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Cotton Plants Transformed with the Activated Chimeric Cry1Ac and API-B Genes 被引量:12
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作者 郭洪年 吴家和 +6 位作者 陈晓英 罗晓丽 卢睿 石跃进 秦红敏 肖娟丽 田颖川 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2003年第1期108-113,共6页
A chimeric gene, Bt29K, composed of coding sequences of activated Cry1Ac insecticidal protein and an endoplasm reticulum-retarding signal peptide, was synthesized. A plant expression vector containing two expression c... A chimeric gene, Bt29K, composed of coding sequences of activated Cry1Ac insecticidal protein and an endoplasm reticulum-retarding signal peptide, was synthesized. A plant expression vector containing two expression cassettes for the Bt29K and API-B genes was constructed. These two insect-resistant genes were transferred into two cotton ( Gossypium hirsutum L.) varieties ( or lines) via Agrobacterium-mediated transformation and nine homozygous transgenic cotton lines showing a mortality of 90.0% - 99.7% to cotton ballworm (Heliothis armigera) larvae and good agronomic traits were selected through six generations. Molecular biology analysis revealed that one or two copies of the insecticidal protein genes were integrated into the transgenic cotton genome and activated Cry1Ac and API-B protein expression was at a level of 0.17% and 0.09% of the total soluble protein in the transgenic cotton leaves, respectively. Comparison of the insect-resistance of the homozygous lines expressing the activated chimeric Cry1Ac and API-B with that expressing Cry1Ac only revealed that the insect-resistance of the former is apparently higher than the latter. These results also indicate that the strategy to construct a plant expression vector expressing two different insect-resistant genes reported here is reasonable. 展开更多
关键词 synthetic chimeric cry1ac gene arrowhead proteinase inhibitor gene insect-resistant transgenic cotton plants
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Obtaining High Pest_resistant Transgenic Upland Cotton Cultivars Carrying cry1Ac3 Gene Driven by Chimeric OM Promoter 被引量:5
2
作者 陈宛新 肖桂芳 朱祯 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第8期963-970,共8页
