cAMP抑制核盘菌菌核形成的差异基因表达分析

【目的】探究核盘菌响应环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)处理的转录组学特征,挖掘调控核盘菌菌核形成的关键基因,为靶向杀菌剂的研发提供参考。【方法】以接种在PDA培养基上生长至菌核原基形成时期的核盘菌作为CK1,开始形成黑色素时期的核盘菌作为CK2,以接种在PDA+5 mmol/L cAMP培养基上生长相同时间(5,7 d)的核盘菌作为试验组,依次命名为M1和M2,对这4组样品进行转录组测序(RNA-seq)比较,阐释cAMP影响菌核形成的调控途径,挖掘菌核原基及菌核黑色素形成中的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。【结果】外源添加的cAMP主要在M1前期影响胞内的cAMP含量。差异表达基因分析结果显示,M1和CK1之间共有681个差异表达基因;KEGG富集分析显示,这些基因主要参与各类氨基酸代谢、脂肪酸代谢、MAPK信号通路等,且通路中的大部分基因都呈上调表达模式,而MAPK及其下游作用因子钙调磷酸酶B亚基(calcineurin B subunit,CnB)和热休克蛋白70(heat shock 70 ku protein,HSP70)则明显下调。M2和CK2之间共筛选到4490个差异表达基因,主要参与各类氨基酸代谢、抗原加工提呈以及cAMP、MAPK等信号通路和自噬途径,通路中的大部分基因呈上调表达模式,且自噬相关因子ATG2、ATG20、ATG22、ATG23、ATG27和ATG29也大量上调表达,而与蛋白质和脂类合成相关的磷酸酶B(phosphatase B,PTPB)和酰基辅酶A氧化酶(acyl coenzyme A oxidase,ACO)的表达量则明显下调。在M1和M2时期,相关基因的qRT-PCR与RNA-seq差异表达分析结果趋势相同,说明转录组测序数据准确。【结论】核盘菌可通过吸收胞外高浓度的cAMP抑制菌核形成菌丝,其抑制作用主要通过影响相关蛋白质及脂类物质的合成而对菌丝形态及信号传递造成障碍。

丁香酚通过激活cAMP抑制3T3⁃L1前脂肪细胞分化

为研究丁香酚对3T3⁃L1前脂肪细胞成脂分化过程的影响及其分子机制,以未分化的3T3⁃L1前脂肪细胞为对照组,3⁃异丁基⁃1⁃甲基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素和罗格列酮诱导分化的成熟脂肪细胞为模型组,探究3T3⁃L1细胞分化过程中的丁香酚处理对脂质积累的影响;使用腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536处理细胞,探究环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)在丁香酚抑制脂质积累中发挥的关键作用。结果表明,与模型组相比,50µmol/L丁香酚处理显著降低脂质含量(P<0.0001),显著升高胞内cAMP水平(P<0.01)。当培养基中存在SQ22536时,丁香酚对3T3⁃L1细胞成脂分化过程中脂质积累的抑制作用由24.7%被削弱至6.7%,而丁香酚对细胞内cAMP水平的促进效果被完全消除。实时荧光定量聚合酶链式反应分析结果表明,丁香酚显著下调3T3⁃L1细胞成脂分化过程中脂质生成基因CEBPα(P<0.05)和aP2(P<0.01)的表达,显著上调产热相关基因UCP1的表达(P<0.01);SQ22536处理削弱或完全消除丁香酚对3T3⁃L1细胞脂质积累的抑制作用。因此,丁香酚可有效抑制3T3⁃L1细胞脂质积累,其作用机制与cAMP的激活有关。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨柴胡皂苷对多发性抽动症小鼠的治疗作用

