电针对阿片类药物耐受大鼠海马G蛋白偶联受体及cAMP、CREB表达的影响

目的观察电针对阿片类药物耐受大鼠机械刺激缩足反应阈值(Paw withdrawal mechanical thresh⁃old,PWMT))、海马组织G蛋白偶联受体(G Protein-Coupled Receptors,GPCRs)及环磷酸腺苷(cyclic AMP,cAMP)、cAMP反应元件结合蛋白(cyclic-AMP response binding protein,CREB)表达的影响,探索G蛋白-谷氨酸受体-cAMP通路是否为电针治疗阿片类药物耐受的可能机制。方法选取60只SPF级SD大鼠,雌雄各半,按随机数字表法分为生理盐水对照组、药物耐受组、谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组、电针+药物耐受组及电针+谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组,每组各12只。通过对药物耐受组、谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组、电针+药物耐受组及电针+谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组正常大鼠连续腹腔注射吗啡9 d,2次/d,制备吗啡耐受(Mor⁃phine tolerance,MT)模型,建模成功后,4组继续给予连续7 d腹腔注射吗啡,谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组在予腹腔吗啡注射前0.5 h,予腹腔注射谷氨酸受体抑制剂;电针+药物耐受组在予腹腔吗啡注射后0.5 h,予双侧“合谷”“内关”“三阴交”及“足三里”穴位电针干预,断续波,频率2 Hz,2次/d,每次干预时间为10 min,连续7 d;电针+谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组给予谷氨酸受体抑制剂和吗啡后,再进行同电针+药物耐受组相同的电针干预。各组分别于造模前、造模第1天、3天、6天、9天和建模成功后第1天、3天、5天、7天检测左足PWMT;采用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)法检测大鼠海马组织GPCRss、cAMP、CREB蛋白表达,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆β-内啡肽(β-EP)含量。结果与生理盐水对照组比较,药物耐受组、谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组、电针+药物耐受组及电针+谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组大鼠注射吗啡后第1天、3天、6天PWMT明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),但注射吗啡9 d后降低至基础水平,与生理盐水对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),说明MT模型造模成功;与药物耐受组比较,谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组、电针+药物耐受组、电针+谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组大鼠在第3天、5天、7天的PWMT升高,差异有统计学意义(P<0.01);与电针+谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组比较,电针+药物耐受组大鼠在第3天、5天、7天的PWMT明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与生理盐水对照组比较,药物耐受组、谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组、电针+谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组大鼠海马组织中CREB、cAMP的相对表达均升高,GPCRss的表达相对下降,差异有统计学意义(P<0.01);与药物耐受组比较,谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组、电针+药物耐受组和电针+谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组大鼠海马组织中CREB、cAMP的相对表达均有所下降,差异有统计学意义(P<0.01),电针+药物耐受组大鼠海马组织中GPCRss的表达相对升高,差异有统计学意义(P<0.01);与电针+谷氨酸受体抑制剂+药物耐受组比较,电针+药物耐受组大鼠海马组织中CREB、cAMP的相对表达均降低,GPCRs的表达相对升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论电针可明显改善MT模型大鼠阿片类药物耐受效应,其机制可能与下调大鼠海马组织中cAMP、CREB蛋白表达,促进β-EP表达,进而减弱G蛋白-谷氨酸受体-cAMP通路上调有关。

磷酸二酯酶在慢性疼痛与阿尔茨海默病共病中的作用研究进展

慢性疼痛与阿尔茨海默病(AD)是困扰人类的两大疾病。流行病学调查显示,慢性疼痛患者常伴有情感和认知功能异常,而AD患者也常伴有慢性疼痛,这提示慢性疼痛与AD可能存在相似或共同的病理生理机制,但其详细机制尚不明确。磷酸二酯酶(PDE)具有特异性水解细胞内第二信使环磷酸腺苷(cAMP)和(或)环磷酸鸟苷(cGMP)的功能。最新研究报道,PDE家族中PDE2,4,5或7亚型可通过激活cAMP/蛋白激酶A和(或)cGMP/蛋白激酶G,促进其下游信号通路磷酸腺苷反应元件结合蛋白的磷酸化和脑源性神经营养因子的表达,从而不同程度地改善AD小鼠的认知功能障碍,缓解慢性疼痛小鼠的痛觉异常。本文综述PDE在慢性疼痛和AD共病中的作用及相关机制。