Hypocotyl segments from aseptic seedlings of two important cultivars of upland cotton ( Gossypium hirsutum L.) in Northwest China, 'Xinluzao_1', 'Jinmian_7', 'Jinmian_12' and 'Jihe_321&#... Hypocotyl segments from aseptic seedlings of two important cultivars of upland cotton ( Gossypium hirsutum L.) in Northwest China, 'Xinluzao_1', 'Jinmian_7', 'Jinmian_12' and 'Jihe_321' were transformed respectively by two efficient plant expression plasmids pBinMoBc and pBinoBc via Agrobacterium tumefaciens . In pBinMoBc, cry 1Ac3 gene, which encodes the Bt toxin, is under the control of chimeric OM promoter. In pBinoBc, it is under control of CaMV 35S promoter. After co_cultivation with Agrobacterium tumefimpfaciens LBA4404 (containing pBinMoBc or pBinoBc), kanamycin_resistant selection, somatic embryos were induced and regenerated plants were obtained. Then the regenerated plantlets were grafted to untransformed stocks in greenhouse to produce descendants. The integration of cry 1Ac3 gene and its expression in T 2 generation of transgenic cotton plants were confirmed by Southern hybridization and Western blotting. The analyses of insect bioassay indicated that the transgenic plants of both constructions have significant resistance to the larvae of cotton bollworm ( Heliothis armigera ) and that cry 1Ac3 gene driven by chimeric OM promoter could endue T 2 generation cotton with high pest_resistant ability, implicating that it has a profound application in genetic engineering to breed new pest_resistant cotton varieties. 展开更多
关键词 upland cotton insect_resistant cotton transgenic plant Agrobacterium tumefaciens cry 1Ac3 gene chimeric promoter
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转基因双价抗虫棉中Cry1Ac基因与CpTI基因的共表达 被引量:12
3
作者 康保珊 张锐 +2 位作者 潘登奎 王远 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期131-136,共6页
以转基因双价抗虫棉自交后代为材料,利用PCR、Southern杂交、ELISA检测方法,分析了Cry1Ac基因与CpTI基因在基因组中的整合情况,结果显示,除sGK321和3517外,其余品种Cry1Ac基因和CpTI基因的整合位点不同,并且sGK321中两基因也只有一个位... 以转基因双价抗虫棉自交后代为材料,利用PCR、Southern杂交、ELISA检测方法,分析了Cry1Ac基因与CpTI基因在基因组中的整合情况,结果显示,除sGK321和3517外,其余品种Cry1Ac基因和CpTI基因的整合位点不同,并且sGK321中两基因也只有一个位点相同;ELISA结果表明,同一个品种同一部位Cry1A蛋白和CpTI蛋白不能完全同步表达,它们的表达量存在差别,且这种差别在整个生长阶段并不稳定。 展开更多
关键词 CPTI基因 双价抗虫棉 Ac基因 转基因 Southern杂交 共表达 SGK321 ELISA 自交后代 检测方法 整合位点 完全同步 生长阶段 PCR 基因组 A蛋白 表达量 不稳定 品种 差别
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农杆菌介导Cry1Ac基因转化菊花 被引量:18
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作者 蒋细旺 包满珠 +2 位作者 吴家和 张献龙 田颖川 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期65-69,共5页
