橘红素上调Cyclin B1和抑制ERK磷酸化诱导人胃癌AGS细胞周期阻滞

目的探讨橘红素对人胃癌AGS细胞增殖和周期的作用及其机制。方法采用MTT法观察橘红素对人AGS胃癌细胞增殖的作用;流式细胞仪检测橘红素对细胞周期的影响;Western blot检测橘红素对Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1和ERK、p-ERK蛋白表达的影响。结果橘红素可明显抑制AGS胃癌细胞的增殖(P<0.01),呈时间和剂量依赖性。橘红素作用于AGS细胞24 h,S期细胞百分比明显增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);作用48和72 h,S期阻滞消失,G2/M期细胞百分比增高(P<0.05,P<0.01)。作用48 h,橘红素可上调Cyclin B1蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),对Cyclin D1和Cyclin E1蛋白表达无明显影响;对ERK蛋白表达无影响,可降低p-ERK蛋白的表达(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论橘红素可明显抑制人AGS胃癌细胞的增殖,使细胞阻滞于S期和G2/M期,主要机制可能是通过抑制ERK磷酸化和上调CyclinB1蛋白表达。

Cdc25 Ccyclin B1在二烯丙基二硫化物诱导人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞中的作用

目的:研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人胃癌BGC823细胞的增殖及细胞周期的影响以及Cdc25C、cyclin B1的作用。方法:采用MTT法检测BGC823细胞的生长活性;流式细胞术分析DADS对细胞周期分布的影响;Western blot观察DADS对Cdc25C蛋白、cyclin B1蛋白表达的影响。结果:MTT比色实验结果显示,DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用,且呈显著的剂量-效应依赖关系(P<0.05)。流式细胞分析发现,DADS作用12h时,G2/M期细胞增加到30.1%;24h时增加到58.1%;36h达50.2%(P<0.05)。Western blot结果表明,DADS呈时间依赖性抑制人胃癌BGC823细胞周期Cdc25C磷酸酶的表达,cyclinB1表达在DADS处理24h后开始下降(P<0.05)。结论:DADS可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制Cdc25C、cyclinB1表达使部分BGC823细胞停滞在G2/M期。

子宫颈癌中Plk1和Cyclin B1、p21^(WAF1)的表达及其临床意义

目的探讨Plk1(polo-like kinase1)和Cyclin B1、p21WAF1在子宫颈癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法利用组织芯片技术,结合免疫组化Eli Vision法对102例子宫颈癌、20例子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)、20例正常子宫颈组织中Plk1和Cyclin B1、p21WAF1的表达进行检测,并分析相关数据。结果 Plk1在子宫颈癌、CIN中的阳性率分别为70.5%、55.0%,明显高于正常子宫颈组织(10%),差异有统计学意义(P<0.01)。Cyclin B1在子宫颈癌、CIN中的阳性率分别为52.9%,30.0%,明显高于正常子宫颈组织(10.0%),差异有统计学意义(P<0.01)。p21WAF1在子宫颈癌、CIN中的阳性率分别为23.5%、10.0%,明显高于正常子宫颈组织(0),差异有统计学意义(P<0.05)。Plk1、Cyclin B1和p21WAF1在子宫颈癌、CIN中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。Plk1表达与子宫颈癌间质浸润深度相关(P<0.05)。Cyclin B1表达与子宫颈癌间质浸润深度及淋巴结转移相关(P<0.05)。p21WAF1在子宫颈癌中的表达与组织学分级相关(P<0.01)。组织学分级低的子宫颈癌中p21WAF1阳性率高。Plk1和Cyclin B1在子宫颈癌中的表达呈正相关(rs=0.297,P=0.002)。Plk1和p21WAF1在子宫颈癌中的表达呈负相关(rs=-0.403,P<0.001)。结论 Plk1、Cyclin B1和p21WAF1的表达与子宫颈癌的发生、发展相关,且前两者与子宫颈癌预后相关,三者联合检测有可能成为子宫颈癌临床治疗的新靶点。

