大肠埃希菌表达苏云金杆菌cryIVD基因杀蚊幼活性观察

目的 :观察表达B .t.icryIVD基因的大肠埃希菌对蚊幼虫的毒效。 方法 :细菌的诱导表达及蚊虫毒效测试。结果 :加入工程菌 48h对淡色库蚊和白纹伊蚊均具有明显的杀灭作用 ,LC50 分别为 2 .3 8× 10 6 、1.6× 10 7个 ml细胞 ,其中对淡色库蚊的杀灭作用要好于对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果。结论 :单独表达B .t .

苏云金杆菌以色列亚种晶体蛋白CryIVD基因的克隆及表达产物的效果测定

目的 克隆、表达苏云金杆菌以色列亚种晶体蛋白CryIVD基因并测定其杀蚊毒效。 方法 采用PCR技术 ,扩增得到CryIVD基因片段 ;通过双酶切及连接反应 ,将该基因克隆入大肠杆菌质粒 pUC18构建重组克隆及表达载体 ;转化E .coliDH5α,提取重组质粒进行酶切鉴定及DNA序列测定 ;以IPTG诱导表达CryIVD蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物并进行杀蚊毒效测定。 结果 CryIVD基因成功克隆并在宿主菌中正确表达 ,表达产物对蚊幼的杀灭毒效测定显示其对淡色库蚊Ⅱ～Ⅲ龄健康幼虫的LC50 为 2 .3 8× 10 6 cells ml,对白纹伊蚊健康幼虫的LC50 为 1.6× 10 7cells ml。 结论 CryIVD基因被成功克隆和表达 ,且其表达产物有明显杀蚊幼活性。

苏云金杆菌CryIVD转基因工程藻不同贮存时间对淡色库蚊不同龄期幼虫的杀灭效果

目的观察苏云金杆菌CryIVD转基因贮存藻对不同龄期淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法大量培养工程藻,干燥后保存,应用不同时间的贮存藻作用于不同龄期淡色库蚊幼虫。结果干燥贮存的工程藻数年后仍有较高的杀蚊毒效,尽管杀蚊毒效较新鲜工程藻有所下降,但在105个/ml数量级不同龄期的幼虫仍有50%以上死亡。对不同龄期淡色库蚊幼虫杀灭效果比较表明,1~3年贮存藻3组比较,在106个/ml数量级浓度的蚊幼虫死亡率差异无统计学意义（F=9.32,P〉0.01）,而贮存1年组和3年组在105个/ml数量级浓度及以下,死亡率差异有统计学意义（F=101.21,P〈0.01）。结论转基因蓝藻在干燥贮存情况下仍能保持毒蛋白的稳定遗传和杀幼虫作用,为今后的现场应用提供更方便的选择。