用农杆菌介导法,以茎段(节间)为外植体,将含有苏云金芽孢杆菌(Bt)毒蛋白Cry1Ac基 因的植物遗传载体导入菊花(切花菊)品种‘日本黄’中,得到126株抗性植株,PCR检测及基因组DNA 的Southern杂交分析表明Cry1Ac基因已整合到菊花总DNA... 用农杆菌介导法,以茎段(节间)为外植体,将含有苏云金芽孢杆菌(Bt)毒蛋白Cry1Ac基 因的植物遗传载体导入菊花(切花菊)品种‘日本黄’中,得到126株抗性植株,PCR检测及基因组DNA 的Southern杂交分析表明Cry1Ac基因已整合到菊花总DNA中,共获得6株转基因植株。利用棉铃虫做转基 因植株的盆栽和叶片平皿试验,发现其中2株对棉铃虫具有很高抗性,校正死亡率达90%以上;1株对棉 铃虫具有高抗性,校正死亡率达80%以上;3株对棉铃虫抗性较明显,校正死亡率44.7%~60.9%。 展开更多
关键词 菊花 苏云金芽孢杆菌 cry1ac基因 抗虫性 转基因植株 棉铃虫 根癌农杆菌
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根癌农杆菌介导Cry1Ac基因转化‘雪青’梨获得转基因植株 被引量:10
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作者 汤绍虎 孙敏 +2 位作者 廖志华 周启贵 李道高 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期59-62,共4页
以‘雪青’梨叶片愈伤组织为外植体,经根癌农杆菌介导将CaMV35S启动子调控下的Cry1Ac基因导入‘雪青’梨。698块愈伤组织和231个Kanr芽与携带表达载体质粒pBX203的根癌农杆菌菌株LBA4404共培养3d后,转入含50mg.L-1Kan的筛选培养基培养30... 以‘雪青’梨叶片愈伤组织为外植体,经根癌农杆菌介导将CaMV35S启动子调控下的Cry1Ac基因导入‘雪青’梨。698块愈伤组织和231个Kanr芽与携带表达载体质粒pBX203的根癌农杆菌菌株LBA4404共培养3d后,转入含50mg.L-1Kan的筛选培养基培养30d,15d转接1次。结果表明,在MS+5mg.L-16-BA+0.1mg.L-1IAA筛选培养基中,Kanr芽率为34.24%,在1/2MS+2mg.L-1IBA+0.5mg.L-16-BA+500mg.L-1AC筛选培养基中,15.58%Kanr芽生根。共获得再生植株32株,经PCR和Southern-blot分析证明,其中4株的基因组已成功导入和整合Cry1Ac基因。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 cry1ac基因 遗传转化
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修饰的cry1Ac基因导入籼稻明恢81获得抗虫纯合系 被引量:13
6
作者 曾千春 吴茜 +5 位作者 周开达 冯德江 王锋 苏军 IAltosaar 朱祯 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第6期519-524,共6页
采用细胞内定位技术对cry1Ac基因进行修饰 ,其表达产物定位于内质网及衍生自内质网的蛋白体。通过基因枪法成功地将经过修饰的cry1Ac基因导入到优良杂交籼稻恢复系明恢 81中。对潮霉素抗性植株的PCR和Southern检测及ELISA分析证实 ,修饰... 采用细胞内定位技术对cry1Ac基因进行修饰 ,其表达产物定位于内质网及衍生自内质网的蛋白体。通过基因枪法成功地将经过修饰的cry1Ac基因导入到优良杂交籼稻恢复系明恢 81中。对潮霉素抗性植株的PCR和Southern检测及ELISA分析证实 ,修饰的cry1Ac基因已整合到受体水稻品种中并得以表达 ,自交加代结合潮霉素筛选于T2 代获得转基因纯合系。抗虫性测试表明 ,部分转基因纯合系高抗二化螟 (Chilosuppressalis)。 展开更多
关键词 基因导入 籼稻 明恢81 抗虫纯合系 cryl Ac基因 抗虫基因 转基因水稻 基因枪法 生物检测
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大肠杆菌中利用苏云金芽胞杆菌强启动子p1Ac指导Cry1Ac蛋白表达的特性分析 被引量:4
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作者 马君兰 束长龙 +3 位作者 刘东明 张杰 宋福平 黄大昉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期80-84,共5页
对利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)强启动子——cry1Ac基因启动子p1Ac指导cry基因在大肠杆菌中的表达进行了研究。结果显示,大肠杆菌中由启动子p1Ac指导表达的Cry1Ac蛋白与苏云金芽胞杆菌来源的Cry1Ac蛋白在碱溶性、胰... 对利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)强启动子——cry1Ac基因启动子p1Ac指导cry基因在大肠杆菌中的表达进行了研究。结果显示,大肠杆菌中由启动子p1Ac指导表达的Cry1Ac蛋白与苏云金芽胞杆菌来源的Cry1Ac蛋白在碱溶性、胰蛋白酶活化、杀虫活性等方面有较好的一致性,从而解决了目前商业化载体大肠杆菌表达cry基因时形成不易溶解的包涵体问题。同时,还对p1Ac指导的cry1Ac基因在大肠杆菌中表达的发酵条件进行了初步探索。 展开更多