目的基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路探讨柴胡皂苷(SS)对多发性抽动症(TS)模型小鼠的治疗作用。方法将小鼠随机分为对照组、TS组、SS低剂量(SS-L)组、SS高剂量(SS-H)组、阳性药物组、SS-H+PKA抑制剂(H-89)组,每组10只。除对照组外,其他各组经腹腔注射亚氨基二丙腈溶液建立TS小鼠模型。造模后,SS-L组、SS-H组分别给予25、100 mg/kg SS腹腔注射,并以生理盐水灌胃;阳性药物组以0.5 mg/kg氟哌啶醇灌胃,并以生理盐水腹腔注射;SS-H+H-89组以100 mg/kg SS、5 mg/kg H-89腹腔注射,并以生理盐水灌胃;TS组及对照组分别以等体积的生理盐水腹腔注射、灌胃。每天1次,连续干预3周。对小鼠运动行为、刻板行为进行评分,用ELISA法检测纹状体组织中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)以及多巴胺(DA),用苏木精-伊红法观察脑组织形态学变化,用免疫组化法检测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元,用Western blotting法检测cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,TS组脑细胞形态被破坏,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量高(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达低(P均<0.05);与TS组比较,SS-L组、SS-H组、阳性对照组脑细胞形态得到改善,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量低(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达高(P均<0.05);S-H+H-89组逆转SS-H组各指标的变化(P均<0.05)。结论SS可能通过调节cAMP/PKA/CREB信号通路对TS小鼠发挥治疗作用。

针刺足三里对CFA大鼠尾壳核中A1R/cAMP/p-CREB信号通路的影响

目的:观察针刺对完全弗氏佐剂(CFA)大鼠尾壳核(CPu)中的腺苷A1受体(A1R)/环磷酸腺苷(cAMP)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响,探讨针刺治疗炎性痛的潜在机制。方法:将64只6~8周龄雄性Wistar大鼠运用随机数字法随机分为盐水组、模型组(CFA组)、CFA+手针针刺(MA)组、CFA+溶剂二甲基亚砜(DMSO)组、CFA+A1R激动剂2-氯-N6-环戊基腺苷(CCPA)组、CFA+A1R拮抗剂8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤(DPCPX)组、CFA+MA+DMSO组和CFA+MA+DPCPX组,每组8只。采用右侧足底皮内注射CFA制作关节炎炎性痛模型。针刺组于造模后第2天针刺大鼠双侧足三里穴,每次30 min,每天1次,共7 d。采用足底热辐射痛阈值评判大鼠疼痛反应;ELISA检测CPu脑区cAMP含量变化;Western blot检测CPu脑区PKA和CREB蛋白表达及磷酸化水平的变化;免疫荧光染色检测CPu脑区A1R表达情况。结果:与盐水组比较,CFA造模显著降低大鼠热痛阈值(P<0.01);与CFA组比较,CFA+MA组和CFA+CCPA组大鼠的热痛阈值均显著升高(P<0.05或P<0.01);与CFA+MA+DMSO组比较,CFA+MA+DPCPX组大鼠的热痛阈值显著降低(P<0.05)。与盐水组和CFA组比较,CFA+MA组大鼠CPu脑区中的A1R蛋白相对表达量和阳性细胞数均显著增加(P<0.05或P<0.01)。与盐水组相比,CFA+MA组大鼠CPu脑区中的cAMP含量显著减少,p-CREB蛋白水平显著降低(P<0.05);与CFA+DMSO组相比,CFA+MA+DMSO组和CFA+CCPA组的cAMP含量显著减少,p-CREB蛋白水平显著下降(P<0.01);与CFA+MA+DMSO组相比,CFA+MA+DPCPX组cAMP含量显著增加(P<0.01),p-PKA和p-CREB蛋白水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:针刺双侧足三里可以缓解CFA大鼠的炎性疼痛,其机制可能与A1R/cAMP/p-CREB信号通路有关。

cAMP/CREB信号通路与七氟醚麻醉致大鼠认知功能损伤及神经细胞凋亡的关系探究

目的 探究环腺苷酸/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/CREB)信号通路与七氟醚麻醉致大鼠认知功能损伤及神经细胞凋亡的关系。方法 将30只SD大鼠随机分为对照组、七氟醚组及cAMP/CREB信号通路激动剂8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)+七氟醚组,8-Br-cAMP+七氟醚组侧脑室注射8-Br-cAMP 10μL,注射10 min后,七氟醚组、8-Br-cAMP+七氟醚组大鼠吸入3%七氟醚6h,麻醉24 h后,比较各组大鼠行为学表现、海马组织神经元数量与凋亡情况、海马组织中氧化应激指标及cAMP/CREB信号通路蛋白表达水平。结果 与对照组比较,七氟醚组和8-Br-cAMP+七氟醚组大鼠逃避潜伏期、海马组织CA1区凋亡神经细胞数明显增加,穿越平台次数、海马组织CA1区尼氏小体数、SOD、GSH活性、cAMP、PKA、CREB及BDNF表达水平明显减少或降低(P<0.05);与七氟醚组比较,8-Br-cAMP+七氟醚组大鼠逃避潜伏期、海马组织CA1区凋亡神经细胞数明显减少,穿越平台次数、海马组织CA1区尼氏小体数、SOD、GSH活性、cAMP、PKA、CREB及BDNF表达水平明显增加或升高(P<0.05)。但三组大鼠自发活动总路程和悬吊时间的比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 cAMP/CREB信号通路可能参与七氟醚麻醉致大鼠认知功能损伤激神经细胞凋亡过程。

