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cryIAc基因在转基因玉米中的遗传规律及对抗虫性影响 被引量:2
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作者 王建军 杨慧珍 刘佼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期122-130,共9页
旨在研究目的基因在转基因植株和后代植株(株系)中的遗传规律及其对转化植株抗虫性的影响。以花粉介导法将cryIAc基因导入玉米自交系‘郑58’和‘昌7-2’,对转化植株及其后代株系进行分子检测和田间抗虫鉴定。结果表明:(1)转化‘郑58’... 旨在研究目的基因在转基因植株和后代植株(株系)中的遗传规律及其对转化植株抗虫性的影响。以花粉介导法将cryIAc基因导入玉米自交系‘郑58’和‘昌7-2’,对转化植株及其后代株系进行分子检测和田间抗虫鉴定。结果表明:(1)转化‘郑58’和‘昌7-2’,T1代分别获得转基因植株24和41个,转化率高达20%以上;(2)转基因T2代、杂交F2代及回交1代(B1)的分子检测结果证明,外源基因的遗传符合孟德尔的3∶1、3∶1和1∶1的遗传分离规律;(3)连续多带的分子检测结果还表明,外源基因可稳定遗传并有效表达,表达水平在9.8-14.3 ng/g叶片鲜重之间;(4)抗虫鉴定结果显示,在阴性对照全部感虫情形下,转基因纯合株系仍表现出较高抗虫活性;(5)此外,回交试验结果还证明外源基因通过杂交可传递给下一代;(6)最终经筛选得到SZ003、SZ005、SC001、SC004和SC007五个高抗虫转基因株系。结果表明,花粉介导法是一种高效、快捷的转化方法,cryIAc基因导入玉米自交系植株后赋予和提高了转基因植株的抗虫活性。 展开更多
关键词 转基因玉米 cryiac基因 遗传规律 抗虫性
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Cre/lox介导剔除转双价抗虫sck+cryIAc基因籼稻恢复系明恢86材料的选择标记基因 被引量:2
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作者 陈松彪 刘翔 +4 位作者 彭海英 巩万奎 王锐 王锋 朱祯 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2004年第12期1416-1423,共8页
Cre/lox系统通过其Cre重组酶对lox序列进行切割和重新连接,介导lox序列发生特异性重组。利用重组报告基冈系统Pactin-lox-hpt-lox-gusA,对Cre/lox系统在水稻(Oryza saliva L.)中介导转基因的剔除进行了研究。Pactin-lox-hpt-lox-g... Cre/lox系统通过其Cre重组酶对lox序列进行切割和重新连接,介导lox序列发生特异性重组。利用重组报告基冈系统Pactin-lox-hpt-lox-gusA,对Cre/lox系统在水稻(Oryza saliva L.)中介导转基因的剔除进行了研究。Pactin-lox-hpt-lox-gusA系统中选择标记hpt基因侧翼含两个同向lox位点,并位于水稻actinl启动子和gusA基因之间。当hpt在Cre酶作用下被剔除时,actinl启动子可以和gusA基因融合在一起从而驱动GUS表达。通过农杆菌介导获得了分别转cre基因、Pactin—lox—hpt—lox—gusA结构和双价抗虫基因lox—hpt—lox—sck-cryIAc结构的水稻。利用有性杂交方法将cre基因导人列转化lox结构的植株中。在4个转Pactin—lox—hpt—lox-gusA T0植株×转cre T0植株所配组合的30个杂交F1植株中,12个植株表达GUS活性,9个表现潮霉素敏感,表明hpt基因被剔除。研究进一步通过Cre/lox介导剔除转双价抗虫sck+cryIAc基冈籼稻恢复系明恢86材料基冈组中的选择标记hpt基因。在9个转lox-hpt-lox-sck-cryIAc T2代纯合植株×转cre T2代纯合植株所配组合的77个杂交F1植株中,56个植株表现潮霉素敏感。分子分析证实在这些对潮霉素敏感的植株中hpt基因已经被剔除。 展开更多
关键词 CRE/LOX 基因剔除 转基因水稻 抗虫 sck cryiac 无选择标记
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全长和截短的δ内毒素cryIAc基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达
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作者 杨远征 杜全胜 +3 位作者 朱反修 王福山 齐义鹏 黄永秀 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 1995年第4期459-468,共10页
在昆虫病毒转移载体PVL1393多角体基因启动子下游克隆了全长的苏芸金杆菌δ内毒素基因cryIAc,得到了重组转移载体pThY1,用KpnI将cryIAc基因进行了截短,得到了重组转移载体pVLY2.随后在两种重组转... 在昆虫病毒转移载体PVL1393多角体基因启动子下游克隆了全长的苏芸金杆菌δ内毒素基因cryIAc,得到了重组转移载体pThY1,用KpnI将cryIAc基因进行了截短,得到了重组转移载体pVLY2.随后在两种重组转移载体cry基因的下游引入了IE1启动于驱动的neo基因作为筛选标记和SV40小t抗原终止区作为cry基因的终止信号,得到了重组转移载体pVLYlneo和PVLY2neo,分别用两种重组转移载体DNA与野生型AcNPVDNA共转染昆虫Sf9细胞,用G418筛选后经有限稀释法纯化,得到了携带全长和截短。ryIAc基因的两种重组病毒vVLY1neo和vVLY2neo,分别在昆虫细胞中表达了分子量为133300和82000的cry蛋白,大小分别与cryIAc晶体蛋白和预计的截短蛋白相同,并均具有与原晶体蛋白相同的免疫活性,生物测定表明两种表达产物均具有杀虫活性,和昆虫病毒一起产生协同增效毒性. 展开更多
关键词 基因表达 内毒素 杆状病毒 昆虫病虫 cryiac基因
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3种ELISA法定量检测转cry1Ac基因水稻Cry1Ac蛋白的比较研究 被引量:9