桃金娘对颈动脉血栓形成的影响及其机制的实验研究

目的探讨桃金娘对血栓形成的影响及其机制。方法经大鼠颈静注射桃金娘5、10 mg/kg,用血栓生成仪观察大鼠颈动脉血栓形成情况;分别采用全血与桃金娘及生理盐水孵育5 min,用全血血小板聚集仪观察全血血小板聚集情况;用ELISA法检测血小板环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的含量;用硝酸还原酶法观察血小板释放NO情况。结果桃金娘5 mg/kg和10 mg/kg能够促进大鼠颈总动脉血栓形成,堵塞率分别为(87.46±10.31)%和(95.26±12.42)%。200、400和800μg/mL的桃金娘均能够诱导全血血小板聚集,其最大聚集率分别为(0.75±0.50)、(3.75±2.36)和(7.75±0.96)Ω。200、400和800μg/mL的桃金娘均能减少血小板cAMP、cGMP和NO的生成,含量分别为[(22±5.05)、(18.71±5.11)、(15.62±6.19)pmol/mL]、[(6.54±1.86)、(5.34±2.36)、(5.03±1.67)nmol/mL]和[(120.89±26.34)、(104.28±21.27)、(86.61±16.98)μmol/mL]。结论桃金娘能促进血栓形成和血小板聚集,可能机制为下调血小板cAMP、cGMP和NO水平。

柚皮素通过环核苷酸通路拮抗血小板聚集的体外研究

目的:探讨柚皮素拮抗二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集的作用机制。方法:采用ELISA检测柚皮素对ADP诱导的大鼠血小板内环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)水平的影响。采用高效液相法检测柚皮素对血小板磷酸二酯酶(PDE)活性影响。采用Western blot检测柚皮素对ADP刺激的血小板内血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化形式p-VASP(Ser157)、p-VASP(Ser239)的蛋白水平的影响。分别给予蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89、蛋白激酶G(PKG)抑制剂Rp-8-Br-PET-cGMPS和蛋白激酶C(PKC)抑制剂GF109203X预先孵育血小板后,再用柚皮素处理,然后给予ADP刺激,Western blot检测p-VASP(Ser239)蛋白水平。采用血小板聚集仪进一步观察PKA抑制剂、PKG抑制剂预先孵育血小板是否影响柚皮素对ADP诱导血小板聚集的抑制作用。结果:柚皮素剂量依赖性地升高ADP抑制的血小板内cGMP水平,而并不改变cAMP水平。柚皮素还能显著升高血小板PDE活性。Western blot结果显示,柚皮素可明显升高由ADP抑制的p-VASP(Ser239)水平,但不影响p-VASP(Ser157)的蛋白水平,预先孵育PKG或PKC抑制剂并不影响柚皮素对p-VASP(Ser239)蛋白表达的作用,而预先孵育PKA抑制剂后,则能抑制柚皮素对p-VASP(Ser239)蛋白表达的作用。PKA抑制剂能阻断柚皮素对血小板聚集的拮抗作用,而PKG抑制剂并不影响其作用。结论:柚皮素可能通过升高血小板内cGMP水平和激活PKA依赖的信号通路来介导VASP的磷酸化,从而发挥抗血小板聚集的作用。

偏头痛患者血浆内皮素与环核苷酸水平变化研究

目的:观察偏头痛患者发作期与间歇期血浆内皮素与环苷酸水平的变化,探讨其变化在偏头痛发生与发展中的作用。方法:选择80例偏头痛患者,用放免法检测血浆内皮素(ET)、环腺苷酸(cAMP)、环鸟苷酸(cGMP)水平的变化。结果:偏头痛患者发作期ET、cAMP水平显著高于对照组及间歇期水平(P<0.05P<0.01);偏头痛发作期cGMP水平明显低于对照组及偏头痛间歇期水平(P<0.05)。结论:偏头痛发作期ETcAMP与cGMP水平变化可能参与了偏头痛的发作过程。

