大粒车前子多糖组分PLP-1的结构表征

研究了由大粒车前子多糖分离纯化所得组分PLP-1的一级精细结构特征.通过单糖组成分析、部分酸水解及甲基化分析,并结合NMR,GC和GC-MS等技术测定了PLP-1的一级结构.结果表明,PLP-1由Ara(33.98%),Xyl(58.23%),Rha(2.36%),Glc(2.23%),Gal(2.36%)和Man(0.83%)组成,糖醛酸以GlcA形式存在.PLP-1中主要糖残基有α-T-linked Araf(9.58%),β-T-linked Xylp(8.71%),α-1,3-linked Araf(18.22%),β-1,3-linked Xylp(8.05%),β-1,4-linked Xylp(5.85%),β-1,2,4-linked Xylp(16.98%)和β-1,3,4-linked Xylp(27.52%),GlcA以α-T-linked GlcAp形式存在;此外还有1,2-linked Rhap,T-linked Glcp,1,6-linked Glcp,T-linked Galp,1,3-linked Galp和1,3,6-linked Galp等少量其它残基.根据所得结果推断出PLP-1可能的一级结构.

大粒车前子多糖对脂多糖刺激RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

采用脂多糖构建RAW264.7巨噬细胞炎症模型,研究大粒车前子多糖的抗炎作用。培养巨噬细胞RAW264.7,利用脂多糖构建细胞炎症模型,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;酶联免疫吸附法检测车前子精制多糖(Plantago asiatica L.crude polysaccharide,PLCP)处理前后细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和IL-6的分泌量,Griess反应测定RAW264.7细胞释放NO水平。结果表明,PLCP可显著抑制RAW264.7炎症细胞的吞噬活性,降低炎症细胞因子TNF-α、IL-10和IL-6的分泌量及NO的释放量。

车前子中多糖含量的测定

采用蒽酮-硫酸法比色测定,用精制车前子多糖测得车前子多糖对葡萄糖的换算因子,对我国同属不同品种的车前子不同采集时间及炮制前后其多糖含量进行了比较研究。结果表明:此测定方法简便可行,供试液在8h内显色稳定,重现性较好,平均回收率为97.8%,RSD=1.41%(n=5)。江西吉安产大粒车前子生品多糖含量在9.15%～9.83%之间,炮制后其多糖含量在6.29%～6.81%之间;南昌新祺周车前GAP标准基地的大粒车前子生品多糖含量为7.85%～8.38%,炮制后其多糖含量为6.01%～6.64%;东北产的小粒车前子生品多糖含量为6.61%,炮制后其多糖含量为6.45%。

乙酰化大粒车前子多糖的制备及其活性研究

为进一步探讨植物多糖结构与活性之间的关系，采用乙酸酐为乙酰化试剂，以大粒车前子多糖（PLP）为原料，制得乙酰化修饰大粒车前子多糖（Ac—PLP）。考察乙酸酐剂量、反应温度、反应时间对此乙酰化修饰反应的影响，并通过正交试验确定最适反应条件为乙酸酐体积分数10％、反应温度30℃、反应时间2．5h。进一步在体外树突状细胞模型中研究发现，当取代度在0．06～0．1范围内时，乙酰化修饰大粒车前子多糖促进树突状细胞分泌细胞因子IL-12p70的能力较强，且在取代度0．08左右时达到最大。本研究结果提示对大粒车前子多糖进行乙酰化修饰可作为其改性方向，为大粒车前子多糖功能性产品开发提供了相应的理论依据。

羧甲基化大粒车前子多糖的制备及其生物活性研究

研究以氢氧化钠和一氯乙酸对大粒车前子多糖进行羧甲基化修饰的条件，同时采用体外树突状细胞模型评价了羧甲基化大粒车前子多糖的生物活性。在单因素试验基础上，通过正交试验进一步确定了最适修饰反应条件为NaOH溶液浓度4．5mol／L、一氯乙酸剂量2．835g、反应温度50℃。体外细胞实验研究表明：当羧甲基取代度在0．5～0．6范围内时，羧甲基化修饰能够显著增强大粒车前子多糖促进树突状细胞分泌细胞因子IL-12p70的功效。对大粒车前子多糖进行羧甲基修饰可提高其生物活性，为大粒车前子多糖羧甲基化衍生物的开发应用提供了理论依据。

微波技术用于车前子多糖的提取

为保持车前子多糖的生物活性,提高得率,采用微波技术提取车前子多糖。通过正交试验确定了微波提取的最佳工艺参数,用该法提取所得车前子多糖采用蒽酮-硫酸法测定其多糖含量。结果表明,微波提取车前子多糖的最佳工艺参数为:车前子与水的质量比为1:15,在微波强度为60%的条件下提取65s。与其它方法比较,微波提取方法时间短,得率高,是车前子多糖提取的一种优选方法。

