人参皂苷Rg1对细胞衰老过程中p21,cyclin E和CDK2表达的影响

目的 探讨p21、细胞周期蛋白E(cyclin E)和周期蛋白依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在人参皂苷Rgl对抗三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导’WI-38细胞衰老过程中的可能作用。方法 细胞超微结构、流式细胞分析和β-半乳糖苷酶细胞化学染色观察衰老细胞,蛋白印迹法检测p21,cyclin E和CDK2蛋白的表达。结果 Rgl预处理可明显减弱t-BHP对WI-38细胞衰老的诱导作用,同时p21表达水平明显降低,cyclin E和CDK2表达水平增加。结论 人参皂苷Rgl对抗三丁基过氧化氢对细胞衰老的诱导作用可能与其改变p21,cyclin E和CDK2的表达水平有关。

血管内皮生长因子及其受体与Cyclin E-CDK2在肝癌发生发展过程中的表达变化

目的通过观察血管内皮生长因子(VEGF)及其受体和细胞周期蛋白E(Cyclin E)在肝癌模型大鼠肝脏中表达情况,探讨VEGF与细胞周期相关蛋白在肝癌发生发展过程中的作用。方法建立诱发性肝癌模型,采用酶联免疫吸附试验检测血清中VEGF量的变化,免疫组化技术检测VEGFR1、Cyclin E和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2)的表达情况。结果血清中的VEGF含量在对照组中最低,在实验组中逐渐增多,以癌变期含量最高。VEGFR1、Cyclin E和CDK2蛋白表达的平均光密度值均随着肝癌的发生发展有增高的趋势,大鼠血清中的VEGF量与肝脏组织中VEGFR1、Cyclin E和CDK2蛋白表达的平均光密度值随着肝癌的发生发展呈正相关(r=0.834,F=42.1274,P<0.05)。结论 VEGF及其受体VEGFR1在肝癌发生发展中异常表达,促进肝癌的发生发展,可能与Cyclin E、CDK2细胞周期蛋白异常表达有关。

中药胃康宁对胃癌细胞周期因子Cyclin E、CDK2和p27表达的影响

目的：观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞Cyclin E、CDK2（Cyclin dependant kinase 2,CDK2）和p27mRNA及其蛋白表达的作用.方法：分别以高、中、低不同剂量的胃康宁制剂对Wistar雄性大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量组含药血清培养胃癌细胞,采用免疫组织化学SABC法检测各组胃癌细胞中CyclinE、CDK2和p27蛋白的表达,RT-PCR法检测各组胃癌细胞中Cyclin E、CDK2和p27 mRNA的表达.结果：免疫组化法结果显示,胃康宁高、中、低剂量组Cyclin E和CDK2灰度值均有明显升高,与空白对照组比较,P＜0.05～0.01,而p27灰度值则显著降低（P＜0.05～0.01）;RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,胃康宁低、中、高剂量组均能明显降低Cyclin E和CDK2 OPTDI值（P＜0.05～0.01）.同时,还能升高p27 OPTDI值（P＜0.05～0.01）.结论：中药胃康宁可抑制胃癌细胞周期因子Cyclin E、CDK2及其mRNA的表达,促进细胞周期抑制因子p27及其mRNA的表达,这可能是胃康宁抑制胃癌细胞生长的机制之一.

