葫芦素D对血管新生及bFGF诱导PLCγ/Erk1/2通路激活影响

目的:评价葫芦素D对血管内皮细胞增殖、迁移、成管作用的影响及其作用机制。方法:采用人脐静脉血管内皮细胞株(EA.hy926),通过CCK8细胞增殖检测、划痕实验、管腔形成实验检测葫芦素D对血管新生各环节的作用,并通过Western Blot法检测葫芦素D对bFGF介导的细胞信号通路激活的抑制作用。结果:葫芦素D对血管内皮细胞活性影响较低,同时能够明显抑制血管内皮细胞的迁移、成管能力;能够抑制bFGF刺激下FGFR2及其下游信号通路关键蛋白PLCγ、Erk1/2的磷酸化。结论:葫芦素D具有抑制血管新生的作用,其机制可能与抑制bFGF介导的信号通路激活有关。

2D NMR对苦味西葫芦果实中的一个三萜皂苷进行结构解析(英文)

通过核磁共振谱并结合文献对一个三萜皂苷葫芦素E 2-O--βD-葡萄糖苷进行结构解析.通过2D NMR(1H-1H COSY、HMQC和HMBC)进行了NMR全归属.

葫芦素D通过下调GATA6表达抑制SGC-7901胃癌细胞增殖迁移的作用机制研究

目的:探讨葫芦素D通过下调GATA转录因子6(GATA6)表达抑制SGC-7901胃癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,用MTT法检测葫芦素D对SGC-7901细胞抑制率并确定葫芦素D的干预剂量,将细胞分为对照组、顺铂组、葫芦素D低、中、高剂量组。对照组不进行处理,顺铂组给予终浓度为10.0μmoL/L的顺铂,葫芦素D低、中、高剂量组分别给予终浓度为2.0、4.0、8.0μmoL/L的葫芦素D,继续培养48h后进行检测SGC-7901细胞迁移能力、SGC-7901细胞中miRNA-143和GATA6 mRNA表达水平及细胞凋亡和细胞周期情况测定。结果:随着葫芦素D剂量增加,SGC-7901细胞抑制率增加(P<0.05)。在葫芦素剂量为8.0μmoL/L时,抑制率为53.07%,故选8.0μmoL/L作为最高干预剂量,并设2.0μmoL/L和4.0μmoL/L两个剂量。与对照组比较,顺铂组SGC-7901细胞迁移能力、GATA6 mRNA相对表达量和G0/G1期细胞比例降低,miRNA-143 mRNA的相对表达量、细胞凋亡率和S期细胞比例增加(P<0.05);给予葫芦素D处理后,SGC-7901细胞迁移能力、GATA6 mRNA相对表达量和G0/G1期细胞比例降低,miRNA-143 mRNA的相对表达量、细胞凋亡率和S期细胞比例增加,且呈剂量依赖性(P<0.05),但效果不如顺铂组。结论:葫芦素D能抑制SGC-7901胃癌细胞增殖和迁移,具有一定的抗癌活性,其机制可能与葫芦素D通过下调GATA6表达有关。

王瓜葫芦素D的提取及其对大鼠乳腺癌细胞增殖、凋亡和体内成瘤作用的影响

目的从王瓜中提取葫芦素D,并观察其对大鼠乳腺癌细胞增殖、凋亡和体内成瘤作用的影响。方法采用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析,结合硅胶柱色谱、高效液相色谱法(HPLC)对王瓜果实进行分离纯化,运用现代光谱技术(~1H-NMR)对提取化合物(葫芦素D)的结构进行鉴定。培养大鼠乳腺癌细胞株Walker256,将细胞分为实验1、2、3组和对照组,分别加入2、4、8μmol/L的葫芦素D和等量培养液。采用Ed U法观察细胞增殖情况,TUNEL法观察凋亡情况。将80只雌性SPF大鼠随机分为Con组、Sham组、IP-L组和IP-H组,各20只。Sham组、IP-L组和IP-H组取Walker256细胞制作大鼠乳腺癌骨转移瘤模型,Con组不制作模型;IP-L组经腹腔注射0.75mg/(kg·d)的葫芦素D,IP-H组经腹腔注射1.5 mg/(kg·d)的葫芦素D,Sham组腹腔注射等量生理盐水,每天1次,连续21 d。观察各组大鼠左侧胫骨组织病理变化,测量胫骨肿瘤瘤体大小,观察毒性反应发生情况。结果从王瓜提取物中分离出1个化合物,鉴定为葫芦素D。对照组及实验1、2、3组细胞增殖抑制率分别为5.32%±4.54%、46.17%±4.87%、57.37%±5.15%、64.61%±5.33%,细胞凋亡率分别为6.24%±4.31%、35.43%±5.09%、44.79%±4.92%、73.19%±4.86%,组间两两相比,P均<0.05。Con组、Sham组、IP-L组、IP-H组大鼠转移瘤代谢体积平均值分别为0、2.1、1.7、1.2 cm^3;IP-L组、IP-H组与Sham组相比,P均<0.05;IP-L组与IP-H组相比,P<0.05。Sham组大鼠胫骨骨组织结构紊乱,多处骨皮质缺损,骨髓腔内可见大量肿瘤细胞,骨小梁破坏明显;IP-L组与IP-H组骨质破坏较Sham组轻,IP-H组可见部分正常骨髓组织。Con组、Sham组、IP-L组、IP-H组分别有0、0、6、13只大鼠死亡;IP-L组、IP-H组死亡率与Con组、Sham组相比,P均<0.05;IP-L组死亡率与IP-H组相比,P<0.05。结论在王瓜中分离得到葫芦素D,其可抑制大鼠乳腺癌细胞株Walker256增殖,诱导其凋亡;葫芦素D对大鼠乳腺癌骨转移瘤有生长抑制作用,但可导致大鼠死亡率增加。

