CSRP2在成人非M3-急性髓系白血病患者骨髓中的表达

目的:探讨成人非M3-急性髓系白血病(M3-AML)患者CSRP2基因表达的特点及临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR法检测20名同期健康造血干细胞移植(HSCT)供者(正常对照)及30例初治成人非M3-AML患者骨髓中CSRP2 mRNA的表达水平。30例中男18例,女12例,中位年龄33岁;经治疗均达完全缓解,均有完整的临床资料及随访资料。结果:非M3-AML患者CSRP2 mRNA表达水平高于正常对照(P=0.009)。将非M3-AML患者以CSRP2 mRNA表达水平中位数为界点分为低、高表达组。两组年龄、性别、初诊时白细胞计数、血小板计数、骨髓原始细胞比例、ETO融合基因表达、FLT3-ITD突变、NPM1突变、预后危险度分层、HSCT患者比例等差异均无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,两组无复发生存曲线差异有统计学意义(χ^2=4.384,P=0.036),CSRP2 mRNA高表达组患者预后好于低表达组。结论:CSRP2高表达的初治成人非M3-AML患者预后更好;CSRP2可能成为成人非M3-AML患者的新的预后分子标志物。

大鼠csrp2基因真核表达质粒的构建及表达

获得大鼠csrp2基因片段并构建真核表达载体。RT-PCR法从大鼠心脏组织中提取总DNA,并扩增出相应大小的csrp2 DNA片段,测序正确后克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),重组质粒酶切鉴定正确后以阳离子聚合物转染Cos-7细胞,分别以RT-PCR方法检测mRN-表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。结果构建了重组质粒pcDNA3.1(-)-csrp2,RTPCR结果证明csrp2可在Cos-7细胞中转录,用间接免疫荧光检测,表达有CRP2蛋白的细胞着染。成功构建了大鼠csrp2基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-csrp2,csrp2基因可以在Cos-7细胞中表达。

过表达CSRP2对人B淋巴瘤细胞Ramos增殖、周期分布、凋亡及CREB表达的影响

目的:探讨过表达半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白2(CSRP2)对人B淋巴瘤细胞Ramos增殖、周期分布、凋亡及CREB表达的影响。方法:通过慢病毒感染的方法构建CSRP2过表达的淋巴瘤Ramos细胞模型(过表达组),以感染对照慢病毒的Ramos细胞为对照。采用RT-PCR和Western blot检测感染效率。采用CCK-8法检测2组细胞增殖情况,采用流式细胞术和Annexin V/PI双染法分别检测细胞周期分布和凋亡,并用Western blot检测CREB的表达水平。结果:与对照组比较,过表达组CSRP2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。CSRP2过表达可促进细胞增殖和细胞周期进展(P<0.05),但对细胞凋亡无影响(P>0.05)。CSRP2过表达可显著上调CREB的磷酸化水平(P<0.05)。结论:CSRP2可能通过上调CREB的表达促进淋巴瘤细胞增殖。

真核表达质粒pcDNA3.1-CSRP2-HA的构建及鉴定

目的:构建并鉴定真核表达质粒PcDNA3.1-CSRP2-HA。方法:据GeneBank中人CSRP2 CDS序列设计并合成引物,提取A549细胞总RNA,并将其逆转录成cDNA作为模板,进行PCR扩增,获得CSRP2目的基因后,再与PcDNA3.1-HA载体进行连接重组,构建PcDNA3.1-CSRP2-HA真核表达质粒,经限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测序分析等方法鉴定后,瞬时转染入A549细胞,Western blot法检验CRP2蛋白表达。结果:成功构建PcDNA3.1-CSRP2-HA真核表达质粒,Western-blot结果显示PcDNA3.1-CSRP2-HA能够在A549细胞中表达。结论:PcDNA3.1-CSRP2-HA真核表达质粒构建并鉴定成功,为后续研究CRP2在炎症诱发氧化损伤机制中的转录调控作用奠定了基础。