关键词 cry1ac基因启动子p1Ac 大肠杆菌 cry1ac蛋白 表达 发酵条件
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转Bt-Cry1Ac基因棉花对烟粉虱体内几种酶活力的影响 被引量:4
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作者 胡其靖 周福才 +5 位作者 杨益众 杨爱民 张建军 何菁 周建华 邵久之 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1079-1085,共7页
为研究转Bt基因棉花上烟粉虱种群较常规棉上升的原因是否受到Bt毒蛋白的影响,以及是否与体内保护酶和解毒酶活力变化有关,应用转Bt基因棉花‘新棉33B’及其常规棉受体‘33’为试验对象,采用ELISA法和酶活力测定法,分别研究了取食转Bt基... 为研究转Bt基因棉花上烟粉虱种群较常规棉上升的原因是否受到Bt毒蛋白的影响,以及是否与体内保护酶和解毒酶活力变化有关,应用转Bt基因棉花‘新棉33B’及其常规棉受体‘33’为试验对象,采用ELISA法和酶活力测定法,分别研究了取食转Bt基因棉花后烟粉虱体内Bt毒蛋白含量以及体内过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)3种保护酶和乙酰胆碱酯酶(AChE)、羧酸酯酶(CarE)和谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)3种解毒酶活力的变化情况。结果表明,在取食转Bt基因棉花‘新棉33B’4 h后,烟粉虱体内能检测到Cry1Ac蛋白,并且在12 h后维持在一个相对稳定的状态。取食‘新棉33B’后烟粉虱体内的SOD和GSTs活力受到显著抑制(P<0.05),并且随着取食时间的延长,SOD活力逐渐下降,其中取食8 h、12 h、24 h和36 h后较取食‘33’的对照分别下降了37.8%、32.1%、32.0%和31.9%。CAT、POD和CarE活力显著提高(P<0.05),并且随着取食时间的延长,酶活力逐渐上升,与对照相比,取食12 h、24 h和36 h后,CAT活力分别为取食‘33’的对照的1.54倍、1.55倍和1.42倍;POD活力分别为取食‘33’的对照的1.59倍、1.39倍和1.53倍;CarE活力分别为取食‘33’的对照的1.32倍、1.34倍和1.39倍;取食‘新棉33B’对AChE活力没有明显影响。结果提示,转Bt-Cry1Ac基因棉花对烟粉虱保护酶活力总体起到促进作用,对解毒酶活力总体影响不大。故烟粉虱体内保护酶活力的增加可能会有益于烟粉虱种群的增长,但是否起到决定性作用还有待进一步研究确定。 展开更多
关键词 烟粉虱 转基因棉花 Bt-cry1ac基因 保护酶 解毒酶
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转Cry1Ac基因抗虫玉米Bt-799对田间节肢动物群落多样性的影响 被引量:8
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作者 尹俊琦 武奉慈 +1 位作者 周琳 宋新元 《生物安全学报》 2017年第2期159-167,共9页
【目的】安全评价是转基因品种研发的重要保障,为明确转基因玉米Bt-799在生物多样性影响方面的安全性,并为其在吉林春玉米区种植提供安全保证,开展了转基因玉米Bt-799对田间节肢动物群落多样性影响的研究。【方法】综合利用直接观察法... 【目的】安全评价是转基因品种研发的重要保障,为明确转基因玉米Bt-799在生物多样性影响方面的安全性,并为其在吉林春玉米区种植提供安全保证,开展了转基因玉米Bt-799对田间节肢动物群落多样性影响的研究。【方法】综合利用直接观察法和地面陷阱法,以多样性指数、均匀度指数、优势度指数等参数以及主要种群动态作为评价指标,系统研究转基因玉米Bt-799对田间节肢动物群落多样性的影响。【结果】转基因玉米Bt-799较之对应的非转基因对照郑58在田间节肢动物群落结构参数、主要种群动态等方面均无显著差异。【结论】转Cry1Ac基因玉米Bt-799在吉林省种植,不会对田间节肢动物群落多样性造成显著不良影响。 展开更多
关键词 cry1ac基因抗虫玉米 节肢动物 群落结构 种群动态
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转Cry1Ac-w基因抗虫玉米的获得及分子鉴定 被引量:3
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作者 燕树锋 铁双贵 +3 位作者 岳润清 韩小花 齐建双 卢彩霞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期41-44,共4页