车前草多糖微波提取工艺研究

为探讨车前草多糖提取率的影响因素,本实验利用微波辅助提取法,以车前草多糖提取率为指标,通过对料液比、微波功率、微波处理时间、浸提温度进行单因素实验,并在此基础上进行正交实验。结果表明,影响车前草多糖提取率的因素顺序为:微波处理时间>料液比>浸提温度>微波功率。车前草多糖的最佳提取工艺为料液比1∶25(g/mL)、微波功率为450W、微波处理时间4min、浸取温度为70℃。在此条件下,车前草多糖的提取率为9.41%±0.23%。该法提取的车前草多糖提取率高,且节省时间。

车前草多糖的脱色工艺研究

以脱色率和多糖保留率为指标,采用活性炭和大孔吸附树脂两种方法对车前草多糖脱色。结果表明,活性炭脱色的最佳条件为:在60℃下,加入0.75%(m/V)的活性炭,脱色30 min,在此工艺条件下脱色率为76.22%,多糖保留率为65.31%。大孔吸附树脂脱色的最佳条件是:以蒸馏水为洗脱剂,样液pH值为8.0,洗脱流速为2 mL/min,洗脱液体积为3 BV(1 BV=20 mL),在此工艺条件下脱色率为79.78%,多糖保留率为89.76%。大孔吸附树脂脱色效果优于活性炭脱色效果。

大粒车前子多糖乙醇分级及其理化性质研究

采用热水法从大粒车前子中提取、分离出多糖(Plantago asiaticaL.crude polysaccharide,PLCP),加水复溶后依次用40%和60%乙醇分级,得到不同级分多糖(PLCP-1和PLCP-2),上清液部分记为PLCP-3。凝胶柱层析法考察PLCP-1、PLCP-2和PLCP-3凝胶色谱行为,GC测定单糖组成,红外和紫外光谱检测光谱性质,并测定糖含量、糖醛酸含量和蛋白含量。结果表明:PLCP-1、PLCP-2和PLCP-3均为酸性多糖,蛋白含量较低,其糖含量依次为71.06%、76.71%和64.78%。紫外和红外测定结果显示,PLCP-1、PLCP-2和PLCP-3均为酸性多糖,且含有一定量的蛋白。PLCP-1、PLCP-2和PLCP-3主要含有阿拉伯糖和木糖,还有少量的鼠李糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖等,但具体摩尔组成比例相差较大。

大粒车前子多糖分离、纯化及单糖组成分析

沸水法提取得到的大粒车前子粗多糖经过Sevag法脱蛋白后,运用生物大分子纯化系统(AKTA Purifier 100),采用凝胶柱层析法分离、纯化,得到一多糖组分(PLP,Plantago asiatica L.polysaccharide)。应用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)分析PLP纯度并测定其相对分子质量。气相色谱-质谱(GC-MS)联用分析PLP单糖组成。结果表明,PLP为均一多糖,其相对分子量约891.3kD。PLP主要由阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖构成,其摩尔比为5.6:9.4:1.3:1。:

大粒车前子多糖对树突状细胞分泌不同类型细胞因子的影响

初步探讨大粒车前子精制多糖(PL-PS)对树突状细胞分泌不同类型细胞因子的影响。通过体外细胞因子联合诱导培养小鼠骨髓细胞获得树突状细胞(DCs)。经免疫磁珠分选法纯化获取CD11c+树突状细胞,经不同浓度PL-PS刺激24 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中细胞因子IL-12p70、IL-10及IL-1β含量。结果表明:在质量浓度25～100μg/mL范围内,PL-PS均以剂量依赖的方式上调DCs分泌IL-12p70和IL-1β水平、下调IL-10的分泌水平。可因此得出推论:PL-PS能够通过调控DCs分泌Th1、Th2型细胞因子及趋化因子水平,诱导Th1型细胞免疫应答。

大粒车前子多糖成胶性能

采用水提醇沉结合Sevag法脱蛋白,制备得到大粒车前子多糖(PLCP),然后考察多糖质量浓度及NaCl和CaCl2的添加对PLCP成胶性能的影响。结果表明:PLCP具有一定的成胶性能,增加多糖质量浓度能显著提高PLCP成胶性能;CaCl2在低浓度下便能提高PLCP的成胶性能,提高胶的热稳定性,而NaCl需要在较高浓度下才能促进PLCP的成胶性。