粒细胞白血病患者环核苷酸代谢的研究

通过对２１例粒细胞白血病患者血浆环一磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）含量、腺苷酸环化酶（ＡＣ）、环腺苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ）比活性和环一磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）含量进行检测，并与１８例非白血病患者和２２例正常人血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量和ＡＣ、ＰＤＥ比活力进行比较，发现急性和慢性粒细胞性白血病组的ｃＡＭＰ水平显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）、ＡＣ比活力也显著低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）、ｃＧＭＰ水平显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），而ＰＤＥ比活力较正常对照组无明显差异（Ｐ＞０．０５）。在非白血病组，上述指标较正常对照组的差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。本文结果提示粒细胞白血病患者ｃＡＭＰ水平降低并伴随着ｃＧＭＰ水平的增高，呈相反现象，而ｃＡＭＰ水平降低的原因系由于腺苷酸环化酶（ＡＣ）比活力下降的结果，并对ＡＣ比活力下降的机理以及造成粒细胞白血病及其前期细胞快速增殖和异常分化的病理生理机制进行了讨论。

磷酸二酯酶同工酶Ⅲ和Ⅳ调节气管平滑肌环腺苷酸的区域化分布

磷酸二酯酶同工酶Ⅳ（ＰＤＥⅣ）抑制剂咯利普兰（Ｒｏｌ，３０μｍｏｌ·Ｌ－１）对３０μｍｏｌ·Ｌ－１异丙肾上腺素所致的犬气管平滑肌环腺苷酸（ｃＡＭＰ）积聚的增强作用比ＰＤＥⅢ抑制剂氰胍哒嗪（ＳＫＦ９４８３６，３０μｍｏｌ·Ｌ－１）要强，但对异丙肾上腺素所致的犬气管平滑肌松弛的增强作用比ＳＫＦ９４８３６要弱．３０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｒｏｌ或ＳＫＦ９４８３６对３０μｍｏｌ·Ｌ－１福斯科林所致的犬气管平滑肌松弛与ｃＡＭＰ积聚的增强作用程度几乎相等．异丙肾上腺素，福斯科林单独或与ＳＫＦ９４８３６，Ｒｏｌ合用都仅引起犬气管平滑肌的可溶部ｃＡＭＰ积聚，对颗粒部ｃＡＭＰ含量无明显影响．上述结果提示犬气管平滑肌存在着ｃＡＭＰ的区域化分布，它受ＰＤＥⅢ，ＰＤＥⅣ的调节。

实验性动脉粥样硬化进程中血小板内游离钙[Ca^(2+)]i和cAMP水平相关性分析

食饲2％胆固醇饲料的60只家兔与仅食饲基础饲料的20只家免对比研究发现:随着动脉粥样硬化(AS)的病理进展,血小板内〔Ca^(2+)〕i逐渐增高,峰值在AS晚期cAMP水平最低,而且,两者呈非常密切负相关(r=-0.667,P<0.001)。

2,3-吲哚醌对大鼠离体胸主动脉舒缩功能的影响

2,3-吲哚醌（2,3-indolinedione,isatin,ISA）为吲哚类衍生物,又名靛红,是近年发现存在于人和动物体内的一种内源性活性物质,且广泛存在于海洋生物如龙虾和十字花科植物中[1-2]。基础及临床研究表明,ISA 在人体不同器官和体液中均有分布[3-5]。研究表明,ISA使动物产生类似焦虑的行为,并且在焦虑和紧张的状态下,心脏、脑、血浆中其水平会升高[6-8]。然而,目前ISA对胸主动脉舒缩功能的调控作用及机制尚不十分清楚。因此,本研究利用离体血管环实验模型,探讨ISA对大鼠离体胸主动脉舒收缩功能的影响及机制,为心血管疾病的防治提供新的理论依据。

国产米利酮治疗严重心力衰竭患者的血流动力学变化及临床观察

应用国产米利酮对15例严重心力衰竭患者治疗的急性血流动力学效应及临床观察表明,用药后心指数增加62.1％,肺毛细血管嵌压及体、肺循环阻力分别下降48.9％、43.0％、49.5％(P均<0.01)。心率及反映心肌氧耗量的参数无明显变化。临床总有效率为86.7％,无血小板减少及致心律失常作用,运动耐受时间延长。用药后血浆cAMP明显增加。结果表明国产米利酮是治疗严重心衰的理想药物。