袖状胃切除术通过GLP-1激活cAMP/PKA通路拮抗血管外周脂肪组织炎症

目的基于GLP-1激活环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路探讨袖状胃切除术拮抗血管外周脂肪组织炎症。方法选取SPF级六周龄雄性大鼠48只作为本次研究的对象,无差别分为空白组、袖状胃切除术组以及GLP-1受体激动剂组、GLP-1受体拮抗剂组Exendin(9-39),对四组小鼠血管外周脂肪组织的cAMP/PKA水平以及炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α水平进行测定。结果(1)cAMP/PKA水平比较:GLP-1受体激动剂进一步升高袖状胃切除术小鼠血管外周脂肪组织cAMP/PKA水平,其拮抗剂显著降低血管外周脂肪组织cAMP/PKA水平,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α水平:GLP-1受体激动剂显著降低血管袖状胃切除术小鼠外周脂肪组织炎症,其拮抗剂显著提高血管外周脂肪组织炎症水平,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论GLP-1受体激动剂与拮抗剂对袖状胃切除术大鼠血管外周脂肪组织炎症以及cAMP/PKA水平均具有较强的相关性,表明GLP-1可能通过激活cAMP/PKA通路参与袖状胃切除术拮抗血管外周脂肪组织炎症。

外源cAMP对酸枣种子萌发及实生苗生长发育的影响

cAMP(环磷酸腺苷)是一种广泛存在于生物体内的小分子高生物活性物质和第二次信使,已有研究表明,外源c AMP对草本植物的种子萌发和生长发育具有重要影响,但木本植物中外源c AMP的应用效果鲜有报道。以酸枣仁和当年生酸枣实生苗为试材,用不同浓度c AMP对酸枣仁进行浸种处理并对当年生酸枣实生苗进行根施、喷施c AMP处理,研究不同浓度外源c AMP对酸枣种子萌发和生长发育的影响。结果表明:25μmol/L c AMP浸种18 h,可极显著提高酸枣种子的萌发率(达90.69%);根施25μmol/L c AMP能够显著促进酸枣实生苗地上部生长;喷施50μmol/L c AMP对酸枣实生苗根系的生长有显著促进作用;喷施50μmol/L c AMP可极显著提高当年生酸枣实生苗开花率;根施25、50μmol/L c AMP均可显著提高当年生酸枣实生苗的结果率。该研究可为c AMP在果树上生产的应用及揭示其调控木本植物生长发育的分子机制提供借鉴和参考。

HPLC法同时测定红枣中cAMP和cGMP含量

建立了以有机相(甲醇)-水相(0.5%甲酸水)为流动相同时测定枣果中cAMP和cGMP含量的HPLC方法,该方法的分析条件为:Spuirsil C_(18)型色谱柱(250×4.6 mm,i.d.),流动相5%甲醇∶0.5%甲酸水=5∶95(V/V),流速0.7 mL/min,柱温30℃,检测波长256 nm。该方法具有流动相配制简单、分析时间短、色谱峰分离度好、准确度高等特点。通过10个红枣品种的分析,发现同一品种的cAMP含量高于cGMP,不同品种的cAMP和cGMP含量差异显著(p<0.05),其中骏优、骏枣和灰枣的cAMP和cGMP含量较高,这3个品种均为干制加工品种,说明cAMP和cGMP可作为新疆干制红枣品质评价的重要指标。

