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转基因抗虫水稻‘HD2’不同生长发育阶段cry2A^(*)基因表达量
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作者 李荣田 于晓晨 +1 位作者 孔梦莹 刘长华 《中国农学通报》 2021年第23期15-22,共8页
本研究旨在探究转cry2A^(*)基因抗虫水稻‘HD2-1’等独立系在田间生长发育过程中cry2A^(*)基因表达量及糙米Bt蛋白含量(BPC)。利用qRT-PCR方法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测水稻‘HD2-1’等独立系田间不同生长发育阶段组织器官及糙米的cr... 本研究旨在探究转cry2A^(*)基因抗虫水稻‘HD2-1’等独立系在田间生长发育过程中cry2A^(*)基因表达量及糙米Bt蛋白含量(BPC)。利用qRT-PCR方法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测水稻‘HD2-1’等独立系田间不同生长发育阶段组织器官及糙米的cry2A^(*)基因表达量。结果显示,不同水稻独立系cry2A^(*)基因表达量及糙米BPC明显不同,叶片、茎鞘及幼穗cry2A^(*)基因表达量在不同生长发育阶段间往往呈正相关,cry2A^(*)基因mRNA表达量和对应的BPC呈极显著的正相关,糙米BPC和各生长发育阶段各器官cry2A^(*)基因表达量存在正相关趋势。水稻‘HD2’cry2A^(*)基因表达量不同生长发育阶段间及其和糙米BPC间呈正相关。cry2A^(*)基因转录表达越高,BPC越高。 展开更多
关键词 转基因抗虫水稻 ‘空育131’ 生长发育阶段 cry2A^(*)基因表达量 Bt蛋白含量(BPC)
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水稻密码子优化的cry2A*基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的纯化 被引量:7
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作者 秦伟 黄昆仑 +4 位作者 贺晓云 李欣 许文涛 林希瑾 罗云波 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期267-271,共5页
通过PCR从克隆载体pUC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*,经限制性内切酶NdeI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a(+),成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a(+)/Cry2... 通过PCR从克隆载体pUC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*,经限制性内切酶NdeI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a(+),成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a(+)/Cry2A*,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.05mmol/L、诱导时间为3h、诱导温度为20℃的表达条件下目的蛋白大部分以可溶形式进行表达。采用Ni-NTA亲和柱纯化得到高纯度目的蛋白,薄层扫描分析蛋白纯度达到95%。 展开更多
关键词 抗虫基因 cry2A^* 转基因水稻 表达 纯化
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转cry1C~*及cry2A~*基因早粳稻Bt蛋白的时空表达和抗螟虫性 被引量:8
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作者 李荣田 王新宇 +2 位作者 田崇兵 周青 刘长华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1829-1836,共8页
早粳稻空育131为受体,以根瘤农杆菌介导遗传转化法创制了转ubi启动子调控下的cry1C*及cry2A*基因早粳稻空育131 (cry1C*)和空育131(cry2A*)。为了研究转基因水稻Bt蛋白的时空表达特性及抗螟虫性,将不同转化事件形成的转基因早粳稻品系... 早粳稻空育131为受体,以根瘤农杆菌介导遗传转化法创制了转ubi启动子调控下的cry1C*及cry2A*基因早粳稻空育131 (cry1C*)和空育131(cry2A*)。为了研究转基因水稻Bt蛋白的时空表达特性及抗螟虫性,将不同转化事件形成的转基因早粳稻品系种植于田间,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测转基因水稻不同生长发育阶段不同器官的、以及成熟期糙米的Bt蛋白量,采用室内离体茎秆法接虫鉴定转基因水稻的抗螟虫性。