代谢紊乱参与心房颤动机制的研究进展

目前心房颤动(房颤)具体病理生理机制尚不清楚,缺乏诊断房颤及预测其预后的循环标志物。最近,由于代谢组学研究方法的应用,越来越多证据表明房颤是一种高代谢状态,意味着代谢改变在房颤的病理生理学中可能具有重要作用。房颤的特点是心房肌不规则高频兴奋和收缩,它能影响心房能量需求、循环及供氧,从而改变代谢供需平衡,导致代谢应激。因此,探究房颤患者的代谢改变可以进一步了解房颤发生机制并为临床治疗方案提供更多的参考。

Ⅱ．大鼠1－烯丙基氯－3亚急性中毒神经组织cAMP、cGMP及CaM含量变化

为探讨１－烯丙基氯－３的神经毒作用机理，用Ｗｉｓｔａｒ大鼠形成动物疾病模型，用放免法（ＲＩＡ）及酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）分别测定了大鼠１－烯丙基氯－３亚急性中毒后神经组织中ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ和游离钙调素（ＣａＭ）的含量。结果表明，实验组大鼠纹状体、小脑和坐骨腓神经中ｃＡＭＰ含量增加，ｃＧＭＰ和游离ＣａＭ则低于对照组。这一指标的变化程度与染毒剂量及组织有关。

消癥抑癌方对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨消癥抑癌方对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和迁移的影响及潜在作用机制。方法 利用网络药理学分析消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分和核心靶点,并通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析筛选其相关生物学过程和通路。制备消癥抑癌方含药血清,用含药血清处理卵巢癌SKOV3细胞。采用CCK-8法和EdU染色法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell迁移实验检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞迁移的影响;采用Western blotting法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞自噬蛋白(P62)、自噬相关蛋白3(ATG3)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的影响。结果 网络药理学研究显示,消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分是槲皮素、山柰酚、木犀草素、汉黄芩素、柚皮素等,核心靶点是MAPK3、AKT1、SRC、MAPK1、TP53等。KEGG富集分析共得到171条通路(P<0.01),其中Degree值排名较靠前且与卵巢癌相关的通路主要涉及癌症通路、PI3K-AKT通路、MAPK通路、AMPK通路、自噬、mTOR通路等。体外实验结果表明,与对照组相比,10%和20%含药血清组SKOV3细胞存活率和EdU阳性细胞率均降低(P<0.001),细胞迁移率下降(P<0.001),迁移细胞数也减少(P<0.01或P<0.001)。Western blotting结果表明,10%和20%含药血清干预后,P62、ATG3、LC3B-Ⅱ蛋白表达水平均上调(P<0.05或P<0.01或P<0.001),p-AMPK/AMPK的表达水平上调(P<0.001),p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论 消癥抑癌方抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与调控AMPK/AKT/mTOR通路,进而阻断自噬流有关。

七氟烷对大鼠脑内腺苷酸环化酶及磷酸二酯酶活性的影响

目的观察七氟烷麻醉后对大鼠不同脑区、不同时期腺苷酸环化酶及磷酸二酯酶活性的影响,探讨3’,5’-环腺苷酸(cAMP)在七氟烷麻醉中的作用。方法SD大鼠40只,分层随机区组设计分成5组,每组8只,吸入1.5%的七氟烷,分别在未吸入七氟烷时(对照组)、翻正反射即将消失时(诱导期组)、翻正反射消失后2min(麻醉期组)、翻正反射恢复即刻(恢复期组)和翻正反射恢复后1h(清醒期组)断头取脑。放射免疫法测定大脑皮质、海马和脑干的腺苷酸环化酶(AC)活性及磷酸二酯酶(PDE)活性。结果(1)在对AC活性影响上,与对照组比较,诱导期组、麻醉期组的皮质、海马、脑干及恢复期组皮质、海马AC活性升高;与麻醉期组比较,清醒期组皮质、海马、脑干AC活性降低。上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)在对PDE活性的影响上,与对照组比较,诱导期组、麻醉期组皮质、海马、脑干PDE活性下降;与麻醉期组比较,恢复期组、清醒期组皮质、海马、脑干PDE活性升高。上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论cAMP在七氟烷的全麻机制中可能发挥重要作用。