CyclinE/CDK2及p27在胃癌细胞周期G_1/S调控中的研究

目的探讨胃癌组织中Cyclin E/CDK2和p27蛋白表达及细胞增殖与胃癌发生及发展的关系。方法采用流式细胞术检测Cyclin E/CDK2及p27蛋白在胃癌组织及正常胃壁组织细胞中的表达,结合患者的年龄、性别以及肿瘤细胞分化程度、癌组织浸润深度及有无淋巴结转移等临床病理因素进行综合分析。结果胃癌组织及正常胃组织细胞增殖指数分别为(40.62±5.07)%和(24.99±3.11)%,二者比较有显著性差异(P<0.01);FCM检测胃癌组织及正常胃组织细胞中Cyclin E蛋白表达荧光强度分别为(482.67±19.45)A.U.和(442.46±20.49)A.U.,CDK2蛋白表达荧光强度分别为(469.04±21.62)A.U.和(436.64±11.24)A.U.,p27蛋白表达A.U分别为(449.10±19.98)A.U.和(502.17±18.78)A.U.,二者比较均有显著性差异(P<0.01)。结论胃癌具有旺盛的增殖能力。Cyclin E、CDK2及p27蛋白的异常表达引起了细胞异常增殖,从而引起早期胃癌的发生。联合检测Cyclin E、CDK2及p27蛋白的表达可为临床上胃癌早期诊断提供实验依据,对于提高临床上胃癌早期诊断的准确率具有重要的意义。

cdk2和cyclinE在肾细胞癌中表达的意义

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶2(cdk2)和细胞周期蛋白 E(cyclin E)在肾细胞癌发病机制中的作用及其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测cdk2、cyclin E和增殖细胞核抗原(PCNA)在48例肾细胞癌和12例正常肾组织中的表达。结果 肾细胞癌中cdk2和cyclin E表达均显著高于正常肾组织(P<0.05),且与PCNA指数密切显著相关,但与肿瘤分级、分期、淋巴结转移及病理类型之间无显著性相关。肾细胞癌中cdk2和cyclin E共同高表达率达47.1%,且与肿瘤分级、分期和淋巴结转移之间呈正相关。结论 cdk2/cyclinE 复合高表达可能在肾细胞癌发病过程中起着重要作用,联合检测两者表达水平对判断肾细胞癌生物学行为有较重要的意义。

CyclinE和cdk2在眼睑基底细胞癌组织中的表达及其意义

目的探讨CyclinE和cdk2在眼睑基底细胞癌组织中的表达及其意义。方法收集武汉市中心医院和武汉大学人民医院病理科2002-2009年手术切除及活检的眼睑基底细胞癌(basal cell carcinoma,BCC)标本共20例,另取癌周围组织5例作对照。采用免疫组织化学方法观察各组细胞内CyclinE和cdk2表达。利用HPIAS-2000图像分析系统测定CyclinE和cdk2在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果眼睑基底细胞癌组织中CyclinE和cdk2呈高表达;癌旁组织中CyclinE和cdk2呈低表达。图像分析结果显示:眼睑基底细胞癌组织与癌旁组织之间CyclinE和cdk2的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.05)。结论 CyclinE和cdk2的高表达,在眼睑基底细胞癌的发生、发展过程中起了重要作用,两者共同表达对于术后病人监测及治疗方案的制定具有指导意义。

细胞周期相关蛋白cyclin E、cdk2和p27^(kip1)在垂体腺瘤中的表达

目的观察细胞周期相关蛋白cyclin E、cdk2和p27kip1在垂体腺瘤中的表达情况,探讨其与垂体腺瘤临床生物学行为的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测37例非侵袭性垂体腺瘤和21例侵袭性垂体腺瘤组织中cyclin E、cdk2和p27kip1蛋白的表达情况。结果在侵袭性垂体腺瘤中cyclin E和cdk2的表达明显高于非侵袭性垂体腺瘤(均P<0.01),p27kip1的表达明显低于非侵袭性垂体腺瘤(P<0.01);cyclin E与cdk2在垂体腺瘤中的表达呈正相关(r=1,P<0.01),两者与p27kip1的表达呈负相关(均r=-1,P<0.01);cyclin E和cdk2的表达与垂体腺瘤的侵袭性呈正相关(r=0.685,r=0.667,均P<0.01),而p27kip1的表达与垂体腺瘤的侵袭性呈负相关(r=0.659,P<0.01)。结论cyclin E、cdk2及p27kip1的表达情况可以作为判断垂体腺瘤的侵袭性和预后的指标。