结果显示,转基因早粳稻不同抗虫基因Bt蛋白量不同, cry1C*基因总是低于cry2A*基因的蛋白质表达量;不同生长发育时期Bt蛋白量不同,叶片和茎鞘等器官的Bt蛋白量为分蘖期<抽穗期<灌浆期,幼穗或糙米等器官的Bt蛋白量为抽穗期幼穗>灌浆期幼穗>成熟期糙米;不同器官Bt蛋白量不同,高低次序在分蘖期为叶片、茎鞘,抽穗期为叶片、幼穗和茎鞘,灌浆及成熟期为叶片、茎鞘、幼穗和糙米;同一抗虫基因不同转基因品系间抽穗期叶片、茎鞘和幼穗等器官Bt蛋白量及抗螟虫性、糙米Bt蛋白量等性状存在差异,抽穗期各器官Bt蛋白量与抗螟虫性及成熟期糙米Bt蛋白量之间相关不显著,不论Bt蛋白量高或低的品系均表现为高抗螟虫。转基因早粳稻营养器官生长发育前期Bt蛋白量较低、后期较高,繁殖器官生长发育早期Bt蛋白量较高、晚期较低,营养器官通常比繁殖器官的Bt蛋白量高。在本研究范围内,不同基因及不同转化事件培育的转基因水稻Bt蛋白表达量高低不同,但所有的转基因早粳稻品系均表现高抗螟虫。 展开更多
关键词 cry1C^*基因 cry2A^*基因 转基因早粳稻 BT蛋白 时空表达 抗螟虫性
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利用农杆菌介导法获得转cry2A抗虫基因水稻的研究 被引量:11
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作者 吴振映 柳絮 +2 位作者 王文英 姚方印 刘开启 《山东农业科学》 2011年第5期1-3,7,共4页
稻纵卷叶螟等鳞翅目害虫对cry2A*编码的Bt毒性蛋白有明显的排斥效应,从而可达到抗虫的效果。本研究利用农杆菌介导法,将载有cry2A*基因的pC-2A质粒转入受体水稻品种镇稻88基因组内,获得转基因植株。由于cry2A*与抗Basta基因紧密连锁,通... 稻纵卷叶螟等鳞翅目害虫对cry2A*编码的Bt毒性蛋白有明显的排斥效应,从而可达到抗虫的效果。本研究利用农杆菌介导法,将载有cry2A*基因的pC-2A质粒转入受体水稻品种镇稻88基因组内,获得转基因植株。由于cry2A*与抗Basta基因紧密连锁,通过Basta抗性筛选,进而得到转cry2A*基因阳性株。PCR和AGE分析结果表明,外源基因cry2A*已成功整合到镇稻88基因组内。田间试验结果显示转基因阳性植株有明显的抗虫效果。 展开更多
关键词 农杆菌介导法 cry2A*基因 水稻 抗虫性
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表面等离子共振传感检测Cry2A蛋白 被引量:1
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作者 蔡淼 黄新 岳喜庆 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第24期201-204,共4页
目的:建立利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌Cry2A蛋白的方法。方法:利用SPR检测技术,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰Cry2A蛋白的特异性单克隆抗体,对不同质量浓度梯度... 目的:建立利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌Cry2A蛋白的方法。方法:利用SPR检测技术,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰Cry2A蛋白的特异性单克隆抗体,对不同质量浓度梯度的Cry2A蛋白进行检测研究。结果:该方法可有效地检测到Cry2A蛋白,检测灵敏度可达10 ng/m L,与同为抗虫基因编码的Cry1Ac和Cry2Ab蛋白未出现交叉反应。结论:利用SPR方法检测Cry2A蛋白操作简单,省时且灵敏度高、特异性强,可用于对Cry2A蛋白的定性检测。 展开更多
关键词 表面等离子共振传感器 cry2A蛋白 苏云金芽孢杆菌 转基因植物
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Development of lepidopteran pest-resistant transgenic japonica rice harboring a synthetic cry2A* gene 被引量:4
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作者 JIN Yong-mei MA Rui +3 位作者 YU Zhi-jing WANG Ling JIANG Wen-zhu LIN Xiu-feng 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2015年第3期423-429,共7页