丙泊酚调控cAMP/PKA-CREB-BDNF通路对大鼠神经元凋亡、坐骨神经阻滞效果的影响

目的分析丙泊酚调控脊髓环磷酸腺苷/蛋白激酶A-磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白-脑源性神经营养因子(cAMP/PKA-CREB-BDNF)通路对大鼠神经元凋亡、坐骨神经阻滞效果的影响。方法选取40只SPF级Wistar雄性大鼠,其中对照组、假手术组、低剂量组、高剂量组各10只,空白组不做任何处理,假手术组进行手术处理和0.9%氯化钠溶液注射,低剂量组在假手术的基础上注射丙泊酚10 mg/kg;高剂量组注射丙泊酚30 mg/kg。结果与空白组相比,假手术组、低剂量组、高剂量组SOD活性降低(P<0.05);MDA含量、海马神经元凋亡率、各时间点MPE、MPE均升高以及cAMP、PKA、CREB、BDNF表达均降低(P<0.05)。与假手术组相比,低剂量组、高剂量组MDA含量降低(P<0.05);SOD活性、海马神经元凋亡率、各时间点MPE以及10、20、30、60、90、120 min时间点MPE均升高、150、180 min时间点MPE均降低(P<0.05);cAMP、PKA、CREB、BDNF表达均降低(P<0.05)。与低剂量组相比,高剂量组MDA含量降低(P<0.05);SOD活性、海马神经元凋亡率、各时间点MPE以及150、180min时间点EPT均升高;10、20、30、60、90、120 min时间点EPT均降低,(P<0.05);cAMP、PKA、CREB、BDNF表达均降低(P<0.05)。结论丙泊酚能够增强坐骨神经阻滞效果,降低神经元凋亡率,起保护作用可能与丙泊酚调控cAMP/PKA-CREB-BDNF通路有关。

补阳还五汤对糖尿病周围神经病变大鼠的止痛作用及机制研究

【目的】探讨补阳还五汤对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠的止痛作用及机制。【方法】将60只大鼠分为正常组,模型组(MNCV)和感觉神经传导速度(SNCV),中药低、中、高剂量组,中药高剂量+H-89[蛋白激酶A(PKA)抑制剂]组,每组10只。除正常组,其他各组大鼠采用高脂高糖饲料饲喂结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法构建DPN模型。给药结束后,检测大鼠足热痛阈值,测定大鼠运动神经传导速度(MNCV)和感觉神经传导速度(SNCV),免疫组织化学法观察表皮内神经纤维密度(IENF),酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α),血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素1(Ang-1)、CD34水平,坐骨神经组织中环磷酸腺苷(cAMP)浓度,Western Blot法检测坐骨神经组织中PKA和反应元件结合蛋白(CREB)表达水平。【结果】与正常组比较,模型组足热痛阈值,TC、TG、LDL-C、HOMA-IR,IL-1β、IL-6和TNF-α水平均显著增加(P<0.05),HDL-C、FINS,VEGF、Ang-1、CD34,IENF,MNCV和SNCV值,cAMP浓度水平,PKA和CREB磷酸化水平均显著降低(P<0.05);与模型组比较,中药低、中、高剂量组上述指标均得到显著改善(P<0.05),且呈剂量依赖性;与中药高剂量+H-89组比较,中药高剂量组各指标水平均被逆转。【结论】补阳还五汤可改善DPN大鼠胰岛素抵抗、血脂代谢,减轻肢体疼痛,改善局部微循环障碍,保护神经功能,体现了“活血通络止痛”的治疗特点;补阳还五汤的止痛作用可能与改善局部微循环障碍、抑制炎症因子释放及调节cAMP/PKA/CREB信号通路蛋白表达有关。

红景天苷改善顺铂引起的小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元损伤的机制

目的探究红景天苷(SAL)改善顺铂(CIS)引起的耳蜗毛细胞(CHC)和螺旋神经节神经元(SGN)损伤的作用及其与环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP效应元件结合蛋白(CREB)通路的关系。方法分离新生C57BL/6小鼠的耳蜗基底膜,分为对照组(C组)、CIS组、SAL组、SAL+SQ22536(cAMP抑制剂)组和SAL+H-89(PKA抑制剂)组,每组20条。C组仅加入无血清BME培养液;CIS组在培养液中加入15μmol/L CIS;SAL组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL;SAL+SQ22536组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和5μmol/L SQ22536;SAL+H-89组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和30μmol/L H-89。各组在培养箱中孵育48 h后,免疫荧光染色观察各组CHC和SGN损伤;试剂盒检测各组耳蜗基底膜中ROS和cAMP含量;Western blot检测各组PKA、p-CREB、CREB、Bcl-2、BDNF、NF-M蛋白水平。结果CIS组CHC排列混乱、体积肿大,SGN细胞核破碎、神经突缺失,SAL可减轻CHC和SGNs损伤。与C组相比,CIS组CHC、SGN数量较少(P<0.05),ROS、cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05);与CIS组相比,SAL组CHC、SGN数量较多(P<0.05),ROS含量较低(P<0.05),cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05)。SQ22536和H-89均可逆转SAL对CHC和SGN的保护作用。结论SAL可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路,促进抗凋亡蛋白和神经保护因子表达,缓解CIS引起的CHC和SGN损伤。

