藏药山莨菪组织培养技术研究

以田间栽培两年生山莨菪幼芽(休眠芽)、带叶柄幼叶为外植体,通过器官培养分化芽的途径达到快速繁殖的目的。MS基本培养基附加NAA0～1.0mg·L^(-1)+6-BA2.0～3.0mg·L^(-1)+ZT0～3.0mg·L^(-1),适于丛生芽的诱导与增殖;附加2,4-D2.0mg·L^(-1)+NAA0.2mg·L^(-1)+6-BA0.2mg·L^(-1),适于愈伤组织的诱导与继代培养,诱导率高达93.2%;1/2MS培养基附加NAA1.0mg·L^(-1)+3.0%的蔗糖,适于生根诱导,生根率为100%。

山莨菪根HPLC指纹图谱研究

目的：建立山莨菪根的HPLC指纹图谱,为其药材质量控制提供一种可靠的方法。方法：采用UltimateAQC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱;以乙腈-10mmol/LKH2PO4缓冲液（用H3PO4调节pH至3.0）为流动相梯度洗脱;流速1.0mL/min;柱温30℃;检测波长210nm;进样量10μL。并对测得指纹图谱进行相似度评价和主成分分析。结果：18批不同山莨菪根样品共确立了15个共有峰,建立了山莨菪根的HPLC对照指纹图谱,结合保留时间和紫外光谱,指认了樟柳碱、东莨菪碱、山莨菪碱、阿托品4个特征峰。18批野生山莨菪根的相似度在0.891~0.987之间。对15个共有峰进行主成分分析,综合评判得分在-0.85~0.89之间。结论：所建立的指纹图谱具有良好的精密度、重复性和稳定性,为山莨菪根的鉴别和质量控制提供了更全面的信息。

栽培与野生山莨菪根部矿质元素含量的季节特征

分别采集栽培、移栽及野生山莨菪样品,采用原子吸收光谱仪测定元素钾、钠、钙、镁、铁;用721分光光度计测定磷。结果表明:栽培、移栽和野生山莨菪根部对各种矿物质元素积累能力类似,即:对镁和钠的积累最高,对磷最低。同时,钙的积累与其他几种元素呈负相关。野生山莨菪的多数元素含量均高于另外两种。

青海栽培山茛菪重金属元素特征

采集4～6年生人工栽培山莨菪,测定其根部铅、镉、砷、汞4种重金属元素含量。结果表明,4～6年生栽培山莨菪,重金属元素平均含量水平由高到低依次为:砷,镉,铅,汞。并且各种重金属的含量随着年份和生物量的增加而有所积累。砷、铅和汞含量的季节变化规律较明显,而镉含量则趋于稳定。

青海省西宁种植山莨菪中重金属元素特征

青海地道中藏药材山莨菪人工引种栽培试验成功。采集两年生和三年生种植山莨菪在不同生长期的植物全植株,采用流动注射氢化法原子吸收光谱分别测试了其不同组织中铅、砷、汞、镉等重金属元素含量。结果表明,山莨菪在生长周期内吸收的重金属元素并非全部蓄积在根组织器官中,部分重金属元素通过年生长周期内的生长发育而随着地上茎叶部分等组织器官的枯萎被代谢排出植物体外。

高效液相色谱法测定栽培山莨菪3种托烷类生物碱的含量

为了山莨菪植物资源的可持续利用，采用高效液相色谱对栽培山莨菪中3种托烷类生物碱同时进行定量测定，将3种生物碱很好地分离开来。并对不同生长周期山莨菪的季节规律进行了研究。研究结果表明：不同生长周期，3种烷类生物碱的含量均按照樟柳碱，阿托品、东莨菪碱递减；3年生和4年生栽培山莨菪中各种生物碱的含量水平的季节特征各异。

青海种植山茛菪根部重金属元素特征

采集2～7年生人工种植山莨菪，用原子荧光光谱仪测定了镉、砷、汞，原子吸收光谱仪测定铅。结果表明，2—7年生种植山莨菪在每年9月份中，4种重金属元素含量水平由高到低依次为：砷、镉、铅、汞；铅和镉、砷和铅、且砷和镉之间均存在一定相关性。各种重金属的含量随着年份和生物量的增加而有所积累。

青海省西宁种植山莨菪中矿物质元素分布特征

采集2年生和3年生人工种植山莨菪在不同生长期的植物全植株,采用原子吸收光谱仪分析测试其钾、钠、钙、镁等矿物质元素含量。结果表明:2年生与3年生种植山莨菪的根、茎、叶等组织器官中各矿物质元素含量各异,3年生种植山莨菪各组织器官中矿物质元素含量略高于2年生同一生长期相应组织器官中矿物质元素的含量,即随种植山莨菪生物量的增加其对矿物质元素的需求量表现为略有增加的趋势。

青海省西宁种植山莨菪中微量元素特征

青海地道中藏药材山莨菪人工引种栽培试验成功。采集二年生和三年生种植山莨菪在不同生长期的植物全植株,采用原子吸收光谱仪分析测试其铜、锌、铁、锰、钴、镍等微量元素含量。结果表明:二年生山莨菪各组织器官中铁、锰、钴、镍元素含量高于三年生,而铜、锌元素含量却为三年生高于二年生,即种植山莨菪各组织器官的生长随着生长年龄的增加,其生长速度在减小,而生物量在继续增加。