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作者 秦崇涛 陈在杰 +1 位作者 苏军 王锋 《福建农业学报》 CAS 2003年第4期258-263,共6页
用从细菌中分离的纯品CryIAe蛋白作为抗原成功制备出了效价较高的CryIAe蛋白的兔多抗,对制备的抗体的免疫学分析表明,其与CryIAc有极显著的免疫交叉反应.并在对转cryIAc基因水稻的检测中具有良好的特异性。用戊二醛一步法对纯化的IgG进... 用从细菌中分离的纯品CryIAe蛋白作为抗原成功制备出了效价较高的CryIAe蛋白的兔多抗,对制备的抗体的免疫学分析表明,其与CryIAc有极显著的免疫交叉反应.并在对转cryIAc基因水稻的检测中具有良好的特异性。用戊二醛一步法对纯化的IgG进行了碱性磷酸酶标记。应用制备的抗体进行了直接法、间接法和双抗夹心法等ELISA方法检测转cryIAc基因水稻中Bt的含量,结果表明直接法和间接法ELISA只能定性而不能定量测定转cryIAc基因水稻,而双抗夹心法是一种比较理想的定量检测水稻中Bt含量的方法。同时确定了双抗夹心法的各项具体条件。 展开更多
关键词 转基因 水稻 细菌 CryIAe蛋白 抗原 抗体 免疫交叉反应 cryiac基因 BT蛋白 直接法 间接法 双抗夹心法 ELISA
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果蔗‘拔地拉’植株再生与农杆菌介导的遗传转化研究 被引量:3
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作者 李瑞美 何炎森 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期567-570,共4页
以果蔗(Saccharum officenarum L.)‘拔地拉’的幼嫩叶鞘为材料,以MS+2,4-D2.0mgL-1为诱导培养基,MS+2,4-D2.0mgL-1+6-BA1.0mgL-1为分化培养基,MS+IAA2.0mgL-1为生根培养基,建立了高效的果蔗再生体系。利用农杆菌介导法将含有cryIA基因... 以果蔗(Saccharum officenarum L.)‘拔地拉’的幼嫩叶鞘为材料,以MS+2,4-D2.0mgL-1为诱导培养基,MS+2,4-D2.0mgL-1+6-BA1.0mgL-1为分化培养基,MS+IAA2.0mgL-1为生根培养基,建立了高效的果蔗再生体系。利用农杆菌介导法将含有cryIA基因和CPTI基因的植物表达载体导入果蔗愈伤组织,经潮霉素筛选、PCR以及Southern杂交分析表明,cryIAc基因已整合进果蔗基因组中。 展开更多
关键词 果蔗 农杆菌介导 cryiac基因 遗传转化
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PEG介导BT基因转化大豆原生质体获转基因植株 被引量:25
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作者 南相日 刘文萍 +3 位作者 刘丽艳 吕晓波 何云霞 卫志明 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期326-330,共5页
通过PEG法将B.T(BacilastharingiensisCryIAc)毒蛋白基因导入到大豆主栽品种黑农35,黑农37,合丰25和合丰35的原生质体中,经30ml/L潮霉素筛选,选择有抗性的愈伤组织进行分化,获得... 通过PEG法将B.T(BacilastharingiensisCryIAc)毒蛋白基因导入到大豆主栽品种黑农35,黑农37,合丰25和合丰35的原生质体中,经30ml/L潮霉素筛选,选择有抗性的愈伤组织进行分化,获得了三棵再生植株,移栽后全部成活,对移栽后植株的总DNA进行PCR分析,均显阳性。对PCR阳性植株进行Southern杂交分析,证明B.T毒蛋白基因已整合到大豆细胞基因组中。 展开更多
关键词 大豆 原生质体 B.T毒蛋白基因 转基因植株
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Effects of Extreme Air Temperature and Humidity on the Insecticidal Expression Level of Bt Cotton 被引量:10
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作者 CHENYuan WEN Yu-jin +5 位作者 CHEN Yuan John Tom Cothren ZHANG Xiang WANG Yong-hui WilliamA Payne CHEN De-hua 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2012年第11期1836-1844,共9页
The higher survival rates of Helicoverpa amigera larvae were usually observed after adverse climate which was related to extreme temperature (T) and relative humidity (RH) stresses in transgenic Bacillus thuringie... The higher survival rates of Helicoverpa amigera larvae were usually observed after adverse climate which was related to extreme temperature (T) and relative humidity (RH) stresses in transgenic Bacillus thuringiensis (Bt) cotton. The unstable resistance of Bt cotton to bollworms has been correlated with the reduced expression of CrylAc δ-endotoxin. The objective of this study was to investigate the effects of combined temperature and relative humidity stresses on the leaf CrylAc insecticidal protein expression