Cry6Aa2m基因植物表达载体构建及大豆的遗传转化

cry6Aa2杀线虫晶体蛋白基因对线虫有很高的杀虫活性,根据大豆密码子的偏爱性,人工合成杀线虫最小毒力区间cry6Aa2m基因。以pCAMBIA3300为骨架,构建由组成型强启动子E12 CaMV35S调控的cry6Aa2m基因、筛选标记基因为除草剂抗性bar基因的植物表达载体pCBE-cry6,用农杆菌介导法对东农50大豆子叶节进行遗传转化,通过PCR和RT-PCR检测,结果证明cry6Aa2m基因已整合到大豆基因组中并进行转录,获得转cry6Aa2m基因大豆新株系18株,为大豆抗线虫分子育种研究提供材料。

转cry6Aa2m基因大豆遗传稳定性分析及农艺性状调查

以前期获得的转抗虫基因cry6Aa2m大豆T4代植株4个株系为材料,采用PCR及RT-PCR检测方法进行了外源基因遗传稳定性及表达情况分析。并以受体品种(东农50)为对照,进行了产量性状、形态性状、品质性状及环境适应能力等农艺性状的调查。结果表明:cry6Aa2m基因能够在T4代转基因植株中遗传并表达;在产量性状上,除转基因株系DpC6b7单株结荚数显著低于对照外,其余3个株系的百粒重和单株结荚数与对照相比无显著差异;在形态性状上,除转基因株系DpC6b37株高显著低于对照外,其余株系的生育期、结荚习性、花色、叶形与对照也均无显著差异;在品质性状上,与对照相比,DpC6b37粗蛋白含量高2%,粗脂肪含量高5%。株系DpC6b7则粗蛋白含量高4%,粗脂肪含量低1%;在环境适应能力方面,转基因株系种子萌发率、落粒率、种子休眠期、杂草竞争性与对照均无显著差异。综合结果表明cry6Aa2m基因能够稳定遗传并表达,其中株系DpC6b4和DpC6b8所调查的农艺性状均不劣于受体品种。

苏云金芽胞杆菌杀线虫伴胞晶体蛋白基因cry6Aa的克隆与表达

通过对晶体蛋白N-末端氨基酸测序,设计简并探针,从对根结线虫高毒力苏云金芽胞杆菌YBT-1518菌株中克隆到1个含有杀线虫晶体蛋白基因的片段。序列测定表明该序列含有两个ORF(orf1和orf2),其中orf1与基因cry6Aa1同源性为98%,已在GenBank上登录(Acc.NO.AF499736),并被命名为cry6Aa2。将克隆的该片段克隆到穿梭载体pHT304上,并转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171,重组菌株可形成米粒状伴胞晶体。生物测定表明,表达的毒素蛋白对北方根结线虫的LC50为9.47μg/mL,毒力与出发菌株(10.74μg/mL)相当。