Cyclin B1蛋白在血管瘤组织中的表达

目的 检测CyclinB1蛋白在皮肤血管瘤组织中的表达 ,探讨CyclinB1在血管瘤发生、发展中的作用及意义。方法 采用免疫组织化学S P法检测增生期血管瘤、退化期血管瘤及正常皮肤组织 (各 2 0例 )中CyclinB1蛋白的表达。结果 在增生期血管瘤、退化期血管瘤和正常皮肤组组织中 ,CyclinB1蛋白免疫组织化学阳性反应颗粒的平均光密度分别为 :0 14 6± 0 0 16 ,0 0 79± 0 0 18,0 0 6 8± 0 0 2 1;阳性面积率分别为 :0 5 38± 0 0 6 5 ,0 2 0 4± 0 0 79,0 176±0 0 5 4。增生期血管瘤与退化期血管瘤、正常皮肤组分别相比 ,CyclinB1蛋白阳性表达的平均光密度和阳性面积率均有极显著性差异 (P <0 0 0 1) ,退化期血管瘤与正常皮肤组之间 ,CyclinB1蛋白阳性表达的差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 Cy clinB1蛋白在血管瘤发生发展和毛细血管内皮细胞的异常过度增生中起着重要的作用。

Cyclin B1、CDK1在肺癌中过表达及其意义

采用免疫组化ABC法检测 12例肺癌组织、11例癌旁组织及 3例正常肺组织中cyclinB1、CDK1蛋白的表达情况 ,以探讨细胞周期蛋白cyclinB1及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1在不同肺癌组织中的异常表达及其临床意义 .结果显示cyclinB1在正常肺组织、癌旁组织、癌组织中阳性率分别为 0 %、9.1%和 5 0 .0 % ,CDK1的阳性率则为0 %、18.2 %和 75 .0 % ,cyclinB1、CDK1在小细胞肺癌和鳞癌中存在广泛的过表达 ,而在大细胞肺癌中没有表达 。

G_0/G_1期异时相Cyclin B1的表达对细胞凋亡的影响

目的研究G0/G1期异时相细胞周期素B1(Cyclin B1)的大量表达对细胞凋亡的影响。方法首先构建了四环素可诱导表达Cyclin B1的单克隆细胞株,其次,筛选出能最大程度阻滞细胞于G0/G1期的胸腺嘧啶核苷(Thymidine)浓度,最后,在阻滞的时间内加入四环素诱导Cyclin B1表达,并用免疫印迹和流式细胞仪检测证实后,用膜联蛋白/碘化丙啶(AnnexinⅤ/PI)双染法和API法检测细胞凋亡。结果终浓度为5mmol/L的胸腺嘧啶核苷能阻滞单克隆细胞株在G0/G1期,并至少维持48h;在细胞同步化期间加四环素诱导后,Cyclin B1表达增加,并且G0/G1期特异性细胞凋亡增加。结论 G0/G1期异时相Cyclin B1的表达能诱导细胞凋亡。

Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌中表达的免疫组织化学研究

目的为探讨CyclinD1和CyclinB1在鼻咽癌中的表达、相关性及临床意义。方法用免疫组化SP法分别检测CyclinD1和CyclinB1在58例鼻咽癌组织标本中的表达。结果CyclinD1和CyclinB1在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为58.6%(34/58)和60.3%(35/58);CyclinD1和CyclinB1阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期存在显著性差异(P<0.05);鼻咽癌组织中CyclinD1和CyclinB1的表达一致率为60.3%(35/58),无显著相关。结论CyclinD1和CyclinB1表达均可以反映鼻咽癌的生存情况,在鼻咽癌预后预测中有重要意义。

反义Cyclin B1提高Lewis肺癌细胞对健择化学敏感性的体内外研究

目的研究CyclinB1反义全长cDNA(AS-CLB1)对小鼠Lewis肺癌细胞(LL/2)化疗敏感性的影响,为将该方法联合健择化疗用于非小细胞肺癌的治疗提供实验依据。方法通过流式细胞术检测LL/2亲本(LP),LL/2空载体(LV)及LL/2/AS-CLB1(LA)细胞的凋亡及细胞周期分布。用健择(20nmol/L～20μmol/L)处理上述三种细胞,分别于1h及24h后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法评估健择对各组细胞的体外杀伤作用。将上述三种细胞分别接种C57BL/6小鼠,成瘤后用健择〔25～125mg/(kg·d)〕处理各组动物,3d1次,一共4次,观察细胞在体内的成瘤性及动物的生存时间,并用流式细胞仪检测各组动物肿瘤组织的细胞凋亡。结果LA细胞较对照(LP和LV细胞)出现了明显的G1期阻滞及凋亡;健择对LA细胞的体外杀伤作用显著增强;在LA细胞组,细胞的成瘤性明显下降,该组动物肿瘤组织的细胞凋亡明显增加,动物的生存时间也显著延长。结论AS-CLB1可以明显增强LL/2细胞体内外对健择的化学敏感性,其作用可能与AS-CLB1诱导细胞发生G1期阻滞及凋亡,从而增强了健择的抗肿瘤作用有关。

