二烯丙基二硫通过磷酸化Chk1负调控Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滞白血病K562细胞G_(2)/M期

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其分子机制。方法:采用CCK-8、细胞计数及流式细胞术观察DADS对K562细胞增殖与周期阻滞效应。Western Blot检测DADS对K562细胞PCNA、Chk1/2以及下游分子Cdc25C、CyclinB1与CDK1表达的影响。结果:CCK-8检测显示,15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L DADS处理后,呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%、81.05%(P<0.05)。对照组与Tween80组无抑制作用(P>0.05)。细胞计数结果显示,30μmol/L、60μmol/L与120μmol/L DADS处理K562细胞后,群体倍增时间分别为22.71±0.29、36.69±0.93与73.02±0.87呈浓度依赖性增加(P<0.05),而Tween80组与对照组无明显差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L与120μmol/L DADS作用K562细胞24 h与48 h后,G_(2)/M期百分率分别增加到17.6%与28.5%和18.6%与34.4%,较对照组有显著性差异(P<0.05)。60μmol/L DADS作用K562细胞1 h、2 h、4 h、8 h和24 h后,PCNA表达呈时间依赖性表达下调(P<0.05)。p-Chk1表达呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1、Chk2与p-Chk2表达无明显差异(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但是,14-3-3蛋白无明显改变(P>0.05)。结论:DADS可磷酸化Chk1通过Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路抑制K562细胞增殖与阻滞G_(2)/M期。

芒果苷对白血病HL-60细胞周期及CDC2/CyclinB1表达的影响

目的:观察芒果苷对白血病HL-60细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期分裂基因2(CDC2)表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法:应用MTT比色法测定芒果苷对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术(FCM)检测芒果苷对细胞周期的影响;用RT-PCR技术检测CyclinB1及CDC2 mRNA表达水平。结果:芒果苷呈剂量及时间依赖性抑制HL-60细胞的生长,作用24 h后,G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞;CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达随药物质量浓度的增加而逐渐增强,在芒果苷质量浓度80μmol/L时表达达到峰值。结论:芒果苷可抑制HL-60细胞增殖,阻滞细胞周期于G2/M期,显著上调HL-60细胞CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达水平。芒果苷诱导HL-60细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。

组织芯片/免疫组化检测CDC2/CyclinB1在胶质瘤中的联合表达及意义

目的:探讨CDC2/CyclinB1在胶质瘤组织芯片中的表达及意义。方法:构建布有各级别人脑胶质瘤、人脑胶质瘤体外细胞系球体及其移植瘤组织、脑肿瘤干细胞、神经干细胞和相应的对照标本共118例的组织芯片,进行CDC2、CyclinB1的EnVision法免疫组化染色,分析其表达率、表达强度及联合表达情况。结果:CDC2、CyclinB1表达阳性率在71例人脑胶质瘤组织中分别为54.9%和52.1%。11例正常成人脑组织中分别为18.2%和9.0%,两者比较P<0.05。CDC2和CyclinB1的联合表达率为89.7%,两者表达呈正相关(r=0.90,P<0.01)。CDC2、CyclinB1的表达在不同级别人脑胶质瘤中也有差异(P<0.05),与病理级别分别呈正相关(r=0.982,P=0.018;r=0.959,P=0.041)。在体外培养的胶质瘤细胞球体、裸鼠皮下移植瘤、人胚胎脑和裸小鼠骨髓中均高表达,而脑肿瘤干细胞和神经干细胞球体未见表达。结论:CDC2和CyclinB1,随着脑胶质瘤恶性度增高而表达量增加;在神经干细胞、脑肿瘤干细胞低表达,而在SHG44和GBM细胞球体中高表达,表明其在肿瘤细胞分化抑制中起作用。这对进一步研究胶质瘤分子病因有重要价值。

散发性乳腺癌中BRCA1和cyclinB1的表达

目的 探讨BRCA1和cyclinB1在散发性乳腺癌的表达及意义。方法 应用免疫组化S P法检测 2 0例乳腺腺病和 5 2例散发性乳腺癌中BRCA1和cyclinB1的表达。结果 所有乳腺腺病中BRCA1均呈阳性表达 ,散发性乳腺癌中BRCA1表达率和强度均下降 (P <0 0 1) ,BRCA1表达下降或丧失与散发性乳腺癌组织学分级有关 (P <0 0 5 )。cyclinB1在乳腺腺病和散发性乳腺癌中表达阳性率分别为 35 0 % (7/ 2 0 )和 6 9 2 % (36 / 5 2 ) ,差别有统计学意义 (P <0 0 1) ,cyclinB1过表达与组织学分级和肿块大小有关 (分别P <0 0 1,P <0 0 5 )。在散发性乳腺癌中BRCA1与cyclinB1的表达呈负相关 (P <0 0 1)。

siRNA诱导CyclinB1沉默增加HePG2细胞对柔红霉素的敏感性(英文)

