E.coli Nissle 1917(EcN)curli菌毛和鞭毛对其生物被膜形成的影响

E.coli Nissle 1917是被广泛认可的益生菌,可以通过形成生物被膜定殖在肠道中抑制沙门氏菌等病原菌的生长。通过λ-Red同源重组系统构建curli菌毛合成基因(csgA)和鞭毛调控基因(hnsA)突变菌株,探究curli菌毛和鞭毛对EcN生物被膜形成的影响。结果表明,curli菌毛对EcN运动能力以及生物膜形成没有影响;EcNΔhnsA菌株的运动能力下降,生物被膜含量升高,说明鞭毛通过促进EcN运动,抑制细菌的附着,从而抑制生物膜的形成。

MBP-CsgAⅢ融合蛋白的表达和纯化

目的构建CsgA亚单位蛋白的原核表达系统,获得纯化的MBPCsgAⅢ融合蛋白,为进一步研究CsgA的生物学特性和致病机理奠定基础。方法用PCR的方法从大肠杆菌野生株MC4100株中扩增出csgA基因,连接到pMALp2质粒上,构建pZBaⅢ重组质粒。将重组质粒转入XL1Blue菌中用IPTG诱导表达,用AmyloseResin纯化系统纯化。结果成功构建了MBPCsgAⅢ融合蛋白的原核表达系统,获得大量纯化的MBPCsgAⅢ融合蛋白。结论成功构建了MBPCsgAⅢ融合蛋白的原核表达系统,应用该系统能有效表达MBPCsgAⅢ融合蛋白,为进一步研究CsgA的生物学特性和致病机理奠定了基础。

奶牛乳腺炎源性大肠杆菌csgC基因的克隆及载体构建

根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列设计了1对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,测序,结果表明,扩增片段含有333个核苷酸,编码111个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近,氨基酸序列同源性为99.7%。该基因与原核表达载体pET32a+相连,转入BL21(DE3)感受态细胞。挑选阳性菌落经PCR鉴定和酶切鉴定后表明成功构建原核表达载体pET32a+/csgC。

奶牛乳腺炎大肠杆菌csgC基因的克隆及序列分析

根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列,设计了一对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,测序。结果表明,扩增片段含有333个核苷酸,编码111个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近,氨基酸序列同源性为99.7%。Curli菌毛csgC基因的克隆,为获得重组csgC蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。