二乙酰基间苯三酚 藤黄绿菌素
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鸡大肠杆菌Cya Crp变异株苗的效果
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作者 史同瑞 《畜牧兽医科技信息》 2003年第1期37-38,共2页
鸡大肠杆菌感染是引起养鸡业经济损失最严重的疾病之一。虽然抗生素药物已广泛用于该病的防治,但是菌株抗药性及饲养成本的上升促使人们寻求其它理想防治方法。灭活疫苗、亚单位疫苗和活疫苗均已在养鸡业得到应用,并取得了一定的效果,... 鸡大肠杆菌感染是引起养鸡业经济损失最严重的疾病之一。虽然抗生素药物已广泛用于该病的防治,但是菌株抗药性及饲养成本的上升促使人们寻求其它理想防治方法。灭活疫苗、亚单位疫苗和活疫苗均已在养鸡业得到应用,并取得了一定的效果,但一些疫苗株的免疫原性仍不尽人意,最近。 展开更多
关键词 变异株 大肠杆菌 大肠埃希氏菌 埃希氏杆菌属 cya crp
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半枝莲总黄酮对ApoE基因敲除小鼠血清PLTP、IL-6、CRP表达的影响 被引量:7
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作者 祝娉婷 卜平 +4 位作者 孙云 郑新梅 张振刚 张旭东 孙党红 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期394-396,共3页
目的探讨半枝莲总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠AS病变形成早期血脂水平与血清磷脂转运蛋白(PLTP)、Il-6、C反应蛋白(CRP)表达的影响。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、银杏叶胶囊组、半枝莲总黄酮高、中、低剂量... 目的探讨半枝莲总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠AS病变形成早期血脂水平与血清磷脂转运蛋白(PLTP)、Il-6、C反应蛋白(CRP)表达的影响。方法载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、银杏叶胶囊组、半枝莲总黄酮高、中、低剂量组,取正常C57BL/6小鼠为对照组,各6只。除模型组、对照组给予等容量羧甲基纤维素钠外,其他各组分别给予阳性对照药与受试药8周。处死小鼠,ELISA法检测血脂、PLTP、IL-6及CRP的表达水平。取主动脉制作切片、HE染色,观察形态学变化。结果半枝莲总黄酮中、高剂量组TG、TC、LDL-C水平明显低于模型组,高剂量组HDL-C水平高于模型组,半枝莲总黄酮各组PLTP、IL-6、CPR的表达水平较模型组明显降低,有统计学意义。PLTP与IL-6水平呈正相关,与CRP水平呈正相关,IL-6与CRP水平呈正相关。结论半枝莲总黄酮可通过降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TG、TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平,降低PLTP、IL-6、CPR水平而发挥抗AS的作用。 展开更多
关键词 半枝莲总黄酮 载脂蛋白E基因敲除小鼠 血脂 磷脂转运蛋白 白介素6 C反应蛋白
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猪霍乱沙门氏菌C78-1株Δcrp缺失株的构建及其生物学特性初步研究 被引量:16
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作者 郁川 程相朝 +3 位作者 赵战勤 张春杰 李银聚 吴庭才 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期587-593,共7页
通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pR... 通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pRE112上,构建含缺失320 bpcrp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp。运用重组自杀性质粒介导的等位交换技术,两步法筛选C78-1的Δcrp缺失株。进一步的生物学特性研究表明,缺失株的血清型与亲本菌株C78-1一致,且能够稳定遗传缺失的crp基因,但其生化特性和生长速度与C78-1相比发生明显改变,小鼠致死性试验结果表明其毒力较C78-1降低约750倍。以上结果均证实,作者成功构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失突变株,缺失株遗传稳定,毒力显著降低,为进一步开发猪霍乱沙门氏菌的弱毒疫苗菌株奠定了基础。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌C78-1 crp基因 重组自杀性质粒 接合转移 Δcrp缺失株
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血清超敏C-反应蛋白水平及CRP 1059G/C基因多态性与脑梗死的相关性 被引量:7