E2F4对CDK2和CyclinA在肝癌细胞系中的转录调控特异性研究

目的研究E2F4对细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和细胞周期素A(CyclinA)在肝癌细胞系中的转录调控活性。方法扩增并克隆不同片段长度的CDK2和CyclinA启动子序列,E2F4表达质粒序列,转染肝癌细胞系(HepG2、QGY1007),双荧光报告系统检测荧光素酶表达活性,实时定量反转录-聚合酶链反应检测肝癌细胞系中CDK2和CyclinA mRNA的表达水平。结果双荧光报告系统、实时定量反转录-聚合酶链反应显示,在肝癌细胞系中转染E2F4表达质粒组CDK2和CyclinA启动子活性明显低于未转染E2F4表达质粒组,CDK2和CyclinA mRNA的表达水平降低。结论E2F4在肝癌细胞系中可以抑制CDK2和CyclinA的转录活性。

不同病变胆囊组织中P27^(kip1)、CDK2、Cyclin E的表达及相关性研究

目的通过对胆囊结石、胆囊腺瘤性息肉及胆囊癌组织中细胞周期蛋白激酶抑制蛋白P27kip1、细胞周期蛋白依赖激酶CDK2、细胞周期素CyclinE的表达及相关性研究,分析在3种胆囊病变组织中的表达与病理的关系,以探讨其与胆囊癌的发生、发展有关的可能因素。方法应用免疫组织化学的方法分析人类3组胆囊组织中的P27kip1、CDK2、CyclinE的表达。结果P27kip1在胆囊癌的表达与CDK2的表达呈显著负相关(r=-0.949,P<0.05);CDK2与CyclinE的表达呈显著正相关(r=0.908,P<0.01)。胆囊癌中P27kip1的表达与Nevin病理分期呈显著负相关(r=-0.558,<0.01),而与患者的性别、年龄、分化及病理类型无明显关系(PP>0.05)P27kip1在胆囊癌与胆囊结石之间的表达差异有显著性(P<0.01),胆囊结石与胆囊息肉之间的表达差异也有显著性(P<0.01);CDK2、CyclinE在胆囊癌与胆囊结石的表达差异有显著性(P<0.01),胆囊结石与胆囊息肉之间的表达差异也有显著性(P<0.05)。结论胆囊癌中P27kip1、CDK2、CyclinE基因出现异常表达,P27kip1的表达抑制及CDK2、CyclinE的过度表达在胆囊癌的发生、发展过程中可能起促进作用。P27kip1、CDK2、CyclinE并不能作为预测肿瘤发生,诊断早期肿瘤理想的指标;P27kip1的低表达是胆囊癌预后不良的预测指标之一,CDK2。

靶向CDK2、cyclinE的siRNA对HepG_2细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent-kinase 2,CDK2)活性对肝癌细胞株HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:根据基因库中登录的人和鼠CDK2、cyclinE序列,设计并构建CDK2、cyclinE干扰RNA真核表达载体;脂质体法转染肝癌细胞株HepG2细胞,流式细胞术分析CDK2及cyclinE对HepG2细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测CDK2、cyclinE活性的变化caspase-3活性的影响。结果:1.成功构建CDK2及cyclinE干扰RNA真核表达载体psiCDK2、psiCyclinE,用脂质体法导入肝癌细胞株HepG2细胞中,有效表达。2.转染48h后与空载体组相比:psiCDK2、psiCyclinE组G1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少;蛋白质印迹法分析表明psiCDK2、psiCyclinE组caspase-3酶原被激活。结论:靶向CDK2、cyclinE的siRNA能抑制HepG2细胞的增殖;靶向CDK2、cyclinE的siRNA能激活caspase-3,诱导肝癌细胞HepG2凋亡。