为将改造合成的抗虫基因(Cry1Ac-w)导入玉米基因组,以玉米杂交组合PA×PB的胚性愈伤组织为外植体,用双丙氨磷作为抗性愈伤组织的筛选剂,通过农杆菌介导法获得了82个再生植株。经标记基因(bar)和目的基因(Cry1Ac-w)的PCR检测,其中19... 为将改造合成的抗虫基因(Cry1Ac-w)导入玉米基因组,以玉米杂交组合PA×PB的胚性愈伤组织为外植体,用双丙氨磷作为抗性愈伤组织的筛选剂,通过农杆菌介导法获得了82个再生植株。经标记基因(bar)和目的基因(Cry1Ac-w)的PCR检测,其中19株为阳性,即为推断的转Cry1Ac-w基因抗虫玉米。对其中2株(w1和w2)进行目的基因单酶切的Southern杂交分析,发现w1和w2分别为单位点和双位点插入,这也进一步证实目的基因已经整合入玉米基因组中。用Bt-Cry1Ab/Ac金标免疫试纸条进行蛋白质表达的检测,初步证实目标Cry1Ac-w蛋白在玉米中得到表达。 展开更多
关键词 玉米 农杆菌介导法 苏云金杆菌(BT) cry1ac-w基因 Southern杂交 免疫检测
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转Bt Cry1Ac基因抗虫棉花外源基因漂移研究 被引量:1
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作者 李海强 李号宾 +5 位作者 王冬梅 汪飞 丁瑞丰 潘洪生 阿克旦.吾外士 刘建 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期277-284,共8页
【目的】研究转Bt Cry1Ac基因棉花外源基因漂移规律,为转基因棉花生态安全性评价提供依据。【方法】2014年在吐鲁番市和2015年在库尔勒市,利用小区试验种植转基因棉花,翌年利用卡那霉素抗性检测结合分子检测的方法检测外源基因的漂移。... 【目的】研究转Bt Cry1Ac基因棉花外源基因漂移规律,为转基因棉花生态安全性评价提供依据。【方法】2014年在吐鲁番市和2015年在库尔勒市,利用小区试验种植转基因棉花,翌年利用卡那霉素抗性检测结合分子检测的方法检测外源基因的漂移。【结果】在距离转基因棉花小区边缘1~120 m均能检测到含有外源基因Cry1Ac。SGK321种子漂移率最大漂移率是向南方向距离转基因棉花小区边缘1 m处,漂移率为5%;GK19最大漂移率是向西方向达到了10.09%。以方向因素和距离因素建立Cry1Ac基因漂移Logistic回归预测模型,方向和距离对种子漂移都有显著影响(P<0.05),但方向和距离两个因子并不能最终决定外源基因的漂移率。【结论】转基因棉花外源基因漂移率受方向和距离的影响,但最终决定外源基因的漂移率,并不是方向和距离联合作用的结果。 展开更多
关键词 转Bt cry1ac基因棉花 基因漂移 安全性评价
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转双价抗虫抗除草剂基因(Cry1Ac+EPSPS)棉与非转基因棉生物学特性差异的研究 被引量:2
12
作者 张兴华 田绍仁 +3 位作者 张天玉 李捷 杨兆光 乔艳艳 《江西农业学报》 CAS 2012年第4期12-16,共5页
以双价抗虫抗除草剂基因(Cry1Ac+EPSPS)棉为观察品种,非转基因棉赣棉11号为对照品种,进行了棉花生育性状、产量性状等的比较和评价研究。结果表明:与对照品种相比,双价抗虫抗除草剂基因棉在成铃至吐絮期株高增长显著(超速6.6~9.1 cm);... 以双价抗虫抗除草剂基因(Cry1Ac+EPSPS)棉为观察品种,非转基因棉赣棉11号为对照品种,进行了棉花生育性状、产量性状等的比较和评价研究。结果表明:与对照品种相比,双价抗虫抗除草剂基因棉在成铃至吐絮期株高增长显著(超速6.6~9.1 cm);在盛铃期之前成铃变缓极显著(少10.7个铃);花铃期至盛铃期果枝层生成慢显著(少1层);果枝角度变大极显著(大2.1°);主茎节距拉长极显著(长0.6 cm);叶色加深显著;衣分率降低极显著(低1.7%);籽指升高极显著(高1.77 g);纤维整齐度指数升高显著(高1.325%);纺纱均匀指数增加显著(增7.5);籽棉、皮棉、霜前籽棉、霜前皮棉均减产极显著。初步评价:双价抗虫抗除草剂基因棉的生育性状、产量性状较差,纤维纺纱性状较好,推广种植性较差。 展开更多
关键词 双价抗虫抗除草剂基因棉 苏云金芽孢杆菌cry1ac基因 5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因 生物学特性
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超声波辅助花粉介导法获得转BtCry1Ac基因玉米的研究 被引量:3
13
作者 南芝润 惠国强 +4 位作者 罗绮 宋红霞 吴家和 孙毅 张红梅 《黑龙江农业科学》 2015年第9期22-25,共4页
为了进一步分析玉米基因功能及基因转化,并为玉米抗虫提供种质资源,利用超声波辅助花粉介导法,将抗虫基因Cry1Ac导入玉米优良自交系昌7-2中,获得大量的转基因植株。结果表明:转基因植株经过草铵膦抗性筛选、PCR检测、BT蛋白试纸条检测... 为了进一步分析玉米基因功能及基因转化,并为玉米抗虫提供种质资源,利用超声波辅助花粉介导法,将抗虫基因Cry1Ac导入玉米优良自交系昌7-2中,获得大量的转基因植株。结果表明:转基因植株经过草铵膦抗性筛选、PCR检测、BT蛋白试纸条检测和室内抗虫性鉴定等分析,最后获得高抗玉米螟的转BtCry1Ac基因株系9个。培育出了高抗玉米螟的种质资源材料,同时也建立了超声波辅助花粉介导转化玉米的高效转化体系,该方法是简捷、快速有效、无基因型限制的植物转化方法。 展开更多