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作者 邓可 肖志杰 +2 位作者 赵水平 聂赛 黎肖弟 《临床神经病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期413-415,共3页
目的探讨超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平及CRP1059G/C基因多态性与脑梗死(CI)的相关性。方法采用多聚酶链式反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测105例CI患者和121名对照者CRP1059G/C基因型和等位基因频率;应用免疫透射比浊法测... 目的探讨超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平及CRP1059G/C基因多态性与脑梗死(CI)的相关性。方法采用多聚酶链式反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测105例CI患者和121名对照者CRP1059G/C基因型和等位基因频率;应用免疫透射比浊法测定血清hs-CRP水平。分析CI患者病情与血清hs-CRP水平及CRP1059G/C基因型的关系。结果CI组CRP1059G/G基因型和G等位基因频率显著高于对照组,G/C+C/C基因型和C等位基因显著低于对照组(均P<0.05);CRP1059G/G、G/C、C/C基因型血清hs-CRP水平依次降低;重度CI患者血清hs-CRP水平显著高于轻、中度组(均P<0.05),但CRP1059G/C基因型和等位基因频率与CI病情无关。回归分析显示血清hs-CRP水平是CI的危险因素之一;G/C+C/C基因型与降低CI的发病相关。结论CRP1059G/C基因型与血清hs-CRP水平相关;血清hs-CRP水平与CI病情相关;CRP1059基因中C等位基因可能是汉族CI的保护因素。 展开更多
关键词 超敏C反应蛋白 crp 1059G/C基因多态性 脑梗死
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急性脑梗死与CRP启动子区-717A/G多态性及CRP水平相关性探讨 被引量:2
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作者 冯涛 徐秀芝 +3 位作者 杨勇 王晓敏 祝鸿雁 许晓崴 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1080-1082,共3页
目的分析急性脑梗死与C-反应蛋白(CRP)水平及其启动子区-717A/G多态性的关系。方法采用免疫比浊法测定125例急性脑梗死患者和130例健康对照者的血清CRP水平,同时应用PCR-RFLP方法检测CRP-717A/G基因多态性,结合其他临床资料进行... 目的分析急性脑梗死与C-反应蛋白(CRP)水平及其启动子区-717A/G多态性的关系。方法采用免疫比浊法测定125例急性脑梗死患者和130例健康对照者的血清CRP水平,同时应用PCR-RFLP方法检测CRP-717A/G基因多态性,结合其他临床资料进行分析。结果含有AA型与AG型个体的血清CRP水平明显高于GG型个体,病例组与对照组收缩压、舒张压、血糖、CRP、纤维蛋白原、甘油三脂、胆固醇及血细胞比容差异有统计学意义。结论急性脑梗死患者中-717A/G位点A等位基因可能有增加CRP水平的趋势,CRP、胆固醇、纤维蛋白原、血糖、年龄及收缩压等因素对急性脑梗死有直接作用。 展开更多
关键词 急性脑梗死 C-反应蛋白(crp) 基因多态性
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血浆纤维蛋白单体、D-二聚体、CRP在儿童肺炎支原体肺炎中的临床意义 被引量:4
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作者 孙增贤 高丽娟 +1 位作者 张亚丽 赵中伟 《中国现代医生》 2018年第7期9-12,共4页
目的探讨血浆纤维蛋白单体(FM)、D-二聚体(DD)、CRP在评估小儿肺炎支原体(MP)肺炎病情严重程度及预后中的价值。方法回顾性分析2014年5月~2016年5月本院儿科病房诊断为肺炎支原体肺炎(MPP)的患儿。入院当天采集咽拭子行MP的DNA及大环... 目的探讨血浆纤维蛋白单体(FM)、D-二聚体(DD)、CRP在评估小儿肺炎支原体(MP)肺炎病情严重程度及预后中的价值。方法回顾性分析2014年5月~2016年5月本院儿科病房诊断为肺炎支原体肺炎(MPP)的患儿。入院当天采集咽拭子行MP的DNA及大环内酯类耐药基因检测,根据耐药基因检测结果分为耐药基因阳性组(n=138)和耐药基因阴性组(n=32),分析两组的临床特点及实验室指标。根据治疗效果及预后将耐药基因阳性组患儿分为治疗有效组(n=110)和无效组(n=28),检测并比较两组初始及治疗72 h后血浆FM、DD及CRP水平。结果耐药基因阳性组中咳嗽持续时间、总发热时间、住院时间更长,血浆FM、DD、CRP更高,双侧大叶性肺实变发生率更高,差异有统计学意义(P<0.05);有效组和无效组初始血浆FM、DD和CRP水平比较差异无统计学意义(P>0.05);无效组治疗72 h后血浆FM、DD和CRP值较有效组高,差异有统计学意义(P<0.05);有效组治疗后FM、DD和CRP值较治疗前明显改善(P<0.05);而无效组治疗前后改善不明显(P>0.05)。结论血浆FM、DD、CRP水平变化对肺炎支原体肺炎病情评估及预后判断具有一定的指导意义,治疗后血浆FM、DD和CRP水平能否有效改善对患儿预后评估有重要意义。 展开更多