A synthetic cry2A^* gene enco ding Bacillus thuringiensis(Bt) δ-endotoxi n that resi st ance to lepidopteran pest was transformed into japonica rice variety Jijing 88, which is the most widely cultivated variety i... A synthetic cry2A^* gene enco ding Bacillus thuringiensis(Bt) δ-endotoxi n that resi st ance to lepidopteran pest was transformed into japonica rice variety Jijing 88, which is the most widely cultivated variety in Jilin Province, Northeast China, by Agrobacterium-mediated transformation. A total of 106 independent transformants overexpressing cry2A^* gene driven by ubiquitin(Ubi) promoter was produced. Three single-copy homozygous transgenic lines were finally selected based on the results of PCR analysis, se gregation ratio of Bast a resistance, and Southern hybridiza tion analyse s. RT-PCR and enzyme linke dimmune sorbent assay(ELISA) revealed that cry2A^* transcripts and protein were highly expressed in these lines. The high level of Cry2A^* protein expression resulted in high resistance to rice striped stem borer as evidence d by insect feeding bioassays. Our results demonst rate that cry2A^* transgenic japonica rice confers resistance to the rice striped stem borer in the laboratory conditions. 展开更多
关键词 insect resistance Bt gene cry2A^* transgenic rice japonica rice variety striped stem borer
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Cry2A基因植物表达载体构建及其转化子生长曲线的建立
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作者 高世武 郭晋隆 +2 位作者 许莉萍 杨颖颖 陈如凯 《亚热带农业研究》 2010年第4期284-288,共5页
根据定向克隆原则,以pCAMBIA2301为载体骨架,Cry2A基因为目的基因,构建了大小为15354 bp的植物表达载体p2AST2301。新载体带有抗虫基因Cry2A和筛选标记基因NPTⅡ,适合通过农杆菌进行遗传转化,并以抗生素G418为筛选底物。同时将新载体转... 根据定向克隆原则,以pCAMBIA2301为载体骨架,Cry2A基因为目的基因,构建了大小为15354 bp的植物表达载体p2AST2301。新载体带有抗虫基因Cry2A和筛选标记基因NPTⅡ,适合通过农杆菌进行遗传转化,并以抗生素G418为筛选底物。同时将新载体转化根癌农杆菌EHA105,获得了用于植物遗传转化的工程菌,并且明确了工程菌D600 nm值在1.0-1.6之间活力最强。 展开更多
关键词 cry2A基因 表达载体 根癌农杆菌 EHA105
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Cry2A蛋白的石英晶体微天平检测 被引量:1
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作者 杜方 黄新 纪淑娟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第24期209-212,共4页
目的:建立检测苏云金芽孢杆菌Cry2A蛋白的石英晶体微天平(quartz crystal microbalance,q CM)传感方法。方法:根据抗原抗体相互作用原理,利用q CM技术,在金片表面修饰抗原所对应的单克隆抗体,对苏云金芽孢杆菌Cry2A蛋白进行检测研究。结... 目的:建立检测苏云金芽孢杆菌Cry2A蛋白的石英晶体微天平(quartz crystal microbalance,q CM)传感方法。方法:根据抗原抗体相互作用原理,利用q CM技术,在金片表面修饰抗原所对应的单克隆抗体,对苏云金芽孢杆菌Cry2A蛋白进行检测研究。结果:该方法灵敏度达到1 μg/m L,特异性好、重复性高。结论:该方法有利于为苏云金芽孢杆菌蛋白检测提供新思路,可以应用到实际样品的检测,在农产品转基因检测和进出口检验检疫中具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 石英晶体微天平 cry2A蛋白 转基因作物
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Cry2A杀虫蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化
