Existence of Heme Oxygenase-carbon Monoxide-cyclic Guanosine Monophosphate Pathway in Human Trabecular Meshwork Cells In Vitro

To confirm the existence of heme oxygenase (HO)-carbon monoxide (CO)- cyclic guanosine monophosphate (cGMP) pathway in the cultured human trabecular meshwork cells (HTMCs) in vitro, and to evaluate the inductive role of hemin on this pathway, HTMCs of the third to fourth generation were cultured in vitro. Reverse transcripase-polymerase chain reaction (RT-PCR) was employed for detection of HO-1 and HO-2 mRNA. Immunohistochemical staining was used to detect HO-1 and HO-2 proteins. Hemin was added into the culture solution. The HO-1 mRNA levels were quantified by RT-PCR. The relative amount of carbon monoxide released into the media was measured with the quantifying carbon monoxide hemoglobin (HbCO) by spectrophotometry. Radioimmunoassay was used to determine changes of cGMP in HTMCs. The results showed that cultured cells had the specific characteristics of HTMCs. Both HO-1 and HO-2 genes were expressed in HTMCs, as well as HO-1 and HO-2 proteins in HTMCs. Hemin induced HO-1 mRNA, HbCO and cGMP in a dose-dependent manner. In conclusion, HO-CO-cGMP pathway exists in the cultured HTMCs and can be induced by hemin. Pharmacological stimulation of HO-CO-cGMP pathway may constitute a novel therapeutic approach to rescuing glaucoma.

稀土金属离子对5’-AMP和3’,5’-cAMP的水解切断作用

用 HPL C法研究了稀土金属离子 RE3+ (如 L a3+ ,Ce3+ ,Nd3+ ,Sm3+ ,Eu3+ ,Tb3+ )对 5’-腺苷 -磷酸 (5’-AMP)和 3’,5’-腺苷环磷酸 (3’,5’- c AMP)的催化水解切断作用。结果表明 :在温和条件下 ,稀土金属离子对 5’-AMP无明显的切断作用 ,而 Ce3+ 对 3’,5’- c AMP有很好的切断作用 ;另外 ,H2 O2 的加入能极大地促进稀土金属离子对 5’- AMP和 3’,5’- c AMP的水解切断作用。 p H值对稀土金属离子水解切断 5’-

鱼腥蓝细菌PCC7120 alr3504基因缺失突变体的构建及表型分析

c-di-GMP是新发现的真细菌所特有的第二信使,其合成和降解由双鸟苷酸环化酶和磷酸二酯酶分别完成。经生物信息学分析,鱼腥蓝细菌PCC7120基因alr3504可能编码含有保守GGDEF结构域的双鸟苷酸环化酶。【目的】为了鉴定该基因的功能,【方法】采用标记置换方法将alr3504缺失。【结果】敲除该基因后,发现缺失突变体的形态、生长速度及异形胞发育与野生型无明显差异,但在盐胁迫条件下,突变体比野生型对钠盐更敏感。【结论】可见alr3504虽不直接影响异形胞发育,但参与了其它信号途径,研究结果为阐明蓝细菌丰富而复杂的信号转导机制奠定了基础。

HPLC法测定大枣环磷酸腺苷(c-AMP)的含量

目的建立大枣环磷酸腺苷（cyclic adenosine 3′,5′-monophosphate,c-AMP）含量的测定方法。方法高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）,采用MGC18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为0.05 mol/L KH2PO4-Methanol（90：10-10：90）;梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果 c-AMP在15.6~500.0 ng范围内呈良好的线性关系（r=1.000）,平均回收率为100.35%±1.58%,RSD为1.58%。结论本方法操作简便、灵敏度高、准确性和重现性好,可作为大枣的质量控制方法。

DARPP-32与脑功能障碍

多巴胺和环磷酸腺苷调节的磷蛋白(DARPP-32)是在多巴胺信息传递及整合过程中的一个关键分子,其通过自身不同位点的磷酸化对蛋白质磷酸化和去磷酸化过程发挥着双向调控的作用,整合多种胞内信号转导,调节神经元的电学和化学性质以及动物的生理行为反应,参与多种生理功能和病理过程。本文就DARPP-32的结构、功能和其调节作用及其在脑功能障碍相关疾病研究中的应用予以综述。