关键词 血浆纤维蛋白单体 D-二聚体 crp 肺炎支原体肺炎 肺炎支原体耐药基因检测
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调控蛋白CRP和FNR对青霉素G酰化酶基因表达的影响 被引量:1
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作者 蒋岚 杨胜利 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期109-114,共6页
青霉素G酰化酶的表达受多种因素的调控。利用crp和fnr基因缺陷型菌株研究了葡萄糖阻遏和氧调控的机制。结果表明:FNR对pac表达不起调控作用,CRP对pac基因表达有正调控作用,并且CRP的结合位点位于结构基因上游的DNA序列上。随后,测定结... 青霉素G酰化酶的表达受多种因素的调控。利用crp和fnr基因缺陷型菌株研究了葡萄糖阻遏和氧调控的机制。结果表明:FNR对pac表达不起调控作用,CRP对pac基因表达有正调控作用,并且CRP的结合位点位于结构基因上游的DNA序列上。随后,测定结构基因上游调控区的DNA序列,发现可能的CRP蛋白结合位点的同源保守序列为TGTGA。 展开更多
关键词 青霉素G酰化酶 crp蛋白 FNR蛋白 基因调控
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鼠伤寒沙门菌cya基因的克隆表达及生物信息学分析
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作者 茹鹏辉 路霞 +4 位作者 陈耀华 廖成水 余祖华 程相朝 张春杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第6期1948-1956,共9页
研究旨在克隆鼠伤寒沙门菌cya基因并对其进行生物信息学分析。以鼠伤寒沙门菌SL1344株为模板PCR扩增并克隆了鼠伤寒沙门菌cya基因,构建原核表达质粒pET-32a-cya,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG对其进行诱导表达、纯化... 研究旨在克隆鼠伤寒沙门菌cya基因并对其进行生物信息学分析。以鼠伤寒沙门菌SL1344株为模板PCR扩增并克隆了鼠伤寒沙门菌cya基因,构建原核表达质粒pET-32a-cya,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG对其进行诱导表达、纯化,同时利用相关的生物信息学软件对其进行生物信息学分析。结果显示,鼠伤寒沙门菌cya基因大小为1185 bp。经SDS-PAGE和Western blotting分析显示,在原核表达系统中主要以包涵体形式存在,蛋白分子质量大小约为58 ku。生物信息学分析表明,Cya蛋白由394个氨基酸组成,理论分子质量为44.97 ku,分子式为C2026H3146N562O578S11,等电点(pI)为7.01,其中带负电荷残基总数(Asp+Glu)43个,带正电荷残基总数(Arg+Lys)42个。Cya蛋白无信号肽与跨膜区,为膜内蛋白,含有4个N-糖基化位点、1个O-糖基化位点、27个磷酸化位点、13个线性B细胞结合位点、11个T细胞结合位点。二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲所占比例分别为38.07%、19.80%、5.58%和36.55%。本试验结果为进一步研究鼠伤寒沙门菌Cya蛋白的功能及建立以Cya蛋白为抗原的免疫鉴别检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 cya基因 原核表达 生物信息学分析
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冠心病患者C-反应蛋白+1444C/T基因多态性的研究 被引量:12
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作者 赵磊 周新 +2 位作者 郑芳 汤冬玲 孙小波 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期637-640,共4页
目的探讨中国汉族人群C反应蛋白(CRP)+1444C/T基因多态性与CRP水平及冠心病(CHD)的关系。方法提取128例CHD患者(至少1支冠状动脉直径狭窄≥50%)和119例对照者的基因组DNA,采用PCR限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法检测CRP+1444C/T基因... 目的探讨中国汉族人群C反应蛋白(CRP)+1444C/T基因多态性与CRP水平及冠心病(CHD)的关系。方法提取128例CHD患者(至少1支冠状动脉直径狭窄≥50%)和119例对照者的基因组DNA,采用PCR限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法检测CRP+1444C/T基因多态性,同时测定血清超敏CRP(hsCRP)及血脂水平。结果湖北地区汉族人群中存在CRP+1444C/T多态性,在冠心病组中基因型分布为:CC型89.1%,CT型10.9%,对照组分别为89.9%和10.1%。CHD组和对照组之间的基因型频率和等位基因频率均无显著性差异(P>0.05),但血清CRP水平在对照组不同基因型之间有显著性差异(P<0.05)。结论CRP+1444C/T基因多态性与正常人CRP水平高度相关,但未发现其与湖北汉族人群CHD发病有关。 展开更多