乳腺癌中组织14-3-3σ和cyclin B1的表达及其临床意义

目的:探讨14-3-3σ和cyclin B1蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理特征之间的关系。方法:选择2006年11月至2009年11月在辽宁医学院附属第一医院手术治疗的乳腺癌患者95例乳腺癌和30例癌旁组织(距癌边缘5 cm)的标本,患者年龄为31～85岁,中位年龄58岁。免疫组织化学PV法和Western blotting检测14-3-3σ和cyclin B1蛋白在乳腺癌和癌旁组织中的表达,分析两者与乳腺癌临床病理特征之间的关系以及两者的相关性。结果:Western blotting与免疫组化实验结果显示,14-3-3σ蛋白在乳腺癌中表达率为22.1%(21/95),显著低于癌旁组织的93.3%(28/30)(P<0.01);14-3-3σ蛋白的表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。Cyclin B1蛋白在乳腺癌中的表达率为69.5%(66/95),显著高于癌旁组织的40%(12/30)(P<0.05);CyclinB1蛋白的表达与乳腺癌淋巴结转移相关(P<0.05)。乳腺癌组织中14-3-3σ和cyclin B1蛋白的表达呈负相关(r=-0.333,P=0.001)。结论:14-3-3σ和cyclin B1蛋白与乳腺癌的发生、转移相关,两者联合检测可为乳腺癌诊断和治疗提供参考。

妊娠滋养细胞疾病Cyclin B1、PCNA表达的研究

目的 :检测CyclinB1和增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白在妊娠滋养细胞疾病(GTD)中的表达 ,探讨二者的相关性及与GTD的关系。方法 :采用免疫组化S P法检测 1 5例正常绒毛、38例葡萄胎 (HM)、42例侵蚀性葡萄胎 (IM)和 1 8例绒毛膜癌 (CC)组织中Cy clinB1和PCNA蛋白表达情况。结果 :葡萄胎、IM、CC组织中的CyclinB1和PCNA蛋白表达水平显著高于正常绒毛。术前未化疗的IM和CC组织中CyclinB1的表达水平明显高于葡萄胎。CC组织PCNA的表达水平高于葡萄胎 (P =0 .0 0 5)。葡萄胎恶变者CyclinB1和PCNA的表达显著高于未恶变者。术前未化疗的滋养细胞肿瘤患者 (包括IM和CC)Cy clinB1表达显著高于术前化疗≥3疗程者 (P =0 .0 0 2 )。WHO预后评分为高危者及中危者的CyclinB1表达显著高于低危者 (P =0 .0 0 5)。PCNA的表达与滋养细胞肿瘤是否化疗、WHO分期、WHO评分无关。PCNA与CyclinB1的表达呈正相关 (P =0 .0 0 0 )。结论 :GTD中存在CyclinB1的调节紊乱 ,CyclinB1异常表达可能与葡萄胎滋养细胞的增生。

槲皮素对结肠癌细胞SW480增殖、细胞周期和cyclin B1蛋白表达的影响

背景与目的:探讨槲皮素对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、细胞周期及Cyclin B1蛋白表达的影响,并探讨其抗肿瘤机制。材料与方法:以10、20、40、60、80、160μmol/L的槲皮素处理SW480细胞,采用MTT比色法、流式细胞技术、Westernblot方法分析槲皮素对细胞增殖、凋亡、细胞周期及cyclinB1蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,20μmol/L槲皮素可促进SW480细胞增殖(P<0.05),但40、80、160μmol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞的增殖(P<0.01),抑制作用呈剂量和时间依赖性。20、40、60、80μmol/L的槲皮素作用SW480细胞48h,G0/G1期和S期细胞减少,G2/M期细胞显著增多(P<0.01)。80μmol/L的槲皮素作用48h后细胞凋亡率(13.32±4.62)%,较对照组(2.68±1.04)%显著升高(P<0.01);40、60、80μmol/L的槲皮素作用SW480细胞48h后,cyclinB1蛋白表达降低(P<0.05)。结论:槲皮素对结肠癌细胞SW480的增殖有一定的调节作用,低浓度可促进其增殖,而高浓度则可抑制其增殖,其抑制作用机制可能与影响细胞周期分布、诱导细胞调亡、调节cyclin B1蛋白表达有关。