青海种植山茛菪根部微量元素含量特征

青海地道中藏药材山莨菪人工引种栽培试验成功。采集2—7年生人工种植山莨菪，采用原子吸收光谱仪测定其根部的铜、锰、镍、钴、锌5种微量元素含量。结果表明：铜和锌最高，锰次之，钴和镍最低。在2～7年的生长周期中，铜和钴具有正相关关系，最高含量均出现在第7年；锰和锌在植物体内起着协同或促进的作用，最高含量均在第五年。

山莨菪籽油中脂肪酸组成的研究

采用毛细管柱气相色谱法测定了山莨菪籽油中的脂肪酸组成及相对含量.鉴定了9种脂肪酸,占脂肪酸总量的99.57%,不饱和脂肪酸为90.54%,其中亚油酸71.20%.样品所含主要脂肪酸为棕榈酸、油酸和亚油酸.

青海栽培山茛菪矿质元素特征

青海地道中藏药材山莨菪人工引和栽培试验成功。采集4—6年生人工栽培山莨菪，采用原子吸收光谱仪测定元素钾、钠、钙、镁、铁；用721分光光度计测定磷。结果表明：4—6年生栽培山莨菪根部对各种矿物质元素积累能力均相同，即：对镁和钠的积累最高，对磷和铁最低。同时，钾、钠、镁和磷的季节规律较为相近，有相互协同的关系。根组织对钙、铁、镁和磷的积累随年份的增加而递增。

山莨菪根中水溶性成分的分离鉴定及含量测定研究

目的:对山莨菪根水溶性成分进行分离鉴定,并建立其含量测定方法。方法:利用传统提取、大孔吸附树脂、制备液相色谱、HPLC-DAD、质谱和核磁共振对山莨菪根水溶性成分进行分离、纯度分析和结构鉴定。采用HPLC-DAD对山莨菪根中分离得到的水溶性成分进行含量测定。对所建立的HPLC-DAD含量测定方法进行方法学验证以评估方法的可行性。结果:从山莨菪根中分离得到水溶性成分咖啡酰丁二胺、东莨菪苷和法荜枝苷。建立的山莨菪根中咖啡酰丁二胺、东莨菪苷和法筚枝苷HPLC含量测定方法符合方法学验证要求。结论:本研究为进一步阐明山莨菪根的物质基础和完善其质量标准提供了科学依据。

基于ISSR分子标记的野生山莨菪遗传多样性研究

目的通过对甘肃、青海山莨菪Anisodus tanguticus遗传多样性研究,为野生山莨菪资源的保护提供依据。方法采用ISSR分子标记技术,对11个野生山莨菪居群的127份DNA进行扩增,对其扩增条带进行遗传多样性分析,在所得遗传距离的基础上进行UPGMA聚类和Mantel检验地理距离,对野生山莨菪居群间遗传多样性差异进行分析。结果 10条ISSR引物共检测到131个条带,每条引物11~15个,平均13.1个,共858个多态性位点;居群平均多态性位点百分率(PPB)59.54%;Nei’s遗传多样性指数(H)为0.220 4,Shannon信息指数(I)为0.325 4;遗传距离变化范围0.073 3~0.306 2;Mantel检验P=0.002。结论 11个野生山莨菪居群间具有较高的遗传多样性,各居群间遗传距离与地理距离显著相关,甘肃,青海山莨菪居群间存在较高多态性,物种遗传多样性较为丰富,对野生山莨菪资源的保护与可持续利用提供了参考。

不同生境山茛菪根部重金属元素季节含量特征

目的:测定3种不同生境的山莨菪样品(即栽培山莨菪、移栽山莨菪以及野生山莨菪)根部各类重金属元素的含量。方法:采用原子荧光光谱仪测定元素镉、砷、汞,原子吸收光谱仪测定元素铅。结果:栽培、移栽山莨菪根部的砷、汞均有明显季节变化规律,镉含量没有显著的季节特征;移栽、野生2种生境的山莨菪之间存在正相关关系。结论:不同生境下,山莨菪根部各种重金属元素的积蓄规律有明显差异。随着城市的工业生产和交通发展,在土壤中累积并由此进入栽培山莨菪根部的重金属必然多于地处偏僻环境、受工业污染较少的移栽和野生山莨菪。同时,随着海拔的升高,各种重金属元素含量均减少。

山莨菪中1个新的降碳香根螺烷型倍半萜

目的研究山莨菪Anisodus tanguticus的化学成分及其生物活性。方法采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、制备薄层色谱和半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,运用多种现代波谱学手段对化合物进行结构鉴定,进一步通过X-ray单晶衍射分析和计算电子圆二色光谱(electronic circular dichroism,ECD)确定其绝对构型;采用CCK-8法测定化合物对人宫颈癌HeLa细胞、人胃癌HGC-27细胞和人肝癌HepG2细胞的细胞毒活性,采用Griess法测定化合物对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放NO的影响。结果从山莨菪中分离得到1个新的降碳香根螺烷型倍半萜,鉴定为(2R,5R,6S,7R,8R)-15-降-香根螺烷-9(10),11(12)-二烯-7,8,13-三醇(1);活性评价显示化合物1无细胞毒和抗炎活性。结论化合物1为从山莨菪中发现的新化合物,命名为山莨菪醇E,其在香根螺烷型骨架的基础上,经氧化脱羧失去C-15而成为降碳倍半萜。