缺血性急性肾衰病程中cyclinE和CDK2的作用

目的 :探讨 cyclin E和周期素依赖性激酶 2 (CDK2 )在缺血性急性肾衰大鼠肾组织中的表达及其与肾小管上皮细胞增殖之间的关系。 方法 :急性肾衰大鼠分别在第 0、2、7、10、14天处死 ,取血测定肌酐值 ,免疫组化法观察肾细胞增殖程度以及 cyclin E和 CDK 2的分布 ,蛋白印迹法检测肾组织中 cyclin E和 CDK2蛋白表达。 结果 :大鼠血清肌酐值在缺血再灌注第2天时显著增高 ,第 7天时最高 ,第 10天时开始降低 ,第 14天时基本降至正常。对照组肾组织的细胞增殖指数 (PI)为 0 .7% ,肾缺血后第 2、7、10和 14天分别为 14 .8%、30 .9%、2 3.6 %和 12 .4 %。 Cyclin E和 CDK2蛋白在肾组织内主要分布于肾小管 ,且第 2天表达弱阳性 ,第 7和 10天表达分别为强阳性和阳性 ,第 14天表达减弱 ;两种蛋白的水平与免疫组化结果一致。两种蛋白表达水平和 PI之间均呈正相关。 结论 :缺血性急性肾衰大鼠肾小管上皮细胞增殖与肾组织 cyclin E和 CDK2表达上调密切相关。

侵袭性垂体腺瘤中cyclinE、cdk2和p27^(kip1)的表达及其临床意义

目的:探讨cyclinE、cdk2和p27kip1在侵袭性垂体腺瘤中的表达情况及其与临床生物学行为的关系。方法:采用western blotting法检测37例非侵袭性垂体腺瘤和21例侵袭性垂体腺瘤中cyclinE、cdk2和p27kip1蛋白的表达情况。结果:cyclinE和cdk2在侵袭组中的表达均明显高于非侵袭组(P均<0.01),而p27kip1在侵袭组中的表达明显低于非侵袭组(P<0.01);cyclinE和cdk2在垂体腺瘤中的表达呈正相关(P<0.01),两者与p27的表达均呈负相关(P均<0.01);cyclinE和cdk2的表达与垂体腺瘤的侵袭性均呈正相关(P均<0.01),p27的表达与垂体腺瘤的侵袭性呈负相关(P<0.01)。结论:cyclinE和cdk2的过度表达和p27kip1的低表达与侵袭性垂体腺瘤的增殖、发生、发展显著相关,三者可能成为判断垂体腺瘤的侵袭性和预后的指标。

狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株细胞周期调控通路蛋白cyclinE和cdk2,p27的影响

目的研究狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株细胞周期调控通路蛋白cyclinE和cdk2,p27等的影响。方法体外培养人多发性骨髓瘤U266细胞,加入终质量浓度为10.0,5.0,2.5mg/L的狗舌草提取物诱导48h,Western蛋白质印迹法检测cdk2和cyclinE蛋白的表达。结果Western印迹检测结果显示,10.0,5.0,2.5mg/L狗舌草提取物分别作用于U266细胞48h后,与正常对照组比较,cdk2和cyclinE蛋白表达上调,cdk2/β-Actin,cyclinE/β-Actin比值升高,p27蛋白表达下调,P27/B-Actin比值下降。结论狗舌草提取物诱导U266细胞凋亡的过程中,可能存在cdk2和cyclinE蛋白表达上调,p27蛋白表达下调参与。