survivin、cyclin b1在人脑胶质瘤的表达及意义

目的 探讨survivin基因在人脑胶质瘤中的表达及其与cyclinb1蛋白表达的相关性。方法 采用免疫组织化学SABC法检测survivin、cyclinb1表达蛋白在 4 1例胶质瘤 10例正常脑组织中的表达。结果 survivin基因表达蛋白在正常脑组织中无表达 ;4 1例胶质瘤中 2 5例呈阳性表达 ,占 6 1.0 %。Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级间的表达有显著性差异 (P <0 .0 5 )。胶质瘤组织survivin蛋白的表达与cyclinb1蛋白表达密切相关 (rs=0 .836 ,P <0 .0 1)。结论 survivin蛋白异常表达在胶质瘤的发生中起重要作用 ,它可能与cyclinb1共同在胶质瘤细胞有丝分裂的Gs2 /M期中起特殊促进作用。

p34^(cdc2)和cyclin B1在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:研究细胞周期蛋白p34cdc2和cyclin B1在宫颈癌组织中的表达水平,并探讨它们的表达与宫颈癌患者临床病理资料之间的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)法和Western印迹法,对62例原发性宫颈癌和15例对照宫颈组织进行检测,定量分析p34cdc2和cyclin B1的mRNA和蛋白质的表达水平。结果:在宫颈癌组织中p34cdc2和cyclin B1的mRNA和蛋白质表达水平明显高于对照宫颈组织(P=0.004,P=0.013和P=0.016,P=0.029),而且主要表现为过表达。p34cdc2和cyclin B1之间存在显著性正相关,mRNA和蛋白质表达的相关系数分别为0.527(P=0.001)和0.432(P=0.022)。p34cdc2和cyclin B1的mRNA表达与宫颈癌淋巴结转移之间存在密切关系(P=0.02,P=0.001),但与患者的年龄、临床分期、病理类型和分化程度无关(P>0.05)。结论:p34cdc2和cyclin B1是宫颈癌中的重要调控分子,可促发癌细胞克服细胞周期G2/M期控节制点进入M期,促进肿瘤的发生与发展。p34cdc2和cyclin B1的高表达可能成为研究宫颈癌发生机制和淋巴转移的新的分子标志。

模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的探讨模拟调强放射治疗（IMRT）对人鼻咽低分化鳞癌细胞株（CNE-2）细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响。方法CNE-2分为急速照射（ART）组和模拟IMRT组，两组分别给予6MVX线2、4、6和8Gy四个剂量点的照射；ART组的照射时间为1～3min，模拟IMRT组的完成时间为35min。另设空白对照组，不接受照射，其余条件相同。照射后12h，流式细胞术分析细胞周期分布，RT—PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平。结果在相同剂量点，模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组，两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加。模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较，Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义（P均〉0．05）；Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义（P均〈0．05），且随照射剂量的增加而下降，模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组。结论模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降，细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高。

应用蛋白质组学技术研究反义Cyclin B1的抗肿瘤作用机制

背景与目的:先前研究发现采用反义技术下调cyclin B1基因表达水平,可产生抗肿瘤的作用,但其抗肿瘤机制有待进一步研究。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法来探讨反义cyclin B1抗肿瘤作用的分子机制。方法:首先用含有小鼠cyclin B1反义全长cDNA的重组质粒转染小鼠CT26结肠癌细胞,经双向凝胶电泳(2-DE)分离转染组和未转染组的总蛋白,再用PDQuest图像分析识别2-DE胶图像,然后对差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF-MS)质谱分析,再经Mascot软件搜索数据库鉴定这些差异蛋白。最后根据被鉴定肽段的可信度,从这些蛋白质中选出肽段可信度最高的2个,用Western blot对其丰度差异进行了验证。结果:初步鉴定出7个差异表达蛋白,其中Axin2、CCTθ、DR5和HPCM27蛋白质在实验组上调,RFP17、mKIAA1195及LOC77035蛋白在实验组下调,而可信度最高的Axin2和DR5的蛋白质表达丰度差异为Western blot所证实。结论:多种蛋白质在反义cyclin B1后表达有明显差异,这些差异蛋白质参与细胞的增殖、分化、迁移、凋亡及转录调控等多条信号通路,提示反义cyclin B1的抗肿瘤机制可能与上述蛋白质的作用有关。