解毒通络调肝方干预TGR5/cAMP信号通路靶向NLRP3炎症小体保护胰岛β细胞的作用机制

目的:探讨解毒通络调肝方通过胆汁酸G蛋白偶联受体5(TGR5)/环状磷酸腺苷(cAMP)信号通路靶向NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体保护胰岛β细胞的干预作用。方法:选用32只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、解毒通络调肝方低、高剂量组(3.6、7.2 g·kg^(-1))、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1)),8只db/m小鼠作为空白组,药物干预8周,每2周检测各组小鼠空腹血糖(FBG),并在末次给药后,进行口服糖耐量实验(OGTT),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测空腹胰岛素(FINS)并计算β细胞功能稳态指数(HOMA-β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β水平。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织病理学改变,免疫荧光测定小鼠胰腺组织胰岛素(Insulin)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测TGR5/cAMP信号通路和NLRP3炎症小体关键靶点的蛋白、mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG、OGTT、FINS、IL-6、TNF-α和IL-1β显著升高(P<0.01);与模型组比较,药物治疗6周后,解毒通络调肝方组和二甲双胍组的FBG水平显著下降(P<0.01);OGTT实验结果表明,与模型组比较,各给药小组小鼠各时间点的血糖均有降低(P<0.05,P<0.01),解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组FINS、TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05,P<0.01),解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组IL-1β水平显著降低(P<0.01)。胰腺病理显示模型组小鼠的胰岛形状不规则,分布不均匀,有萎缩的征象,解毒通络调肝方干预后,其细胞计数增加,边界更清晰;免疫荧光结果表示,空白组小鼠的胰岛细胞排列有序,形态饱满,伴有适当的胰岛素分泌,而模型组胰岛细胞形态扭曲,结构萎缩,胰岛素分泌变少,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组小鼠的胰岛素含量显著增加。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1) mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组促进了TGR5和cAMP mRNA的上调,并下调了NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠TGR5蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组TGR5蛋白显著升高(P<0.01)。与空白组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方各剂量组、二甲双胍组Caspase-1、ASC蛋白表达显著降低(P<0.01),解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中cAMP含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组小鼠cAMP含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:解毒通络调肝方保护db/db小鼠的胰岛β细胞,其作用机制可能与调节TGR5/cAMP信号通路抑制NLRP3炎症小体有关。

血管钠肽对中度低氧诱导的心肌细胞蛋白合成有抑制作用

实验探讨了心房钠尿肽家族新成员血管钠肽 (vasonatrinpeptide ,VNP)对中度低氧诱导的心肌细胞蛋白合成的影响。在培养的新生大鼠心肌细胞上 ,用四唑盐 (MTT)比色实验、总蛋白含量测定和3H 亮氨酸掺入实验等方法观察细胞数和蛋白合成情况 ,并用放免法测定VNP对细胞内环鸟苷酸 (cGMP)和环腺苷酸 (cAMP)以及培养上清液中内皮素含量的影响 ,探讨VNP的作用机制。结果显示 ,重度低氧 2 4h ,心肌细胞数和蛋白合成均降低 ,而中度低氧显著增加蛋白的合成 ,具有促心肌细胞肥大的作用。VNP浓度依赖性地抑制中度低氧诱导的心肌细胞蛋白合成增加 ,并且升高细胞内cGMP水平 ,降低低氧诱导的培养上清液中内皮素的含量。结果提示 :VNP抑制中度低氧诱导的新生大鼠心肌细胞蛋白合成增加 ,该作用与其升高细胞内cGMP浓度、降低低氧诱导的内皮素合成和

华蟾素抗肿瘤作用机理的初步探讨

华蟾素注射液是以蟾皮为主要原料研制而成的一种具有抗肿瘤作用的水溶性制剂。本文对其抗肿瘤机理的研究结果初步表明:华蟾素注射液对体外培养的H_(22)腹水型肝癌细胞无直接杀伤作用,但能明显抑制其DNA和RNA的生物合成,且抑制作用随着药物剂量的增大而增强。该注射液尚能提高荷瘤小鼠血浆内cAMP含量和cAMP/cGMP比值,并使之恢复到正常水平。

牛蒡子苷对小鼠原代骨骼肌细胞磷酸二酯酶活性及细胞生长的影响

【目的】以茶碱为参照,观察中药成分牛蒡子苷对原代骨骼肌细胞磷酸二酯酶(Phosphodiesterase,PDE)活性及蛋白质合成的影响,探讨中药通过抑制PDE促进肌肉生长的作用及机理。【方法】分离1～3日龄ICR小鼠四肢肌肉用于骨骼肌原代细胞培养,在培养至第5～6天时向培养基中添加不同浓度的牛蒡子苷和茶碱,以不含牛蒡子苷和茶碱的培养基为阴性对照,继续培养24h,采用HPLC、ELISA以及考马斯亮蓝法分别测定骨骼肌细胞cAMP PDE的活性、细胞内cAMP水平以及细胞总蛋白质合成。【结果】牛蒡子苷终浓度达到2.5μg·ml-1、茶碱终浓度为20μg·ml-1时均能极显著抑制原代培养骨骼肌细胞cAMP PDE的活性(P<0.01),显著提高细胞内cAMP水平(P<0.05),极显著促进肌细胞总蛋白质的合成(P<0.01)。【结论】中药成分牛蒡子苷具有通过调节骨骼肌细胞内PDE的活性和cAMP水平,增加肌细胞蛋白质合成,促进骨骼肌细胞生长的作用。结果提示对PDE有抑制作用的中药有望成为促进动物生长的新型饲料添加剂。