关键词 玉米 cry1ac基因 超声波处理花粉介导法 抗虫性
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Bt4.0718 cry1Ac基因的克隆与表达分析(英文)
14
作者 丁学知 张何 +3 位作者 孙运军 黄潢 张春艳 夏立秋 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第6期563-570,共8页
在基因库中比对14种cry1Ac基因序列,发现了同源性很高的上游启动子区域和下游终止子区域。根据这一同源序列设计引物,从B t4.0718中扩增出包含双启动子和终止子的4.2 kb片段,用PCR-RFLP检测确定其中含有cry1Ac基因。然后将此片段克隆到... 在基因库中比对14种cry1Ac基因序列,发现了同源性很高的上游启动子区域和下游终止子区域。根据这一同源序列设计引物,从B t4.0718中扩增出包含双启动子和终止子的4.2 kb片段,用PCR-RFLP检测确定其中含有cry1Ac基因。然后将此片段克隆到穿梭载体pHT304中,转化大肠杆菌DH5α和B t无晶体突变株XZM-101。同时,利用原子力显微镜观察发现重组菌株BXZM34能够产生菱形晶体。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1ac基因 穿梭载体 重组菌株
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苏云金芽孢杆菌伴孢晶体20kb DNA中cry1Ac基因的克隆、高效表达和生物活性研究 被引量:6
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作者 胡宏源 夏立秋 +3 位作者 史红娟 孙运军 高必达 丁学知 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期656-661,共6页
已经证实苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)伴孢晶体结合 2 0kbDNA ,但其序列特异性及作用有待进一步研究阐明。研究了选择性溶解Bt 4 0 718菌株Cry1类原毒素所形成的菱形伴孢晶体 ,从中抽提出与其结合的 2 0kbDNA。经NdeⅠ... 已经证实苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)伴孢晶体结合 2 0kbDNA ,但其序列特异性及作用有待进一步研究阐明。研究了选择性溶解Bt 4 0 718菌株Cry1类原毒素所形成的菱形伴孢晶体 ,从中抽提出与其结合的 2 0kbDNA。经NdeⅠ酶切消化后亚克隆构建文库 ,通过PCR RFLP及测序筛选出含cry1Ac基因的转化子。然后设计引物PCR扩增出cry1Ac基因的ORF并与pET30a连接 ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,高效表达了 14 1kD蛋白。表达蛋白占总蛋白量的 5 0 %以上 ,且 90 %以上以包涵体形式存在。利用穿梭载体pHT30 4构建表达质粒pHTX4 2 ,电转化Bt无晶体突变株XBU0 0 1,获得重组菌株HTX4 2 ,经SDS PAGE分析 ,cry1Ac基因得到强表达 ,蛋白质定量分析显示目的蛋白量占总蛋白量的 79 2 8% ,且其在细胞中累积达细胞干重的 6 4 13% ,比文献报道的 2 5 %左右高了 1倍以上。原子力显微镜 (AtomicForceMicroscopy ,AFM)检测显示 ,目的基因在大肠杆菌 (E .coli)中表达的包涵体呈不规则形状且较小 ,而在无晶体突变株中表达的晶体呈典型菱形晶体 ,大小约为 1 2 μm× 2 0 μm。生测结果显示 ,包涵体与晶体对小菜蛾 (Plutellaxylostella)幼虫均有高效杀虫活性。本研究为构建高效杀虫工程菌及进一步阐明Bt伴孢晶体中 2 0kbDNA分? 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 伴孢晶体 20kbDNA cry1ac基因 表达 小菜蛾 克隆
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小菜蛾中肠Polycalin蛋白的基因克隆、表达及与Cry1Ac毒素的结合特性分析 被引量:2
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作者 展恩玲 杜潇 +3 位作者 赵爱平 孙聪 刘同先 李怡萍 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1155-1167,共13页