cyclin B1的启动子在乏氧条件下活性的变化

目的探讨细胞周期素B1(cyclin B1)的启动子在乏氧条件下活性的变化。方法采用PCR法获得对Hela细胞cy-clin B1的启动子,通过基因重组插入pGL3 promoter vector从而获得表达。荧光素酶的活性检测,了解通过双萤光素酶活性检测分析cyclin B1的启动子在乏氧条件下活性的变化。结果双萤光素酶活性检测cyclin B1的启动子活性在乏氧条件下,表达明显下降。结论在乏氧条件下,Hela细胞的cyclin B1的启动子活性下降,可能是乏氧条件下肿瘤细胞的自我保护机制。

人脑胶质瘤中cyclin B1的表达及其与细胞增殖活性的关系

目的研究人脑胶质细胞瘤中细胞周期素B1(cyclin B1)的表达水平,及其胶质瘤细胞增殖活性的关系。方法采用SABC免疫组化方法检测62例人脑胶质瘤和14例正常脑组织标本中cyclinB1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平,观察并对比各病理等级中表达水平。结果cyclin B1在正常脑组织中表达率为7.1%(1/14),其阳性率和平均标记指数随着胶质瘤病理分级的增高而明显升高(P<0.05)。双元相关性分析发现cyclin B1与PCNA的表达呈显著正相关(Pearson相关系数r=0.576,P<0.01)。结论人脑胶质瘤中cyclin B1的表达与病理学分级和肿瘤细胞增殖活性关系密切,可能是肿瘤恶性增殖的促进因素。

Cyclin B1正、反义全长cDNA腺病毒载体的构建及对HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的利用pAd/CMV/V5-DEST腺病毒载体系统构建含有人细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)正、反义全长cDNA的重组腺病毒,并研究其对人宫颈癌细胞株HeLa增殖及凋亡的影响。方法通过RT-PCR获取Cyclin B1全长cDNA,分别以正、反方向插入pENTR11,与pAd/CMV/V5-DEST进行同源重组后获得正确的重组腺病毒质粒,经293A细胞包装扩增获得重组病毒颗粒。重组腺病毒体外感染HeLa细胞,通过细胞计数和流式细胞术观测其对细胞增殖及凋亡的影响。结果Cyclin B1基因成功克隆到载体上,并经293A细胞包装出病毒颗粒。此重组腺病毒感染HeLa细胞后,反义Cyclin B1能明显抑制细胞的生长并且促进细胞凋亡。结论成功构建了携带人Cyclin B1正、反义全长cDNA的重组腺病毒载体,此载体可在HeLa细胞中发挥生物学作用。

CDC25B和Cyclin B1在胃腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨CDC25B和Cyclin B1在判断胃腺癌的病情及预后中的价值。方法:选取胃腺癌病例60例和正常胃组织15例作为本课题的研究对象。采用免疫组化法检测胃腺癌组织和正常胃组织中CDC25B和Cyclin B1的表达情况,结合临床病理和随访资料,运用统计学方法,回顾性分析CDC25B和Cyclin B1的表达和各项临床病理指标及预后之间的关系。结果:在胃腺癌中和正常胃组织中CDC25B的阳性表达率分别为46.7%和6.7%,而Cyclin B1的阳性表达率分别为70.0%和13.3%,差异有显著性。胃腺癌中CDC25B和Cyclin B1的阳性表达与浸润深度、TNM分期及淋巴结转移相关。生存率的单因素分析显示,浸润深度、TNM分期及淋巴结转移、CDC25B的表达和Cyclin B1的表达与胃腺癌的预后相关。生存率的多因素分析显示CDC25B和Cyclin B1的表达提示预后不良。未发现CDC25B和Cyclin B1在胃腺癌中的表达存在正性线性相关关系。结论:CDC25B和Cyclin B1的阳性表达提示胃腺癌预后不良。