探讨了CyclinB1在肝癌药物耐受形成中的作用.用siRNA技术沉默CyclinB1在细胞中的表达,使用流式细胞仪技术分析细胞的凋亡和周期分布,用细胞克隆形成能力分析和细胞毒性实验分析细胞的增殖能力.由siRNA诱导的CyclinB1下调导致40%～50%肝癌细胞阻滞在G2/M期,并显著抑制肝癌细胞的单克隆形成能力;柔红霉素联合CyclinB1 siRNA较单独使用柔红霉素能更加有效地导致肝癌细胞凋亡,而在人正常肝细胞HL-7702中这种现象不明显.实验结果表明针对于CyclinB1的靶向性下调与肝癌药物的联合使用将有可能成为肝癌治疗的新策略.

白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、cyclinB1表达影响

研究白屈菜碱对人胃癌SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达,探讨白屈菜碱诱导人胃癌SGC-7901细胞G2/M期阻滞的机制.采用Western blotting法测定白屈菜碱对SGC-7901细胞Cdk1、p-Cdk1(Thr14)、cyclinB1蛋白表达的影响.不同质量浓度的白屈菜碱可显著下调人胃癌SGC-7901细胞内Cdk1与cyclinB1蛋白表达水平,同时显著上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达水平,并呈一定的剂量依赖性.白屈菜碱可下调SGC-7901细胞内Cdk1和cyclinB1蛋白的表达,上调p-Cdk1(Thr14)蛋白的表达,这可能是白屈菜碱诱导SGC-7901细胞G2/M期阻滞的主要机制之一.

CyclinB1、CDK1在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨食管鳞癌组织中细胞周期蛋白CyclinB1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1表达及其临床病理学意义.方法:应用免疫组织化学SP法对52例食管鳞癌(组织学Ⅰ级8例,Ⅱ级20例,Ⅲ级24例;有淋巴结转移20例,无淋巴结转移32例;原位癌16例,侵袭性癌36例包括浸润至黏膜下层、肌层、全层)及其配对的癌旁正常组织进行CyclinB1、CDK1的检测,分析其阳性表达与食管鳞癌患者临床病理因素的关系.结果:食管鳞癌组织中CyclinB1、CDK1的阳性表达高于癌旁正常食管黏膜组织,2组差异都有统计学意义(71.2%vs2.0%,65.4%vs3.9%,均P<0.05).食管鳞癌组织中CyclinB1、CDK1的表达都与性别、年龄无关;与组织学分级、浸润深度及淋巴结转移有关(均P<0.05).CyclinB1阳性表达强度与CDK1的阳性表达强度之间呈正相关(r=0.697,P<0.05).结论:CyclinB1、CDK1的高表达会促进食管鳞癌的发生与发展.而且食管鳞癌中CyclinB1与CDK1的表达密切相关,可作为食管鳞癌生物学行为预测的参考指标.

山奈酚对CNE-2细胞周期及CyclinB1、Cdk1mRNA表达的影响

目的:观察山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1)表达的影响。方法:分别用0、20、40、60、80和100μmol/L的山奈酚处理CNE-2细胞。处理24、48和72h后,应用MTT法测定CNE-2细胞活力;处理24和48h后用流式细胞术检测细胞周期;处理24h后用RT-PCR技术检测细胞CyclinB1及Cdk1mRNA的表达水平。结果:随山奈酚作用剂量的增加和作用时间的延长,CNE-2细胞活力逐渐降低(F浓度=385.194,F时间=237.324,F浓度×时间=13.757,P<0.001),细胞被阻滞于G2/M期(P<0.05);CNE-2细胞中CyclinB1和Cdk1mRNA的表达量随山奈酚作用浓度的增加而逐渐降低(F=95.682、154.871,P<0.001)。结论:山奈酚可能通过下调CNE-2细胞CyclinB1和Cdk1mRNA的表达水平,诱导G2/M期阻滞,抑制其增殖。

VX-680对T24细胞增殖的抑制作用及对CyclinD1和CyclinB1表达的影响

目的：探讨AuroraA激酶抑制剂VX一680对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用及对CyclinB1和CyclinB1mRNA表达的影响及意义。方法：体外培养T24细胞．分别给予不同浓度及不同作用时间的VX-680．采用MTT法检测细胞增殖能力：RT—PCR检测T24细胞Cyclin B1和Cyclin B1mRNA的表达水平，结果：MTT结果显示：100～500nmol／LVX-680作用24、72h均对T24细胞有明显抑制作用．呈浓度依赖性且72h时抑制效果更显著：100～500nmol／LVX-680作用72h后，各组T24细胞CyclinB1和CyclinB mRNA的表达水平下调，呈浓度依赖性。结论：Aurora激酶抑制剂VX-680可能通过下调CyclinB1和CyclinB1mRNA表达显著抑制人膀胱癌T24细胞增殖，且具有浓度依赖性。