基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能改善机制

目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能的改善机制。方法:采用改良线栓法缺血2 h,再灌注24 h建立大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组和丙泊酚低(1 mg/ml)、中(2.5 mg/ml)、高剂量(5 mg/ml)组,各12只,另设含有12只大鼠的假手术组。分组后即开始给药,1次/d,共4周,末次给药12 h后,采用改良神经功能评分(mNSS)法进行神经缺损评分;采用TTC染色法检测脑梗死面积;HE、Nissl染色进行神经元细胞及尼氏小体形态学观察;Tunel法进行神经元细胞凋亡检测;Elisa法检测脑组织cAMP、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)含量;免疫荧光法检测脑组织环磷酸腺苷(cAMP)、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数;Western blot法检测脑组织PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量。结果:模型组大鼠比较假手术组大鼠的mNSS评分、脑梗死面积百分比显著增加(均P<0.05),HE染色和Nissl染色可见明显的神经元细胞损伤和尼氏小体破坏,脑组织cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著下降,模型组大鼠比较假手术组大鼠的cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数和蛋白共表达阳性细胞数也明显下降(均P<0.05)。与模型组比较,丙泊酚给药组大鼠mNSS评分、脑梗死面积百分比显著降低(均P<0.05),HE染色和Nissl染色可见神经元细胞损伤和尼氏小体破坏有不同程度改善,脑组织cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著升高(均P<0.05),cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数均显著升高(均P<0.05)。结论:丙泊酚可能通过cAMP/PKA/CREB通路改善CIRI大鼠神经功能。

环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷在植物生长发育中的作用

环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)是植物体内发挥重要作用的2种活性物质,作为第二信使或关键信号分子参与并调节了植物各种生理生化反应,具有很大的利用价值和应用前景。本文系统地对环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷在种子萌发、植物生长发育、应答生物和非生物胁迫等方面的作用进行了综述,旨在为其进一步深入研究与开发利用提供参考。

银翘散在不同煎煮时间下对致热大鼠体温及下丘脑cAMP含量的影响

目的:观察银翘散在不同煎煮时间下对致热大鼠体温及下丘脑cAMP含量的影响,探讨银翘散的最佳煎煮时间及其部分解热机理。方法:取合格大鼠96只,随机分为12组:空白对照组、模型对照组、阿司匹林对照组、银翘散煮沸后3min高、中、低浓度组,银翘散煮沸后6min高、中、低浓度组,银翘散煮沸后12min高、中、低浓度组,每组各8只。除空白对照组外,各鼠于背部皮下注射20%的酵母混悬液10mL/kg,随后每小时测体温1次,连续7h。3.5h后给药,7h后立即断头取出下丘脑组织,测定cAMP的含量。结果:给药后30min银翘散各组未显示出降温作用(P>0.05);1.5h,煮沸后3min高浓度组、中浓度组,银翘散煮沸后6min高浓度组、中浓度组,均显示出降温作用(P<0.01);2.5h和3.5h,银翘散各组均显示出降温作用(P<0.05),且以煮沸后3min高浓度组、6min高浓度组为优。除银翘散煮沸后3min低浓度组,6min低浓度组,12min高中低浓度组大鼠下丘脑组织中cAMP的含量未明显降低(P>0.05),其余各组均降低且有显著性差异(P<0.05);其中以银翘散煮沸后3min高浓度组和6min高浓度组效果为优。结论:银翘散具有明显的解热效应,其效果以煮沸后3、6min为优;且可降低发热大鼠下丘脑组织中cAMP的含量,其效果以煮沸后3、6min为优。