during critical developmental stages. The study was undertaken on two transgenic cotton cultivars that share same parental background, Sikang 1 (a conventional cultivar) and Sikang 3 (a hybrid cultivar), during the 2007 and 2008 growing seasons at the Yangzhou University Farm, Yangzhou, China. The study was arranged with two factors that consisted of temperature (two levels) and relative humidity (three levels). The six T/RH treatments were 37℃/95%, 37℃/70%, 37℃/50%, 18℃/95%, 18℃/70%, and 18℃/50%. In 2007, the six treatments were imposed to the plants at peak flowering stage for 24 h; in 2008, the six treatments were applied to the plants at peak square, peak flowering, and peak boll stages for 48 h. The results of the study indicated that the leaf insecticidal protein expression in CrylAc was significantly affected by extreme temperature only at peak flowering stage, and by both extreme temperature and relative humidity during boll filling stage. The greatest reductions were observed when the stresses were applied at peak boll stage. In 2008, after 48 h stress treatment, the leaf Bt endotoxin expression reduced by 25.9-36.7 and 23.6-40.5% at peak boll stage, but only by 14.9-26.5 and 12.8-24.0% at peak flowering stage for Sikang 1 and Sikang 3, respectively. The greatest reduction was found under the low temperature combined with low relative humidity condition for both years. It is believed that the temperature and relative humidity stresses may be attributed to the reduced efficacy of Bt cotton in growing conditions in China, where extreme temperatures often increase up to 35-40℃ and/or decrease down to 15-20℃, and relative humidity may reach to 85-95% and/or reduce to 40-55% during the cotton growing season. 展开更多
关键词 Bt cotton high temperature low temperature relative humidity cryiac protein
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对二点委夜蛾高毒力苏云金芽胞杆菌的筛选及其基因型分析 被引量:3
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作者 杨云鹤 宋萍 +2 位作者 王振营 董志平 王勤英 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期630-635,共6页
【目的】获得对二点委夜蛾Athetis lepigone(M(o|¨)schler)高毒力的苏云金芽胞杆菌(Bt)菌株,寻找对该虫具有特异杀虫活性的蛋白毒素,探索Bt菌株或其杀虫基因应用于二点委夜蛾防治的可行性。【方法】通过生物测定方法比较了36株苏... 【目的】获得对二点委夜蛾Athetis lepigone(M(o|¨)schler)高毒力的苏云金芽胞杆菌(Bt)菌株,寻找对该虫具有特异杀虫活性的蛋白毒素,探索Bt菌株或其杀虫基因应用于二点委夜蛾防治的可行性。【方法】通过生物测定方法比较了36株苏云金芽胞杆菌和一株恶臭假单胞工程菌PHB-cry1Ab对二点委夜蛾幼虫的杀虫活性,同时利用PCR-RFLP方法对这些菌株的基因型进行了分析。【结果】不同Bt菌株对二点委夜蛾幼虫的杀虫活性差别很大,杀虫活性高的菌株都含有cry1Ac基因。饲毒72 h后含单基因的BtHD-73菌株(cry1Ac)对二点委夜蛾2龄幼虫的毒力(LC_(50)值为188.51μg/g)明显高于含多基因的Bt SC-40菌株(cry1Ac,cry2Ac,cry1I,vip3A)的毒力(LC_(50)值为418.13μg/g)。含有vip3A基因的Bt SC-40和BtHD-13营养期上清液对二点委夜蛾2龄幼虫表现出一定的杀虫活性(72 h死亡率分别达到42.5%和57.4%),而无vip3A基因的Bt HD-73营养期上清液未表现出明显的杀虫活性。【结论】由cry1Ac基因编码的Cry1Ac蛋白对二点委夜蛾幼虫具有特异杀虫活性,Vip3A蛋白对二点委夜蛾幼虫可能也有一定的杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 二点委夜蛾 基因型鉴定 杀虫活性 Vip3A蛋白 Cry1Ac蛋白
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