葫芦素D抗肿瘤作用研究进展

葫芦素D(Cucurbitacin D)是一种高度氧化的四环三萜类化合物,研究发现其对多种癌症均具有治疗作用,有望成为新型抗肿瘤药物。本文介绍其在抗肿瘤作用方面研究进展。

超高效液相色谱-串联质谱测定葫芦瓜中葫芦素E和葫芦素E-2-O-beta-D-葡萄糖苷

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)测定葫芦瓜中葫芦素E和葫芦素E-2-O-beta-D-葡萄糖苷含量的方法。方法样品以甲醇重复提取后,旋转蒸发浓缩,经HLB固相萃取柱净化。在优化后的仪器条件下,采用电喷雾电离(electron spray ionization,ESI)负离子模式进行电离,并通过多反应监测(multi-selected reaction monitoring,MRM)模式采集目标化合物的离子参数。结果葫芦素E和葫芦素E-2-O-beta-D-葡萄糖苷在一定浓度范围内线性良好,相关系数r分别为0.9998和0.9995,平均回收率范围为80.4%~91.8%,相对标准偏差为3.98%~6.21%,方法检出限(limit of detection, LOD)为10.0和2.0μg/kg。结论该方法操作简单便捷,成本低,回收率高,灵敏度高,重现性好,适合用于测定葫芦瓜中葫芦素E和葫芦素E-2-O-beta-D-葡萄糖苷的含量。

HPLC同时测定绛糖宁胶囊中5种活性成分的含量及聚类分析

目的:建立HPLC法同时测定绛糖宁胶囊中太子参环肽B、葫芦素B、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Diamasil C18(200 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃;乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速:0.9 mL/min;检测波长:203 nm(太子参环肽B)、227 nm(葫芦素B)和254 nm(毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮);采用SPSS 26.0统计软件对绛糖宁胶囊中5种成分含量进行聚类分析。结果:太子参环肽B、葫芦素B、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮分别在1.16~23.20μg/mL、0.64~12.80μg/mL、8.78~175.60μg/mL、5.27~105.40μg/mL、3.59~71.80μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.9991);平均加样回收率分别为98.52%、96.97%、100.15%、98.74%和99.34%,RSD分别为1.61%、1.26%、0.73%、1.12%和0.58%;10批样品聚类分析为2类。结论:该方法操作简便、重复性好,可用于绛糖宁胶囊中太子参环肽B、葫芦素B、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮的含量测定。

高效液相色谱法测定苦味西葫芦中药西瓜苦苷的含量

目的：建立高效液相色谱法测定苦味西葫芦果实中药西瓜苦苷的方法。分析其果实中药西瓜苦苷的含量。方法：采用Shim-Pack CLC-ODS（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱，甲醇-水（52：48）为流动相，检测波长为238nm.柱温为35℃。结果：药西瓜苦苷在1.6～4.8/μg范围内线性关系良好.苦味西葫芦果实中药西瓜苦苷的含量为0.28％，RSD为1.27％。结论：该法稳定、简便，可用于苦味西葫芦药材的质量控制。