胰升血糖素通过环磷鸟嘌呤核苷信号通路调节MIN6细胞胰岛素分泌的作用机制研究

目的探讨不同浓度的胰升血糖素(Glg)和葡萄糖(Glu)对胰岛β细胞株MIN6中胰岛素(Ins)分泌功能及细胞内环磷鸟嘌呤核苷(cGMP)信号通路的影响。方法用不同浓度Glu(0、2.8、16.7 mmol/L)及Glg(0、100、500、1000 ng/L)处理MIN6细胞。ELISA测定细胞内cGMP含量,同时测定细胞上清液中Ins的含量。结果单纯Glg处理组中,1000 ng/L组cGMP含量较500 ng/L组、100 ng/L组低(P<0.05)。2.8 mmol/L Glu加不同浓度Glg处理组中,1000 ng/L Glg组cGMP含量较100 ng/L Glg组及0 ng/L Glg组低;500 ng/L Glg组较0 ng/L Glg组低(P<0.05)。16.7 mmol/L Glu加不同浓度Glg处理组中,1000 ng/L Glg组cGMP含量较其他组低;500 ng/L Glg组较100 ng/L Glg组及0 ng/L Glg组低(P<0.05)。单纯Glg处理组中,随Glg浓度升高,Ins分泌量升高(P<0.05)。2.8 mmol/L Glu加不同浓度Glg处理组中,1000 ng/L Glg组Ins较100 ng/L Glg组及0 ng/L Glg组高;500 ng/L Glg组Ins较0 ng/L Glg组高(P<0.05)。16.7 mmol/L Glu加不同浓度Glg处理组中,随Glg浓度升高,Ins分泌量升高(P<0.05)。结论 Glg可能通过浓度梯度的方式下调MIN6细胞内cGMP的产生从而促进MIN6细胞Ins分泌,且这种作用有Glu依赖性。

γ-氨基丁酸抑制胆管癌细胞生长的机制

目的探讨γ-氨基丁酸（GABA）通过环磷酸腺苷／蛋白激酶A（cAMP／PKA）通路抑制胆管癌细胞株QBC939生长的分子机制。方法分别以GABA、GABA＋环磷酸腺苷（cAMP）激动剂（8Br）、GABA＋蛋白激酶A（PKA）拮抗剂（H89）孵育胆管癌细胞株QBC93948h，采用噻唑蓝（UYr）法及膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素／碘化丙锭（AnnexinV—FITC／PI）流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测cAMP、PKA表达，Westernblot法检测蛋白激酶AI（PKAI）、蛋白激酶AⅡ（PKAⅡ）及细胞外调节蛋白激酶（ERK）表达。构建人胆管癌裸鼠皮下种植瘤模型，随机分为对照组和GABA治疗组，用药5周后观察肿瘤体积，Westernblot法检测种植瘤PKAI、PKAⅡ及ERK的表达。结果MTr及流式细胞术检测结果显示8Br协同GABA所导致的增殖抑制和凋亡效应，而H89拮抗此效应；EHSA检测结果显示GABA明显上调cAMP及PKA的含量，8Br协同GABA增加cAMP含量，H89拮抗GABA所导致PKA的含量；Westernblot检测结果显示，GABA较对照组能明显下调PKAI（0．0878±0．0030比0．1521±0．0030，t=29．687，P〈0．05），上调PKAⅡ（0．2042±0．0120比0．1461±0．0720，t=8．152，P〈0．05）蛋白的表达，且下调ERK蛋白的表达（0．3683±0．0070比0．4687±0．0100，t=13．647，P〈0．05）；与对照组比较，治疗组的种植瘤体积明显缩小[（0．500±0．020）cm^3比（0．320±0．030）cm^3，t=15．354，P〈0．05]，PAKI、ERK蛋白表达下降，PKAⅡ表达上升。结论GABA抑制胆管癌细胞株Qac939生长可能由cAMP／PKA信号通路介导，通过下调PKAI及上调PKAⅡ的表达发挥调控作用，而下调ERK蛋白的表达可能发挥抗肿瘤作用。