LH/hCG受体与cAMP在玉米赤霉烯酮抑制小鼠Leydig细胞分泌睾酮中作用的研究

为揭示LH/hCG受体和cAMP在玉米赤霉烯酮(ZEN)抑制小鼠睾丸间质细胞(leydig cells)分泌睾酮中的作用,本研究以原代培养的小鼠Leydig细胞为材料,用ELISA法分别测定ZEN暴露浓度为0、1、5、10、20μg·mL-1及暴露时间为1、6、12、24h时睾酮的分泌量(hCG环境及cAMP环境)和胞质内cAMP水平(hCG环境),用化学发光标记免疫分析法(CLIA)测定其细胞表面的LH/hCG受体结合力,用Western Blot法测定LH/hCG受体蛋白的表达量。结果表明,hCG环境中高浓度及长时间ZEN暴露对睾酮分泌的抑制效应极显著(P<0.01),而cAMP环境中,不同浓度及时间的ZEN暴露均可显著抑制Leydig细胞分泌睾酮(P<0.05),且浓度及时间—效应关系明显。不同浓度及时间的ZEN暴露对Leydig细胞LH/hCG受体的结合力及表达量的影响不显著(P>0.05),而低浓度及长时间ZEN暴露使胞质内cAMP水平显著升高(P<0.05)。结果显示,玉米赤霉烯酮可通过cAMP途径抑制小鼠Leydig细胞分泌睾酮,与LH/hCG受体途径无关。

羊乳中环腺苷酸(cAMP)和环鸟苷酸(cGMP)变化规律的研究

采用酶联免疫法检测羊乳中环腺苷酸(cAMP)和环鸟苷酸(cGMP)质量浓度及变化规律。结果表明,羊初乳中cAMP和cGMP质量浓度变化较大,cAMP质量浓度在产羔后第4 d时较高,而cGMP在产羔第1 d时质量浓度较高;常乳中cAMP和cGMP质量浓度显著高于初乳和末乳(p<0.05);日泌乳量越大,羊乳中cAMP和cGMP质量浓度越高;每天挤奶2次的羊乳中cAMP和cGMP质量浓度显著高于每天挤奶1次的羊乳(p<0.05);奶山羊在产羔2~5胎时羊乳中cAMP和cGMP质量浓度显著高于产羔第1、6、7胎的质量浓度(p<0.05)。

舍曲林对肠易激综合征大鼠cAMP/PKA通路及肠道炎症反应的影响

目的:探讨舍曲林对肠易激综合征(IBS)大鼠环磷酸腺苷(cAMP)/环磷酸腺苷依赖性蛋白激酶A(PKA)通路及肠道炎症反应的影响。方法:采用母婴分离加醋酸灌肠联合结直肠扩张刺激法制备IBS大鼠模型,并将造模成功大鼠随机分为模型组、舍曲林低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(30 mg/kg)剂量组和阳性对照组(匹维溴铵,2 mg/kg),每组15只,另取15只正常大鼠作为对照组,大鼠发育至9周龄时开始灌胃给药,对照组和模型组给予等体积生理盐水,其他各组给予相应药物,2次/d,连续10 d,10 ml/kg。末次给药结束后,观察记录各组大鼠一般情况、粪便含水量和排便时间;腹部撤回反射(AWF)评分法检测大鼠内脏敏感性;HE染色观察各组大鼠结肠组织病理学变化;ELISA检测各组大鼠结肠组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和cAMP含量;Western blot检测各组大鼠结肠组织cAMP和PKA蛋白表达及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平。结果:对照组大鼠精神状态良好,发育正常,皮毛光亮,结肠组织肠黏膜屏障结构完整,无炎症因子浸润。与对照组相比,模型组大鼠状态较差,情绪烦躁易怒,活动较少,结肠组织出现明显水肿,肠黏膜完整性受损,出现大量炎症细胞浸润,排便时间、cAMP含量、cAMP、PKA蛋白表达及CREB磷酸化水平显著降低(P<0.05),粪便含水量、内脏敏感性、TNF-α、IL-1β和IL-6含量显著升高(P<0.05);与模型组相比,舍曲林低、中、高剂量组大鼠不良症状逐渐缓解,排便时间、cAMP含量、cAMP、PKA蛋白表达及CREB磷酸化水平依次升高(P<0.05),粪便含水量、内脏敏感性、TNF-α、IL-1β和IL-6含量依次降低(P<0.05);舍曲林高剂量组与阳性对照组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:舍曲林可剂量依赖性改善IBS大鼠肠道炎症反应,可能与上调cAMP/PKA通路有关。