甜瓜蒂中主要四环三萜结构鉴定及葫芦素B,葫芦素D含量测定

目的:阐明甜瓜蒂中主要四环三萜类成分化学模式,建立HPLC测定甜瓜蒂药材中葫芦素B和葫芦素D含量的方法。方法:采用UPLC-ESI-Orbitrap-MS/MS技术分析甜瓜蒂中主要的四环三萜类成分,Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以0.1%甲酸-乙腈溶液为流动相梯度洗脱;采用RP-HPLC法测定7批甜瓜蒂药材中葫芦素B和葫芦素D含量,Inert Sustain C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.1%冰乙酸溶液(含庚烷磺酸钠1 g·L^(-1))-乙腈为流动相,检测波长228 nm。结果:在化学模式定性分析中,共发现并初步鉴定出甜瓜蒂中主要的8种四环三萜类成分,包括雪胆素甲,异雪胆素甲,葫芦素I,葫芦素D,葫芦素B及25-脱乙酰基葫芦素B的3个同分异构体;在定量分析中,葫芦素B,葫芦素D与有关物质分离度均符合要求,其质量浓度分别在49.5~297.0 mg·L^(-1)(r=0.999 99),10.3~61.8 mg·L^(-1)(r=0.999 9)与峰面积呈现良好的线性关系,平均回收率分别为99.18%,RSD 1.0%;99.13%,RSD 1.1%。结论:该研究基本阐明了甜瓜蒂中主要的四环三萜类成分,并建立了用于定量的HPLC方法,准确度高,重复性好,可用于甜瓜瓜蒂药材中葫芦素B,葫芦素D的含量测定。

葫芦素D对血管新生的抑制作用

目的研究葫芦素D抑制血管新生作用。方法①通过MTT法检测葫芦素D对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肝癌细胞(HepG2)活力的影响;②通过流式细胞术检测葫芦素D对HUVEC细胞凋亡作用的影响;③通过划痕实验检测葫芦素D对HUVEC细胞迁移作用的影响;④在基质胶上观察葫芦素D对HUVEC毛细管状结构形成的影响;⑤通过鸡胚绒毛尿囊膜模型观察葫芦素D在体内对新生血管的影响。结果①MTT实验结果显示葫芦素D呈剂量依赖性抑制HUVEC和HepG2细胞增殖,通过比较IC_(50)值,发现葫芦素D对于HUVEC的抑制增殖作用明显强于对HepG2细胞的抑制增殖作用;②流式细胞术实验结果显示葫芦素D诱导HUVEC细胞凋亡;③划痕实验结果表明葫芦素D显著抑制HUVEC细胞迁移;④体外血管新生实验结果表明葫芦素D抑制HUVEC在基质胶上形成毛细管状结构;⑤在鸡胚绒毛尿囊膜模型中,发现葫芦素D显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜上血管的生成。结论体内、外实验证明葫芦素D具有抑制血管新生作用。

基于VEGFR2/Src/FAK通路探讨葫芦素D抗血管新生机制

目的探讨葫芦素D对VEGF诱导的血管新生的作用及其机制。方法鸡胚绒毛尿囊膜血管新生实验、大鼠胸主动脉血管内皮迁出与人血管内皮细胞划痕实验检测葫芦素D对VEGF诱导的血管新生和内皮细胞迁移的作用,Western blot技术检测葫芦素D对VEGF诱导的VEGFR2及其下游的Src、FAK磷酸化水平的影响。结果葫芦素D对VEGF诱导的鸡绒毛尿囊膜血管新生具有明显的抑制作用,并能抑制VEGF诱导的大鼠胸主动脉环模型和划痕实验中血管内皮迁移。葫芦素D能够抑制VEGF刺激的VEGFR2、Src、FAK磷酸化。结论葫芦素D具有抑制VEGF诱导的血管新生作用,其机制可能与抑制VEGFR2及其下游的细胞信号通路蛋白活化有关。

葫芦素抗肿瘤作用及其机制研究进展

葫芦素具有四环素葫芦烷核骨架并且高度氧化,现代药理研究表明其具有抗肿瘤、保肝、抗炎、提高机体免疫等多种生物活性,其中葫芦素B、葫芦素D、葫芦素E、葫芦素I、雪胆甲素、雪胆乙素有抗肿瘤活性,对肝癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌及其他肿瘤细胞均有诱导凋亡、抑制增殖的药理作用;能够通过调节信号转导及转录活化因子3(STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和其他信号通路、阻滞细胞周期、影响细胞骨架等,发挥抗肿瘤作用,对部分恶性肿瘤的治疗药物开发具有深远意义。

合子草化学成分的研究(I)