大粒车前子多糖结构特征对调节小鼠肠道功能的影响

车前子多糖具有较好的肠道调节功能,然而,有关不同结构特征对调节肠道功能影响研究很少。本文以大粒车前子为研究对象,从中分别提取高黏性阿拉伯木聚糖(PLCP),低黏性阿拉伯木聚糖(PLCP-M)和(PLWE-H),以及非阿拉伯木聚糖类多糖组分PLWE-L,利用体内动物试验结合相关肠道健康功能指标分析,明确大粒车前子不同结构类型多糖对其肠道功能的影响。结果表明,非阿拉伯木聚糖(PLWE-L)的摄入可显著增加小鼠结肠、盲肠内容物中短链脂肪酸的浓度,同时增加粪便含水量。高黏度的PLCP更容易在结肠中发挥作用,包括促进结肠中总短链脂肪酸浓度的增加及降低pH值,同时有利于提高持水力,而低黏性组分PLCP-M和PLWE-L更易在盲肠中发挥相应的作用。车前子中不同结构特征组分在调节小鼠肠道功能方面存在差异。本研究将为车前子多糖肠道健康功能的深入研究提供理论支持,以期为进一步开发相关肠道保健产品提供理论依据。

大孔吸附树脂法去除车前草粗多糖中的蛋白质

研究AB-8大孔树脂法去除车前草粗多糖中蛋白质的适宜条件。采用动态吸附和解析实验对树脂纯化工艺进行优化。结果表明适宜工艺条件为:上样液浓度40mg/mL,上样流速0.5 mL/min,上样液pH值7.0;以蒸馏水为洗脱剂,洗脱速度2 mL/min,洗脱体积2.5BV(1BV=20 mL)。纯化后AB-8大孔吸附树脂对车前草粗多糖中的蛋白具有较高的去除效果,蛋白去除率为84.83%,多糖保留率为88.32%。

大粒车前子多糖及其铈配合物对磷酯键的水解作用

以大粒车前子多糖(PLCP)为配体与四价铈(Ce4+)结合,形成水溶性的大粒车前子多糖铈配合物(Ce-PLCP),并就该配合物及其配体对磷酯键的水解作用进行比较研究。结果表明:Ce-PLCP对对硝基苯磷酸二钠的表观水解速率常数达1.03×10-2min-1,而PLCP的表观水解速率常数仅为4.27×10-4min-1;Ce-PLCP对某些有机磷农药也有较好的水解效果,在48h内对乐果、氧化乐果、毒死蜱及敌敌畏的水解率分别为74.97%、69.57%、46.11%及44.17%,而PLCP对有机磷农药的水解效果都不及Ce-PLCP。

车前草粗多糖对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫增强作用

为研究车前草粗多糖对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫增强作用,自车前草中提取粗多糖,将昆明小鼠分为正常组、模型组、车前草粗多糖高、中、低剂量组及左旋咪唑组,每组10只。除正常组外,其余小鼠通过腹腔注射环磷酰胺(80 mg/kg)造成免疫低下模型。造模成功后,车前草粗多糖高、中、低剂量组分别灌胃900、300、100 mg/kg的车前草粗多糖;左旋咪唑组灌胃25 mg/kg;正常及模型对照组小鼠灌胃等体积的蒸馏水。给药21 d后,考察小鼠血清中溶血素水平,炭粒廓清功能及迟发型变态反应,监测小鼠体重并计算其脾脏与胸腺指数。结果表明,适宜浓度的车前草多糖能明显提高免疫低下小鼠的廓清指数,增强其炭粒廓清功能,增强免疫低下小鼠迟发型变态反应,提高其血清中溶血素水平,且对模型小鼠的体重减轻、脾脏与胸腺萎缩有缓解作用。本研究表明,车前草粗多糖可增强免疫低下小鼠的免疫功能。

车前子多糖凝胶性能及其“类制剂”配伍作用研究

目的:探究车前子多糖凝胶性能,及其基于“类制剂”思路在中药配伍中的作用特点。方法:首先研究不同环境条件对车前子多糖凝胶性能的影响;然后基于人工神经网络模型考察车前子多糖配伍黄酮成分(芦丁、槲皮素、木樨草苷、木樨草素)的水溶解性变化及稳定性的影响;最后采用相溶解度法研究二者相互作用机制。结果:车前子多糖黏度和丁达尔效应受浓度影响较大;车前子多糖可自发地与4种黄酮单体成分形成1∶1包合物,显著增强其稳定性与溶解性。结论:车前子多糖具备剪切变稀的凝胶特性,配伍黄酮成分后,二者之间形成热力学稳定的药物复合体系,从而发挥其“类制剂”作用,显著提高黄酮成分的生物利用度。