关键词 C-反应蛋白 基因多态性 冠心病
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炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)检测质粒的构建及其应用 被引量:1
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作者 吕和平 闵勇 +3 位作者 杨东明 郑应华 李旭 武轶 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期38-41,共4页
根据炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)毒性质粒pX01和pX02上的2个毒力相关基因cya和capA的序列特点,以pIJ2925为出发载体,采用一步重叠延伸PCR技术(One-step Overlap Extension PCR,简称OOE-PCR)构建了包含cya基因和capA基因保守区DNA... 根据炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)毒性质粒pX01和pX02上的2个毒力相关基因cya和capA的序列特点,以pIJ2925为出发载体,采用一步重叠延伸PCR技术(One-step Overlap Extension PCR,简称OOE-PCR)构建了包含cya基因和capA基因保守区DNA片段的炭疽检测质粒pBIB2006。采用复合PCR对模拟炭疽危险品进行分析,结果表明pBIB2006可以为炭疽芽胞杆菌的检测提供准确、安全和方便的阳性参照品,从而为检测炭疽芽胞杆菌和炭疽芽胞杆菌灭活疫苗提供了便利。 展开更多
关键词 炭疽芽胞杆菌 cya基因 capA基因 OOE—PCR
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不稳定型心绞痛患者C-反应蛋白基因多态性与其血清水平的相关性 被引量:1
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作者 杨海涛 何国平 +2 位作者 戚传平 许联红 钱亿超 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1246-1249,共4页
目的:探讨中国苏南地区汉族人群不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris,UAP)患者C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)基因+1444C/T多态性与其血清CRP水平的相关性。方法:本研究包括172例不稳定型心绞痛患者(UAP组)和230例非冠心病者... 目的:探讨中国苏南地区汉族人群不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris,UAP)患者C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)基因+1444C/T多态性与其血清CRP水平的相关性。方法:本研究包括172例不稳定型心绞痛患者(UAP组)和230例非冠心病者(对照组),分别应用酶联免疫吸附法和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测血清CRP水平及CRP基因+1444C/T多态性。结果:①本研究人群存在CRP基因+1444C/T多态性;②UAP患者血清CRP水平(8.269/9.179μg/ml)显著高于非冠心病者(3.578/2.236μg/ml)(P<0.001),且经多因素Logistic回归校正各影响因素后,仍提示血清CRP水平与UAP发病风险相关;③血清CRP水平在UAP组与对照组各基因型之间无显著差异(P>0.05),进一步按性别和年龄分组后,仍未发现该基因多态性不同基因型间的血清CRP水平有任何差异(P>0.05)。结论:中国苏南地区汉族人群CRP+1444C/T基因多态性与血清CRP水平无相关性。 展开更多
关键词 不稳定型心绞痛 C-反应蛋白 基因多态性 +1444C/T 血清crp水平
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冠心病患者CD14基因多态性与高敏C反应蛋白水平的关系 被引量:2
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作者 洪本谷 徐耕 +1 位作者 应志强 金国栋 《浙江医学》 CAS 2008年第2期110-112,共3页