目的研究合子草Actinostemma lobatum全草的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等技术分离纯化,并结合理化性质和波谱学鉴定化合物的结构。结果从合子草全草75%乙醇提取物中分离得到16个化合物,分别鉴定为合子草皂苷A（1）、合子草皂苷C（2）、合子草皂苷D（3）、合子草皂苷E（4）、葫芦素E（5）、β-谷甾醇（6）、胡萝卜苷（7）、α-菠菜甾醇（8）、α-菠菜甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（9）、22,23-二氢-α-菠甾酮（10）、槲皮素（11）、山柰酚（12）、芦丁（13）、槲皮苷（14）、山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷（15）、异槲皮苷（16）。结论化合物5~10为首次从该属植物中分离得到。

基于多元功效成分的瓜蒌皮药材产地现代干燥加工方法研究

目的比较不同干燥方式对瓜蒌皮药材品质的影响,优选出适宜的瓜蒌皮药材产地现代干燥加工方法。方法收集安徽产新鲜瓜蒌皮,分别采用传统与现代产地加工干燥方法[40、50、60、70℃控温热风干燥,40、50、60、70℃微波真空干燥(真空度-0.08 MPa),50、60、70℃中短波红外干燥,-80℃真空冻干干燥,晒干,阴干]加工处理,结合干燥样品外观性状,以药效成分(5种黄酮类芦丁、木犀草苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芹菜素、橘红素,3种三萜类葫芦素D、葫芦素B、葫芦素E)、营养滋补类成分(2种糖类葡萄糖、果糖,18种氨基酸类苯丙氨酸、L-亮氨酸、异亮氨酸、L-色氨酸、γ-氨基丁酸、L-蛋氨酸、L-缬氨酸、脯氨酸、L-酪氨酸、反式-4-羟基-L-脯氨酸、L-苏氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-丝氨酸、L-天门冬酰胺、L-瓜氨酸、L-精氨酸、L-赖氨酸,12种核苷类胸腺嘧啶核苷、2′-脱氧尿苷、腺嘌呤、尿苷、腺苷、2′-脱氧肌苷、肌苷、胞嘧啶、鸟嘌呤、2′-脱氧鸟苷、胞苷、鸟苷)共40种资源性化学成分的组成及含量为评价指标,对不同干燥加工方法所得瓜蒌皮药材样品的品质进行综合评价。利用主成分分析(PCA)法,优选瓜蒌皮最佳现代干燥加工方法。结果不同干燥品中,药效成分及营养滋补类成分含量差异较大,其中果糖及葡萄糖质量分数分别为9.78%~21.32%、4.46%~15.63%;70℃微波真空干燥处理获得的瓜蒌皮所含黄酮类和四环三萜类成分总量最高,40℃控温热风干燥处理的总量最低。通过对14种不同干燥方式获得的瓜蒌皮样品进行综合评价分析,发现70℃控温热风干燥、70℃中短波红外干燥、-80℃真空冻干干燥、50℃微波真空干燥和60℃控温热风干燥方式获得的样品有效成分含量均优于传统晒干。结论结合药材的外观性状、色泽、质地、干燥时间及功效成分含量等因素,基于目前企业设备现状,建议70℃控温热风干燥为瓜蒌皮产地加工条件;基于未来新型设备的发展,70℃中短波红外干燥可作为瓜蒌皮产地加工的发展方向。研究结果将为瓜蒌皮药材产地加工的规范化和品质特征的形成提供借鉴。

药西瓜中三萜类成分的的LC-MS/MS分析研究

目的：运用LC-MS/MS技术研究药西瓜中葫芦素类化学成分。方法：利用LC-MS/MS法进行分析测定。色谱条件：采用ODS-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为0.4%乙酸水溶液（A）-乙腈（B）,梯度洗脱（0～10 min,5%B;10～20 min,5%B→15%B;20～70 min,15%B→75%B;70～75 min,75%B→5%B）,流速1.0 mL·min^-1。质谱条件：ESI离子源;正负离子扫描模式;温度450℃,质量扫描范围：m/z 100～1000。结果：以葫芦素类化合物的质谱裂解规律为指导,参照药西瓜中已报道成分的质谱数据,分析推断了药西瓜中可能含有葫芦素L-2-O-β-D-葡萄糖苷、药西瓜苷B、葫芦素E-2-O-β-D-葡萄糖苷、双氢异葫芦素B-25-乙酯和葫芦素E等8个化学成分。结论：本实验建立的分析方法能够较全面地反映出药西瓜中葫芦素类的化学成分,为进一步开发利用该药材提供实验依据。