异丙酚、氯胺酮对大鼠不同脑区cGMP含量的影响

在中枢神经系统（ＣＮＳ），存在有一氧化氮／环鸟苷酸（ＮＯ／ｃＧＭＰ）信号转导系统，ＮＯ和ｃＧＭＰ可发挥第二信使作用〔１〕。异丙酚（ｐｒｏｐｏｆｏｌ）和氯胺酮（ｋｅｔａｍｉｎｅ）均为临床常用的静脉麻醉药，它们分别通过增强ＧＡＢＡ能神经功能或阻断ＮＭＤＡ...

环腺苷酸对脑胶质瘤细胞诱导分化的实验研究

目的:探讨环腺苷酸(cAMP)对大鼠神经胶质瘤细胞C6的诱导分化作用。方法:C6细胞经不同浓度的cAMP诱导后,应用MTT分析法、软琼脂克隆形成、电镜检测、流式细胞仪、GFAP免疫组化染色及TUNNEL染色等法,检测C6细胞的分化及凋亡情况。结果:0.2mmol/LcAMP即可诱导C6细胞分化,表现为增殖抑制、细胞突起增长增多、G1期阻滞、GFAP高阳性表达、线粒体增多,细胞核变小等,且有浓度依赖关系,10mmol/LcAMP可诱导出现凋亡。结论:cAMP可明显抑制C6细胞增殖、诱导细胞分化甚至凋亡。

粒细胞白血病患者环核苷酸代谢的研究

通过对２１例粒细胞白血病患者血浆环一磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）含量、腺苷酸环化酶（ＡＣ）、环腺苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ）比活性和环一磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）含量进行检测，并与１８例非白血病患者和２２例正常人血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量和ＡＣ、ＰＤＥ比活力进行比较，发现急性和慢性粒细胞性白血病组的ｃＡＭＰ水平显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）、ＡＣ比活力也显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）、ｃＧＭＰ水平显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），而ＰＤＥ比活力较正常对照组无明显差异（Ｐ＞０．０５）。在非白血病组，上述指标较正常对照组的差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。本文结果提示粒细胞白血病患者ｃＡＭＰ水平降低并伴随着ｃＧＭＰ水平的增高，呈相反现象，而ｃＡＭＰ水平降低的原因系由于腺苷酸环化酶（ＡＣ）比活力下降的结果，并对ＡＣ比活力下降的机理以及造成粒细胞白血病及其前期细胞快速增殖和异常分化的病理生理机制进行了讨论。

离子交换法提取大枣中环磷酸腺苷(cAMP)的工艺研究

环磷酸腺苷(cAMP)作为第二信使参与多种生理生化过程的调节,是人体内重要的生理活性物质。本文采用水浸提和6000Da超滤膜过滤方法对大枣进行预处理,从5种树脂中选型最合适的树脂,并对提取工艺进行确定。结果表明,大枣在小颗粒状(0.3cm)捣碎状态下,60℃水浸提12h,cAMP提取效果最好。通过考察SD5、SD8、D01、D05和D13五种型号离子交换树脂,发现D13型树脂提取大枣中cAMP效果最佳。选用的洗脱剂为0.05mol/LHCl,流速为1.5mL/min。得到产品产率为65.0%,其中cAMP含量37.5%。

雌激素缺乏引起雌性SD大鼠血小板激活

目的研究雌激素缺乏对雌性SD大鼠血小板聚集功能的影响及其与一氧化氮相关的作用机制。方法雌性SD大鼠随机分为假手术组、卵巢切除组以及卵巢切除补充雌激素组,分别施行假手术、卵巢切除术以及在卵巢切除术后第3天开始皮下注射补充雌激素,药物补充4周后处死动物,提取血清检测血清雌激素水平,提取富小板血浆测定血小板聚集功能,并用ELISA方法测定血浆中一氧化氮生物活性指标环磷酸鸟苷的水平。结果卵巢切除组雌性SD大鼠血清雌激素水平明显降低,雌激素补充使卵巢切除补充雌激素组动物的雌激素水平回复到假手术组状态。卵巢切除组雌性SD大鼠血小板聚集率显著升高;卵巢切除补充雌激素后血小板聚集率较前者明显回落,但仍高于假手术组聚集水平;血浆中环磷酸鸟苷水平在卵巢切除组显著下降,补充雌激素后血浆中环磷酸鸟苷水平与假手术组差异无显著性。结论雌激素缺乏会促进雌性SD大鼠的血小板聚集,其机制可能与血浆中一氧化氮/环磷酸鸟苷水平下降有关。