人巨细胞病毒感染对宿主细胞CyclinE/Cdk2激酶活性影响的实验研究

目的研究HCMV感染对Cdk2蛋白水平及对CyclinE/Cdk2激酶活性的影响。方法通过接触抑制使细胞同步化于G0/G1期,用MOI=5PFU/per cell HCMV AD169毒株感染人胚肺成纤维细胞(HEL);用免疫沉淀,激酶活性分析法检测HCMV感染细胞Cdk2的活性。结果HCMV感染可引起CyclinE/Cdk2激酶的强烈激活,但HCMV感染并不诱导Cdk2蛋白丰度增加。结论HCMV感染G0/G1细胞,激活CyclinE/Cdk2激酶。使细胞周期越过G1/S限制点,进展至晚Gl期。

circ_0000515/miR-1296-5p/CDK2轴在乳腺癌中的作用

目的:探究circ_0000515在乳腺癌进展中的可能作用机制。方法:通过GEO数据库下载乳腺癌circRNA芯片数据集(GSE101123)并采用R语言进行表达差异分析,筛选出目标circRNA分子作为研究对象并检测其在乳腺癌细胞株和组织中的表达;生物信息学分析与选择该circRNA的目的miRNA,及后者对应的靶向mRNA,并采用双荧光素酶实验和蛋白质印迹进行验证;将目标circRNA的siRNA转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,CCK-8实验和划痕实验观察细胞的增殖和迁移,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RNA表达,蛋白质印迹实验检测mRNA编码蛋白的表达。结果:选择和下载GSE101123数据集后用R语言筛选出5个高表达的circRNA分子,选定其中的circ_0000515作为研究对象,生物信息学分析得出circ_0000515、miR-1296-5p和细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)三者之间可能存在靶向关系。qRT-PCR结果显示,circ_0000515中乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中的表达明显高于人乳腺上皮细胞株MCF-10A;在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织中的表达。抑制circ_0000515表达后,乳腺癌细胞增殖和迁移能力较对照组显著下降,miR-1296-5p表达明显增高;双荧光素酶实验证实circ_0000515与miR-1296-5p之间存在靶向关系。蛋白质印迹实验证实抑制circ_0000515表达后CDK2蛋白表达明显减低。结论:circ_0000515在乳腺癌中高表达,可能通过circ_0000515/miR-1296-5p/CDK2作用轴影响乳腺癌进展。

肝细胞癌患者中CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1的表达及意义

目的 研究肝细胞癌(HCC)组织中细胞周期素依赖激酶2相关性Culin结构域1(CAC1)、细胞周期蛋白B2(CCNB2)、细胞周期蛋白Y(Cyclin Y)及细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)的表达,探讨四者的临床意义。方法 应用R语言分析癌症基因组图谱数据库中HCC癌和癌旁组织中CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1 mRNA的表达。免疫组化检测诊治的84例HCC癌组织及癌旁组织中CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1蛋白表达。Pearson相关分析癌组织中各指标表达的相关性。统计学分析HCC癌组织中CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1表达与临床病理参数的关系。Kaplan-Meier生存分析(Log-rank检验)分析CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1表达与HCC患者生存预后的关系。结果 TCGA数据库HCC癌组织中CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1 mRNA的表达显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果CAC1、CCNB2、Cyclin Y与Cyclin E1 mRNA表达均呈正相关(P<0.05)。癌组织中CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。HCC患者不同肿瘤TNM分期及肿瘤数目的癌组织中CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。84例患者随访2~60个月,随访期间死亡39例,失访2例,5年总体生存率52.44%(43/82)。CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1阳性表达组的5年总体生存率分别低于阴性表达组患者(P<0.05)。结论 HCC中CAC1、CCNB2、Cyclin Y及Cyclin E1表达升高,四者表达与肿瘤TNM分期及肿瘤数目有关,有助于判断HCC患者的生存预后。