目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者血白细胞分化抗原14(CD14)基因C(260)T多态性与血清高敏C反应蛋白(Hs-CRP)水平的关系。方法对240例冠心病患者应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RELP)技术检测CD14基因多态... 目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者血白细胞分化抗原14(CD14)基因C(260)T多态性与血清高敏C反应蛋白(Hs-CRP)水平的关系。方法对240例冠心病患者应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RELP)技术检测CD14基因多态性并测定Hs-CRP水平,分析两者之间的关系。结果240例冠心病患者CD14基因C(260)T多态性:呈TT基因型106例(44.2%)、TC基因型82例(34.1%)、CC基因型52例(21.7%)。Hs-CRP水平:TT基因型患者Hs-CRP(4.5±2.1)mg/L与TC基因型患者[(2.7±1.2)mg/L]及CC基因型患者[(2.9±1.1)mg/L]比较差异有统计学意义(t=10.10、8.85,均P<0.05);Hs-CRP>3.0mg/L的TT基因型高危患者占79.2%,与TC基因型高危患者(50.0%)及CC基因型高危患者(36.5%)比较,差异有统计学意义(χ2=17.75、28.04,均P<0.05)。结论T等位基因纯合子可能是冠心病炎症反应的独立影响因素,CD14基因变异可能与冠心病炎症反应有关。 展开更多
关键词 冠心病 CD14 基因多态性 HS-crp
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C-反应蛋-白717 A>G多态性与2型糖尿病的相关性 被引量:2
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作者 石峻 丁秀荣 +2 位作者 殷华 夏静 郑永强 《中国实验诊断学》 2008年第3期358-360,共3页
目的研究C-反应蛋-白717 A>G多态性与河北唐山地区人群2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法应用PCR-RFLP方法对127名T2DM患者和155名健康对照者(NC)行CRP-717 A>G基因型检测,并测身高、体重、血脂、FPG、HbA1c和hs-CRP。结果两组间GA+G... 目的研究C-反应蛋-白717 A>G多态性与河北唐山地区人群2型糖尿病(T2DM)的相关性。方法应用PCR-RFLP方法对127名T2DM患者和155名健康对照者(NC)行CRP-717 A>G基因型检测,并测身高、体重、血脂、FPG、HbA1c和hs-CRP。结果两组间GA+GG基因型及G等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。AA基因型个体甘油三脂水平显著高于GA+GG型个体(P=0.014),但这种关系只限于T2DM患者。结论CRP-717 A>G基因多态性与该人群T2DM无相关性。该基因型与T2DM患者甘油三脂水平有关,可能影响糖尿病患者的脂代谢过程。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 G反应蛋白 基因多态性
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冠心病患者CD14基因多态性与超敏C反应蛋白水平的相关性研究 被引量:1
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作者 熊小泉 李艳 +1 位作者 黄宪章 石文 《四川医学》 CAS 2009年第8期1313-1315,共3页
目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者血白细胞分化抗原14(CD14)基因C(-260)T多态性与血清超敏C反应蛋白(Hs-CRP)水平的关系。方法对240例冠心病患者应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测CD14基因多... 目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者血白细胞分化抗原14(CD14)基因C(-260)T多态性与血清超敏C反应蛋白(Hs-CRP)水平的关系。方法对240例冠心病患者应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测CD14基因多态性并测定Hs-CRP水平,分析两者之间的关系。结果240例冠心病患者CD14基因C(-260)T多态性:呈TT基因型106例(44.2%)、TC基因型82例(34.1%)、CC基因型52例(21.7%)。Hs-CRP水平:TT基因型患者Hs-CRP(4.5±2.1)mg/L与TC基因型患者[(2.7±1.2)mg/L]及CC基因型患者[(2.9±1.1)mg/L]比较差异有统计学意义(t=10.10、8.85,均P<0.05):Hs-CRP>3.0mg/L的TT基因型高危患者占79.2%,与TC基因型高危患者(50.00%)及CC基因型高危患者(36.5%)比较,差异有统计学意义(χ2=17.75、28.04,均P<0.05)。结论T等位基因纯合子可能是冠心病炎症反应的独立影响因素,CD14基因变异可能与冠心病炎症反应有关。 展开更多
关键词 冠心病 CD14 基因多态性 Hs.crp
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