吗啡依赖和戒断大鼠中枢cAMP和cGMP含量的变化

目的 研究吗啡依赖和催促戒断大鼠中枢cAMP和cGMP含量变化。方法 以剂量递增法连续皮下注射吗啡建立吗啡依赖模型 ,采用放射免疫学方法检测脑内cAMP和cGMP含量。结果 与生理盐水对照组大鼠比较 ,吗啡依赖大鼠的纹状体、间脑、中脑、脑桥和海马内cGMP含量均显著降低 ,cAMP含量和cAMP/cGMP比值显著升高 ,而小脑则无类似变化 ;与吗啡依赖组大鼠比较 ,纳洛酮催促戒断大鼠 ,其海马和纹状体内的cGMP含量显著下降 ,cAMP含量和cAMP/cGMP比值显著升高 ;其它部位无明显变化。结论 中枢cAMP和cGMP含量变化 ,可能是形成和维持吗啡依赖和戒断的重要分子机制之一。

TRPV1对LPS致热大鼠体温及下丘脑中Ca^(2+)浓度和cAMP含量的影响

目的探讨TRPV1在脂多糖(LPS)致大鼠发热过程中的作用和机制。方法48只♂SD大鼠随机分为4组,正常对照组(N)、capsazepine组(CPZ)、LPS组(LPS)和capsaz-epine+LPS组(CPZ+LPS)。连续观察体温变化;在发热高峰期通过颈椎脱臼迅速处死动物,以Fura-2/AM为荧光指示剂,测定下丘脑细胞内[Ca2+]i;应用放射免疫法检测下丘脑中cAMP含量的变化。结果①各组体温变化最大值(ΔTmax)由高至低顺序为:CPZ+LPS组>LPS组>CPZ组>N组;其中,CPZ+LPS组与LPS组比较,ΔT(300~480 min期间)及体温反应指数TRI8均增高(P<0.01);②在发热高峰期,CPZ+LPS组[Ca2+]i明显低于其它3组(P<0.01);③CPZ+LPS组cAMP含量与其它组比较增多(P<0.01)。结论capsazepine可能通过阻断下丘脑TRPV1通道,改变细胞内钙离子浓度,进而影响LPS性发热过程。

益智宁对注意缺陷多动障碍动物模型SHR大鼠前额叶皮质DRD1-AC-cAMP-PKA-DARPP32信号通路的影响

目的:通过观察中药复方益智宁对注意缺陷多动障碍动物模型SHR大鼠前额叶皮质中腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、多巴胺D1受体(dopamine receptor D1,DRD1)、多巴胺和环磷酸腺苷调节的磷酸化蛋白32(dopamine and cAMP regulated phosphoprotein of 32 kDa,DARPP32)的影响,探讨益智宁治疗ADHD的疗效机制。方法:将30只SHR大鼠随机分为益智宁组、生理盐水对照组、哌甲酯对照组,每组10只,益智宁组给予益智宁煎药液(14.4g·kg^-1),哌甲酯组给予哌甲酯(0.0015 g·kg^-1),生理盐水组给予生理盐水,每组均按12.5 mL/kg等容量灌胃给药。给药4周后,用ELISA法检测各组大鼠前额叶皮质组织中AC、cAMP的浓度,用RT-PCR和Western blot法检测大鼠前额叶皮质组织中PKA、DRD1、DARPP32的表达水平。结果:与生理盐水组比较,哌甲酯组、益智宁组大鼠的前额叶皮质组织中的AC、cAMP含量均有显著升高(P<0.05);与生理盐水组比较,哌甲酯组、益智宁组大鼠的前额叶皮质组织中PKA蛋白表达及mRNA表达显著升高(P<0.01),且益智宁组与哌甲酯组有显著差异(P<0.05);与生理盐水组比较,哌甲酯组、益智宁组大鼠的前额叶皮质组织中DRD1、DARPP32蛋白表达及mRNA表达显著降低(P<0.01),且益智宁组与哌甲酯组有显著差异(P<0.05)。结论:益智宁组可能通过激活SHR大鼠前额叶皮质AC-cAMP-PKA的信号通路,并通过下调DRD1、DARPP32的水平,负反馈调节脑内多巴胺的含量,从而发挥疗效。