cGMP对原代培养猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通遭的作用

3′，5′-环一磷酸鸟苷（cGMP）具有激活血管平滑肌细胞膜上钙激活钾通道（KCa通道）的作用，从而引起血管平滑肌细胞的舒张。但cGMP激活KCa通道的机制存在争论。本工作应用膜片箝技术以原代培养猪冠状动脉平滑肌细胞为对象研究了cGMP影响KCa通道的机制。实验结果显示：（1）在cell－attached膜片方式下，当浴液内游离Ca2+浓度为10－7mol／L，膜电位为＋70mV时，不同浓度的cGMP的膜透过类似物8－bromo-cGMP（0．25mmol／L，0．50mmol／L，1．00mmol／L）对此类通道有明显的激活作用；（2）在inside-out膜片方式下，1．00mmol／L的8－bromo－cGMP对通道却无激活作用。说明cGMP对KCa通道的激活作用并非是直接的，而是需要经过一系列的胞内过程才能实现。

环腺苷酸的研究及其在动物营养中的应用

环腺苷酸(cAMP),是环状核苷酸中的一种,具有多种生物学活性,被称为激素作用中的“第二信使”(相对激素为“第一信使”而言)。本文主要就cAMP的研究概况、影响因素、生物学功能及其在动物营养中的应用作一综述。

磷酸二酯酶抑制剂对枯草芽孢杆菌发酵环磷腺苷的影响

为了提高枯草芽孢杆菌Bacillus.subtilis jsim-1277的环磷腺苷发酵能力,试验了磷酸二酯酶同工酶抑制剂对产生环磷腺苷的影响。结果表明:西马多丁和氨茶碱有良好的促进环磷腺苷生产作用,在联合使用的最佳条件下,增产28%,达到9.14 g/L。

钒酸盐对糖尿病大鼠糖原的影响与cAMP的关系

目的在链脲佐菌素（ＳＴＺ）糖尿病大鼠模型观察钒酸盐（Ｖａ）对骨骼肌和肝脏糖原的影响与ｃＡＭＰ的关系。方法用正钒酸钠分别管饲正常对照大鼠和ＳＴＺ致糖尿病大鼠，观测肝脏和骨骼肌的糖原与ｃＡＭＰ的变化趋势。结果与正常对照组比较，糖尿病骨骼肌糖原含量下降（Ｐ＜０．０１），肝糖原含量升高（Ｐ＜０．０１）；Ｖａ使肌糖原上升４７％（Ｐ＜０．０１），肝糖原下降５０％（Ｐ＜０．０１），均恢复至正常水平，提示至少有部分肝糖原向骨骼肌转移。Ｖａ同时升高肝ｃＡＭＰ，降低骨骼肌ｃＡＭＰ，与糖尿病动物使用Ｖａ后肌肝糖原变化相反。结论本试验提示ｃＡＭＰ在Ｖａ导致的肝糖原向骨骼肌转移中发挥一定作用。

高压液相色谱-质谱法和高效液相色谱法分析籽瓜中环磷酸腺苷

采用高压液相色谱-质谱法鉴定籽瓜中的环磷酸腺苷,并建立高效液相色谱法测定籽瓜中环磷酸腺苷的含量,对样品提取条件进行优化。结果表明:环磷酸腺苷在0.1~100 mg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.9999;平均加标回收率为98.40%,相对标准偏差为3.22%。经单因素试验和正交试验,确定优化的提取条件为料液比1:12(鲜样)和1:60(干样)水提取,提取温度90℃、提取时间40 min、提取次数3次。样品前处理和分析方法准确、简便、可靠、重复性好,可用于籽瓜中环磷酸腺苷含量的分析测定。

大黄致脾虚及四君子汤复健小鼠血浆中cAMP与脾PFC含量的变化

大黄和“四君子汤”作用的免疫学机理的报导尚很少见。本文研究表明，大黄致脾虚小鼠，血浆中环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）与空班形成细胞（ＰＦＣ）水平显著降低（Ｐ＞０．０１）．脾虚小鼠灌饲“四君子汤”复健后，而自然恢复小鼠的ｃＡＭＰ和ＰＦＣ水平与对照组比较仍有显著差异（Ｐ＜０．０５）．揭示大黄是一味很好的体液免疫抑制剂，“四君子汤”是很好的免疫增强剂。ｃＡＭＰ和ＰＦＣ的相关变化，可作为中医脾虚证的免疫学指标。