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作者 杨奇 韩芳婷 +6 位作者 刘启文 蒋玲曦 谭芙蓉 吴潇 赵凯 王金斌 唐雪明 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期10-14,共5页
通过PCR方法从克隆载体上扩增转基因水稻中的抗虫基因cry2A,经限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-30a(+)中,成功构建了蛋白表达载体pET-30a(+)/Cry2A,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。通过对其表达条件... 通过PCR方法从克隆载体上扩增转基因水稻中的抗虫基因cry2A,经限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-30a(+)中,成功构建了蛋白表达载体pET-30a(+)/Cry2A,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.4mmol/L、诱导时间为6h、诱导温度为30℃的表达条件下,目的蛋白表达量最高,大部分以包涵体形式表达。将包涵体裂解并用Ni-NTA亲和柱纯化,所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性,最终得到有活性的高纯度目的蛋白。 展开更多
关键词 转基因水稻 cry2A杀虫蛋白 包涵体 表达 纯化
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Cry2A毒素抗独特型单链抗体库的构建 被引量:1
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作者 刘媛 刘敏 +8 位作者 张霄 徐重新 林曼曼 胡晓丹 仲建锋 谢雅晶 罗楚平 张存政 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1174-1182,共9页
为了降低苏云金杆菌Cry2A毒素的免疫检测成本,开发廉价、无毒试剂盒,采用整体抗体免疫和噬菌体展示技术的路线,设计和构建了Cry2A抗独特型单链抗体库。以Protein A纯化的Cry2A兔多克隆抗体为免疫原,对雌性Balb/c系小鼠进行了免疫。在优... 为了降低苏云金杆菌Cry2A毒素的免疫检测成本,开发廉价、无毒试剂盒,采用整体抗体免疫和噬菌体展示技术的路线,设计和构建了Cry2A抗独特型单链抗体库。以Protein A纯化的Cry2A兔多克隆抗体为免疫原,对雌性Balb/c系小鼠进行了免疫。在优化的包被原浓度下,用ELISA法测定小鼠血清效价及抗独特型抗体组分。选取效价最高的小鼠,取脾脏提取总RNA,RT-PCR法合成c DNA第一链。设计简并引物,利用PCR法扩增小鼠VH、Vκ基因,再用SOE-PCR法进行单链抗体基因的拼接。SOE-PCR产物和p IT2载体经双酶切后连接,电转入感受态E.Coli. TG1完成建库,并用多克隆噬菌体ELISA对抗体库与免疫原的结合能力进行了鉴定。结果表明,免疫鼠血清的效价在1∶1.6×105到1∶6.4×105倍之间。免疫鼠血清可对Cry2A与其兔多克隆抗体的结合最高可产生17. 6%的抑制,证明Ab2β和Ab2γ型抗独特型抗体的存在。最终构建了库容为1.2×107的Cry2A抗独特型单链抗体库,该抗体库与免疫原的结合信号/背景比值为6. 04。 展开更多
关键词 cry2A毒素 抗独特型抗体 单链抗体 噬菌体展示
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Cry2A基因导入甘蔗品种ROC22的抗虫性评价 被引量:1
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作者 陈勇生 齐永文 +2 位作者 吴嘉云 吴小斌 黄俊坚 《甘蔗糖业》 2018年第5期7-10,共4页
对6份转Cry2A基因甘蔗品系进行田间自然感虫的抗虫性评价,试验结果表明:品系T1、T2、T3、T4和T6抗性最强,螟害株率和螟害节率都为0,Bt基因表达稳定,其次是T5。在农艺和经济性状方面,参试品系均与生产品种存在较大差异。这些转Cry2A基因... 对6份转Cry2A基因甘蔗品系进行田间自然感虫的抗虫性评价,试验结果表明:品系T1、T2、T3、T4和T6抗性最强,螟害株率和螟害节率都为0,Bt基因表达稳定,其次是T5。在农艺和经济性状方面,参试品系均与生产品种存在较大差异。这些转Cry2A基因甘蔗品系能否成为品种直接在生产上推广种植还有待观察,但可作为种质材料应用于甘蔗杂交育种研究。 展开更多
关键词 cry2A 甘蔗 抗虫性 产量 糖分
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转Bt基因油菜的抗虫性分析 被引量:2
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作者 万丽丽 王转茸 +3 位作者 辛强 董发明 洪登峰 杨光圣 《湖北农业科学》 2016年第9期2386-2391,2422,共7页