【目的】Polycalin蛋白是一种新发现的Bt毒素受体,可能与昆虫对Bt的抗性有关。本研究旨在明确小菜蛾Plutella xylostella Polycalin蛋白与Bt Cry1Ac毒素的关系。【方法】本研究通过PCR结合RACE技术从小菜蛾3龄幼虫中肠克隆获得Polycali... 【目的】Polycalin蛋白是一种新发现的Bt毒素受体,可能与昆虫对Bt的抗性有关。本研究旨在明确小菜蛾Plutella xylostella Polycalin蛋白与Bt Cry1Ac毒素的关系。【方法】本研究通过PCR结合RACE技术从小菜蛾3龄幼虫中肠克隆获得Polycalin蛋白基因的全长cDNA序列,采用实时定量PCR技术研究Polycalin蛋白在小菜蛾不同发育阶段、4龄幼虫不同组织及用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂3龄幼虫后的表达量。提取小菜蛾幼虫中肠的刷状缘膜囊泡(BBMV),运用合成多肽的方法制备Polycalin蛋白抗体,利用Western blot和Ligand blot技术对小菜蛾Polycalin蛋白进行鉴定,分析其与Cry1Ac毒素的结合特性。【结果】克隆得到的小菜蛾Polycalin蛋白基因的cDNA序列全长为9 102 bp(GenBank登录号:MF138149),其中,开放阅读框为8 778 bp,编码2 925个氨基酸;预测蛋白质分子量为326.38 kD,等电点为4.39;在推导的氨基酸序列中,前20个氨基酸为N-末端信号肽序列,含有14个N-糖基化位点,67个O-糖基化位点,6个脂质运载蛋白特征序列,6个脂质运载蛋白位点和13个类脂质运载蛋白结构域,并且在第20和21位(TSG-QVV)氨基酸之间存在一个裂解位点,在C-末端存在2个GPI结合位点,具有Bt毒素受体的特征。该蛋白在幼虫期的表达量较高,尤其在3龄幼虫体内表达量最高,在蛹和成虫中的表达量最低;在4龄幼虫的头、胸、腹中均有表达,在幼虫腹部中的表达量最高;3龄幼虫取食不同浓度的Cry1Ac毒素后,Polycalin蛋白的表达量下降,且Cry1Ac毒素浓度越高,下降越明显。通过Western blot检测到小菜蛾中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)上存在大约300 kD的Polycalin蛋白条带;Ligand blot实验证明了小菜蛾Polycalin蛋白能与Cry1Ac毒素结合。【结论】本研究首次初步明确了小菜蛾Polycalin蛋白具有与Bt毒素结合的特性,为研究Bt对昆虫的作用机理和利用Bt防治害虫提供一定的理论基础和参考价值。 展开更多
关键词 小菜蛾 BT毒素 Polycalin 基因克隆 基因表达 cry1ac毒素
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转人工改造的Bt Cry1Ac基因中林美荷杨的获得及其抗虫性分析 被引量:3
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作者 王亦学 郝曜山 +4 位作者 杜建中 张欢欢 吴家和 秦永军 孙毅 《中国农学通报》 CSCD 2014年第28期23-28,共6页
中林美荷杨具有适应性强、雄性不飞絮、速生丰产和耐瘠薄等优良性状,然而受到一些害虫的危害,造成树苗生长不良,严重影响苗木的产量和质量。采用中林美荷杨的叶片和节间组织作为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导... 中林美荷杨具有适应性强、雄性不飞絮、速生丰产和耐瘠薄等优良性状,然而受到一些害虫的危害,造成树苗生长不良,严重影响苗木的产量和质量。采用中林美荷杨的叶片和节间组织作为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将人工改造后的抗虫基因Bt Cry1Ac导入杨树基因组中。对所获得的中林美荷杨转基因植株进行PCR、Southern blotting和Real-time PCR等分子生物学检测,结果表明Bt Cry1Ac基因多以单拷贝整合到受体植物基因组中,其中7个转基因株系显示外源基因有较高的转录表达。经过实验室喂虫鉴定,筛选出2个抗性效果好的株系。中林美荷杨转抗虫基因株系的获得为该品种绿化造林和推广提供了条件。 展开更多
关键词 中林美荷杨 cry1ac基因 遗传转化 抗虫性
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表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法研究 被引量:1
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作者 杜方 纪淑娟 黄新 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期482-486,共5页
为建立表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰cry1Ac蛋白的特异性单克隆抗体,对不同稀释梯度的cry1Ac蛋白进行检测研究。结果表明:该方法可有效的检测到cry1Ac... 为建立表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰cry1Ac蛋白的特异性单克隆抗体,对不同稀释梯度的cry1Ac蛋白进行检测研究。结果表明:该方法可有效的检测到cry1Ac蛋白,检测灵敏度可达到10ng·mL-1,与cry2A蛋白及CP4-EPSPS蛋白无交叉反应。说明利用表面等离子共振方法检测cry1Ac蛋白操作简单,省时且灵敏度高,特异性强,可用于对cry1Ac蛋白的定量检测。 展开更多
