CryIA(c)基因植物表达载体的构建及转基因甘蔗的获得

构建了玉米UBI启动子驱动Bt CryIA(c)基因的高效植物表达载体pUBTC,通过农杆菌介导法导入甘蔗愈伤组织,经过除草剂PPT 3次连续筛选,获得89株抗性植株,经过PCR扩增检测,得到71株阳性植株,对其中7株进行RT-PCR检测,证明外源基因已经成功的整合到甘蔗基因组中,并得到有效的表达。

苏云金芽孢杆菌δ-内毒素cryIA(c)基因在大肠杆菌和变铅青链霉菌中表达

利用合成的寡聚核苷酸片段，从质粒ｐＯＳ１０００中分离出具有适合克隆位点的苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）δ内毒素ｃｒｙＩＡ（ｃ）全长基因。将该基因与大肠杆菌表达载体ｐＫＫ２２３３重组，并引入大肠杆菌ＪＭ１０９中，经ＩＰＴＧ诱导，获得了超量表达的ＣｒｙＩＡ（ｃ）蛋白。将ｃｒｙＩＡ（ｃ）全长基因插入链霉菌表达载体ｐＨＺ１２７２中，得到重组质粒ｐＨＺ１２５６，将该质粒引入变铅青链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｖｉｄａｎｓ）ＪＴ４６中，经硫链丝菌素诱导，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ测定表明，重组变铅青链霉菌ＪＴ４６（ｐＨＺ１２５６）已表达出相应的ＣｒｙＩＡ（ｃ）蛋白。杀虫试验表明，大肠杆菌和链霉菌所表达出的δ内毒素ＣｒｙＩＡ（ｃ）对小菜蛾均有毒杀作用，其致死率分别为９３％和５７％。

甘露糖筛选系统的建立及在甘蔗转基因中的应用

用甘露糖作为筛选底物,对甘蔗品种福农95-1702外植体的再生进行研究,建立福农95-1702的甘露糖筛选体系;在甘蔗愈伤组织的继代、分化、生根三个阶段进行抗性筛选时,甘露糖占总糖的比例分别是60%、60%和30%。在以上筛选体系的基础上,将福农95-1702作为受体材料,通过基因枪轰击法,将含有cryIA(c)抗虫基因的基因表达盒与筛选标记基因(pmi)进行共转化,通过甘露糖筛选,最终获得26株抗性再生植株,经PCR检测,其中4株呈阳性。初步说明cryIA(c)基因已经整合到福农95-1702的基因组中,获得了4株转基因阳性甘蔗植株。

抗虫基因在转基因植株中聚合的初步研究

以质粒 pBUSCK HPT ,pCUSBK HPT和pGNA HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型三系恢复系SH5 2 7和广亲合系W 2 0 0 8为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)、修饰的Bt毒蛋白基因 (sbk)和雪花莲凝集素基因 (gna)的植株 .通过人工杂交 ,将外源基因聚合 .分子证据显示 ,作者获得了抗性基因聚合的材料 .蛋白活性测定表明 ,聚合基因的表达因载体结构相似而受到影响 ,但抗虫性却得到提高 .作者还讨论了聚合转基因在水稻育种中的作用和及其相关问题 .

抗烟青虫转基因烟草的培育

烟青虫属鳞翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）昆虫。前人研究表明，苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）中的Ｂｔ毒蛋白对其具有很强的毒杀作用。设法将Ｂｔ基因导入到烟草中，是防治这类虫害的一种有效途径。８０年代后期以来，为了提高Ｂｔ基因在植物...

杀虫荧光假单胞工程菌的构建及其杀虫效果

以转座子mini Tn5为介导 ,用高压电激转化法将BtcryIA(c)基因整合到生防细菌荧光假单胞菌P30 3 1的染色体上。通过对重组菌株染色体DNA酶切分析、PCR检测 ,表明转化子DNA中含有cryIA(c)基因及其营养期表达的强启动子。SDS PAGE鉴定、ELISA检测及电镜观察证实了杀虫晶体蛋白在P30 3 1中的高效表达。生物测定结果显示工程菌对棉铃虫Heli coverpaarmigera具有显著毒杀作用。工程菌PT4 5、PT5 1、PT6 1、PT71和野生菌HD 73对棉铃虫 2龄幼虫 5天的LC50 值分别为5 0 12 81μg g、 71 776 3μg g、 6 9 0 82 0 μg g、 5 7 9895 μg g、 192 874 7μg g。死亡率与浓度呈正相关 ,体重与浓度呈负相关。

转双价抗虫基因Bt-CpTI提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性

目的将外源苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因CryIA(c)和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI共同转入四倍体菘蓝以获得鳞翅目昆虫小菜蛾抗性。方法构建了以CaMV 35S为启动子,新霉素磷酸转移酶(Npt-Ⅱ)为选择标记,带有CryIA(c)基因和CpTI基因的植物表达载体pGBI121S4ABC并转入根癌农杆菌LBA4404。采用叶盘法遗传转化四倍体菘蓝。转基因再生植株经PCR和Southern杂交检测,并进行抗小菜蛾实验。结果T0代转化四倍体菘蓝的双基因阳性转化率达到16.67%。Southern杂交检测结果表明外源CryIA(c)基因和CpTI基因均已经随机整合到转基因菘蓝的基因组中。与野生对照相比,转基因四倍体菘蓝对小菜蛾显示出明显抗性。结论转双价抗虫基因Bt-CpTI是提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性的有效手段。

Expression of Bacillus Thuringiensis δ-Endotoxin Gene With Recombinant Baculovirus in Insect Cell

Insect baculovirus(IBV) is a biological insecticide in agriculture and forestry, butits slow speed of killing pests and narrow range of host make its application quitelimited. Hence, polyhedrin (ocu) gene of IBV was chosen for construction of