利用农杆菌介导的遗传转化分别将Cry1C和Cry2A的2个单价Bt基因转入油菜(Brassica napus L.),以两个纯合的转基因抗虫油菜为亲本,通过有性杂交的方法将不同Bt基因聚合,培育双价Bt抗虫油菜,并对其抗虫性和种子品质性状进行评价。结果表明,... 利用农杆菌介导的遗传转化分别将Cry1C和Cry2A的2个单价Bt基因转入油菜(Brassica napus L.),以两个纯合的转基因抗虫油菜为亲本,通过有性杂交的方法将不同Bt基因聚合,培育双价Bt抗虫油菜,并对其抗虫性和种子品质性状进行评价。结果表明,Cry1C、Cry2A在聚合后均能稳定表达,和单价Cry1C转基因植株相比,双价株系中蛋白质含量明显降低,以Cry2A为母本的聚合株系蛋白质含量降低更多,Cry1C在遗传上存在母本效应。室内接种小菜蛾二龄幼虫结果显示,转化单价和双价聚合Bt基因的抗虫性增强,其中转化单价Cry1C的抗虫性优于双价聚合Bt基因和单价Cry2A基因的转基因植株。玻璃温室栽培转基因植株,单价Bt和双价聚合Bt基因的转基因植株能生存而非转基因植株受到严重虫害而死亡。对抗性优良的单价和双价聚合的转基因植株种子品质测定发现,与未受到虫害的受体材料双低优良恢复系7-5的含油量和硫苷含量差异不显著,从而达到抗性改良的目的。 展开更多
关键词 油菜(Brassica NAPUS L.) 苏云金芽孢杆菌 Cry1C cry2A 双价聚合 农杆菌介导遗传转化 品质性状
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转Cry2A基因抗虫甘蔗植株的培育 被引量:6
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作者 王文治 胡天娇 +8 位作者 杨本鹏 王俊刚 冯小艳 熊国如 冯翠莲 赵婷婷 沈林波 林拥军 张树珍 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期2893-2898,共6页
Bt基因具有广谱杀虫性,培育转基因抗虫品种为甘蔗病虫害防治提供了新思路。为了检验Cry2A基因对甘蔗螟虫的防治效果,本研究构建了由玉米Ubi启动子驱动的Cry2A基因高效植物表达载体Cry2A-3300,利用农杆菌介导技术,对甘蔗胚性愈伤组织材... Bt基因具有广谱杀虫性,培育转基因抗虫品种为甘蔗病虫害防治提供了新思路。为了检验Cry2A基因对甘蔗螟虫的防治效果,本研究构建了由玉米Ubi启动子驱动的Cry2A基因高效植物表达载体Cry2A-3300,利用农杆菌介导技术,对甘蔗胚性愈伤组织材料进行遗传转化,经过筛选培养及再生培养共得到46株抗性植株。对抗性植株进行PCR扩增检测,15株呈阳性;进一步利用RT-PCR,表明外源基因Cry2A在转录水平上得到有效表达。室内抗虫鉴定的结果表明Cry2A基因可有效抑制害虫的生长,这将有利于后期进行田间防治。 展开更多
关键词 甘蔗(Saccharum officinarum) cry2A基因 遗传转化 甘蔗螟虫
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多年种植Bt稻后外源蛋白在土壤中的积累
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作者 王永模 邓嘉昕 +1 位作者 张金鑫 贾瑞宗 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期119-125,共7页
外源蛋白在环境中的残留与积累是转Bt基因作物环境安全评价的重要内容之一。我国已育成多个具有商业化前景的Bt稻品系,但目前多年种植Bt稻后Bt外源蛋白是否会在土壤中积累还不清楚。本研究在同一试验田连续9年种植了转cry1Ab/1Ac基因明... 外源蛋白在环境中的残留与积累是转Bt基因作物环境安全评价的重要内容之一。我国已育成多个具有商业化前景的Bt稻品系,但目前多年种植Bt稻后Bt外源蛋白是否会在土壤中积累还不清楚。本研究在同一试验田连续9年种植了转cry1Ab/1Ac基因明恢63(华恢1号)和转cry2A基因明恢63水稻,采用酶联免疫吸附法(ELISA)跟踪监测了分蘖期和收获后60 d根际土中外源蛋白含量变化,试验第1年(2012年)和最后1年(2020年)还测定了苗期、开花期和成熟期根际土中外源蛋白含量。结果表明:2012年,转cry1Ab/1Ac基因明恢63在苗期、分蘖期、开花期、成熟期和收获后60 d根际土中外源蛋白含量分别为1.25、1.77、1.97、1.71和0.30 ng·g^(-1),2020年分别为1.30、1.69、2.03、1.77和0.43 ng·g^(-1);2012年,转cry2A基因明恢63在苗期、分蘖期、开花期、成熟期和收获后60 d根际土中外源蛋白含量分别为0.91、1.52、1.53、1.37和0.12 ng·g^(-1),2020年分别为0.95、1.43、1.61、1.40和0.15 ng·g^(-1)。多因素方差分析显示,时间效应对Bt外源蛋白积累不显著,而品种和生育期效应显著。Bt稻生长过程中根际土中可以检测出微量的Bt外源蛋白,但收获后60 d已经基本降解完毕,根际土中Bt外源蛋白含量不会随着种植时间的增加而累积。 展开更多
关键词 Bt稻 cry1Ab/1Ac cry2A 外源蛋白 BT毒素 土壤 累积
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