关键词 表面等离子共振传感器 cry1ac蛋白 苏云金芽孢杆菌 转基因植物
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Studies on Trans-Generational Transcriptional Silencing of <i>cry</i>1<i>Ac</i>Gene in Tobacco Transgenics 被引量:1
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作者 Madhurima Kahali Kamlesh Kumar Soni Pradeep Kumar Burma 《American Journal of Molecular Biology》 2017年第1期1-10,共10页
Developing transgenics that express high levels of Cry1Ac protein, and at the same time, are phenotypically normal, has not been an easy task to achieve. It has been routinely observed that most of the transgenic plan... Developing transgenics that express high levels of Cry1Ac protein, and at the same time, are phenotypically normal, has not been an easy task to achieve. It has been routinely observed that most of the transgenic plants that survive, show no or extremely low levels of Cry1Ac protein. However, all of these plants do express the selectable marker, nptII gene. In the present study, we record an interesting observation of how one of the genes (cry1Ac) on a single T-DNA fragment is selectively silenced, keeping the expression of the other gene (nptII) intact. Further, this silenced state is inherited. 展开更多
关键词 cry1ac Transcriptional SILENCING Bt Crops gene SILENCING
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棉铃虫JNKs基因的克隆及表达分析
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作者 于思琪 汤金荣 +2 位作者 张彩虹 EI THINZAR SOE 梁革梅 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期139-146,共8页
c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)是MAPK家族(mitogen-activated protein kinases,丝裂原活化蛋白激酶)的重要成员,具有参与昆虫抗逆反应等多种功能。为明确JNK在棉铃虫Helicoverpa armigera中的表达特性及其对Bt杀虫... c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)是MAPK家族(mitogen-activated protein kinases,丝裂原活化蛋白激酶)的重要成员,具有参与昆虫抗逆反应等多种功能。为明确JNK在棉铃虫Helicoverpa armigera中的表达特性及其对Bt杀虫蛋白的应激与免疫反应,本研究通过PCR克隆得到2个棉铃虫JNK基因HaJNK1和HaJNK2;生物信息学分析结果显示:HaJNK1和HaJNK2基因开放阅读框分别为1 191、1 143 bp,分别编码397、381个氨基酸。系统进化树分析结果表明棉铃虫HaJNK1与黏虫Mythimna separata聚为一支,亲缘关系较近,HaJNK2与家蚕Bombyx mori聚为一支,同源性较高。利用实时荧光定量PCR技术分析HaJNK1与HaJNK2在棉铃虫不同发育时期、不同组织中的表达量,发现HaJNK1与HaJNK2在卵中表达量最高,其次是雌成虫;HaJNK1在性腺中表达量最高,其次是唾液腺;HaJNK2在头部表达量最高,其次是性腺。取食Cry1Ac的4龄棉铃虫幼虫的中肠组织中,HaJNK1与HaJNK2的表达量均显著升高。推测HaJNKs基因可能参与棉铃虫抵御Bt杀虫蛋白伤害的应激和抗逆反应。 展开更多
关键词 棉铃虫 cry1ac蛋白 JNK基因 表达水平
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