猪Cyclin A和CDK2蛋白对猪细小病毒增殖的调控作用

【目的】探究猪细胞周期素Cyclin A(pCyclinA)及其依赖性激酶2(pCDK2)对猪细小病毒(PPV)增殖的调控作用,为开展PPV复制机制研究提供依据。【方法】采用RT-PCR扩增pCyclinA和pCDK2基因,克隆至真核表达载体pEGFP-C1中构建重组载体,转染猪睾丸细胞(ST),经新霉素(G418)筛选获得pCyclinA或pCDK2过表达的ST细胞株。设计pCyclinA和pCDK2基因特异性干扰片段(shRNA)CycA894和CDK1163,构建干扰表达载体,转染ST细胞,经G418筛选得到pCyclinA和pCDK2低表达的ST细胞株,实时荧光定量PCR检测其干扰效率。流式细胞术分析pCyclinA和pCDK2过表达和低表达对ST细胞周期的影响。将猪细小病毒NY毒株(PPV-NY)接种过表达和低表达的ST细胞,用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒滴度。【结果】pCyclinA和pCDK2基因的开放阅读框(ORF)分别为1299和897 bp,构建了重组载体pEGFP-pCyclinA和pEGFP-pCDK2。荧光显微镜观察结果显示,融合蛋白EGFP-pCycA和EGFP-pCDK2分别在过表达细胞株ST-pEGFP-pCyclinA和ST-pEGFP-pCDK2中稳定表达。构建了干扰载体pGPU6-GFP/CycA894、pGPU6-GFP/CDK1163和pGPU6-GFP/-shNC(阴性对照);低表达细胞株ST-pGPU6-GFP/CycA894和ST-pGPU6-GFP/CDK1163中的pCyclinA、pCDK2基因的mRNA表达量均极显著降低(P<0.01)。pCyclinA或CDK2过表达分别极显著或显著降低ST细胞S期的比例(P<0.01或P<0.05)。pCyclinA低表达能极显著降低ST细胞G0/G1期的比例(P<0.01)、极显著增加S期和G2/M期的细胞比例(P<0.01);pCDK2低表达能显著增加ST细胞G0/G1期的比例(P<0.05),但却显著降低S期的细胞比例(P<0.05)。PPV在过表达细胞株ST-pEGFP-pCyclinA和ST-pEGFP-pCDK2中的滴度均极显著低于对照细胞(P<0.01)。低表达细胞ST-pGPU6-GFP/CycA894中PPV滴度极显著增加(P<0.01),而ST-pGPU6-GFP/CDK1163中的PPV滴度无显著变化(P>0.05)。【结论】pCyclinA或pCDK2过表达均能抑制PPV增殖;pCyclinA低表达可促进PPV增殖,pCDK2低表达对PPV增殖无显著影响;pCyclinA低表达极显著降低G0/G1期细胞比例、但极显著增加S期和G2/M期细胞比例。

PSME1/2通过抑制CDK15的表达促进子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭

目的:探索人类蛋白酶体激活剂(proteasome activator subunit,PSME)1/2在子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中的表达水平及其对EC细胞增殖和侵袭的影响。方法:检测子宫内膜细胞系和原代细胞中PSME1/2和细胞周期蛋白依赖性激酶15(cyclin-dependentkinase 15,CDK15)的表达,以敲低株分析PSME1/2与CDK15的表达相关性及其对肿瘤增殖和侵袭影响。比较PSME1/2和CDK15在EC组织和癌旁组织中的表达水平差异,并分析其对EC患者预后的影响。结果:与人正常子宫内膜细胞系相比,PMSE1/2在HEC1B(human endometrial adenocarcinoma cells,HEC1B)及原代细胞中mRNA(messenger RNA,mRNA)高表达和蛋白高表达,CDK15蛋白表达量下降。与对照组和双敲组比,CDK15在HEC1B系PSME1/2敲低株的蛋白表达升高,提示CDK15可能受PSME1/2抑制。在EC组织PMSE1/2高表达,CDK15低表达。PSME1/2表达与患者临床资料如年龄、术后诊断分型、分化程度、术后分期等差异无统计学意义(P>0.05)。PSME1/2、CDK15的表达与EC患者的不良预后无明显相关性(P>0.05)。结论:PSME1/2抑制CDK15的表达而促进EC细胞的增殖和侵袭,PSME1/2具有促EC作用。