莱菔硫烷诱导HepG-2细胞G_2/M期阻滞及其对Cdk1和CyclinB1蛋白表达的影响

目的:研究莱菔硫烷(SFN)在体外对人肝癌HepG-2细胞G2/M期的阻滞作用,并探讨其分子作用机制。方法:10、20、40μmol·L-1的SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48h后,采用流式细胞仪检测SFN对HepG2细胞周期的影响;WesternBlot法检测SFN对HepG2细胞内Cdk1、p-Cdk1(Thr14)和CyclinB1蛋白表达的影响。结果:SFN作用于HepG-2细胞48h后,随着SFN浓度的增大,G2/M期细胞比例逐渐升高,当SFN浓度达到40μmol·L-1时,G2/M期细胞比例达到31.95%,且出现凋亡峰;随SFN浓度的增大,细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达量显著降低(P<0.01或P<0.05),同时p-Cdk1(Thr14)的表达显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论:SFN可诱导人肝癌HepG-2细胞发生G2/M期阻滞;SFN可通过下调HepG-2细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达、上调p-Cdk1(Thr14)的蛋白表达水平,进而抑制Cdk1-CyclinB1复合物的形成和活化使人肝癌HepG-2细胞阻滞在G2/M期。

Claudin-1与cyclinB1在下咽鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究Claudin-1与cyclinB1在下咽鳞状细胞癌及癌旁组织中的表达情况,分析它们与下咽鳞状细胞癌各临床因素及患者预后之间的关系。方法 (1)选取97例下咽鳞状细胞癌组织学标本及90例癌旁正常黏膜组织标本,采用免疫组化的方法比较Claudin-1和cyclinB1在下咽鳞状细胞癌及正常黏膜组织中表达的差异,分析两者在下咽鳞状细胞癌中的表达与临床因素及患者预后之间的关系;(2)选取30位下咽鳞状细胞癌患者术后的癌组织及癌旁正常黏膜,采用RT-PCR方法,检测Claudin-1和cyclinB1的表达并定量分析,探讨两者的相关性。结果 (1)Claudin-1与cyclinB1在下咽鳞状细胞癌中的阳性表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05);(2)Claudin-1蛋白表达与肿瘤的分化程度(P=0.004)和淋巴结转移(P=0.026)有关,与患者的生存率相关(P=0.003);(3)CyclinB1蛋白表达与肿瘤的分化程度(P<0.001)有关;(4)Claudin-1与cyclinB1呈明显正相关关系(r=0.482,P<0.001)。结论 Claudin-l和cyclinB1具有协同作用,二者的高表达可能促进了下咽癌的发生与发展。

不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34^(cdc2)表达的差异

旨在探究不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2的表达情况。本试验选取发育正常、体重相似的5~6d荷斯坦哺乳公犊18头,随机分为3组,每组6头,饲喂相同的基础日粮,分别在30(断奶)、60和90d时从各组分别随机抽取2头,采集其睾丸备用;通过qRT-PCR技术检测不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸CyclinB1和p34cdc2进行定位分析。结果表明:90d时CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达量显著高于30与60d(P<0.05),但30与60d两种基因mRNA表达量均差异不显著(P>0.05);p34cdc2蛋白在不同日龄犊牛表达差异显著(P<0.05);CyclinB1蛋白在60、90d的表达量显著高于30d(P<0.05),但60和90d差异不显著(P>0.05)。综上表明,CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白在睾丸的表达量随着犊牛日龄的增加而增加,且不同的日龄CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白表达量存在一定的差异。

X射线全身照射对小鼠胸腺细胞CyclinB_1和p34^(cdc2)蛋白表达的影响

本文采用免疫组织化学法研究了低、高剂量 X射线全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞 CyclinB1和 p34cdc2 蛋白表达的变化。结果表明 ,与假照组相比 ,75 m Gy X射线全身照射后 8h小鼠胸腺细胞Cyclin B1蛋白表达开始升高 ,12 h达高峰 ,4 8h恢复至正常水平 ;而 2 Gy照射后 4 h小鼠胸腺细胞Cyclin B1蛋白表达开始降低 ,12 h降至最低 ,2 4 h有回升趋势 ,4 8h恢复至假照水平。p34cdc2 蛋白的表达 ,与假照组相比 ,75 m Gy照射后 4～ 4 8h未见明显变化 ;而 2 Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后 Cyclin B1蛋白表达的变化基本一致。提示 :低剂量 X射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞 Cyclin B1蛋白表达增强 ,从而促进细胞周期进程 ,但对 p34cdc2 表达无影响 ;相反 ,较高剂量照射导致 Cyclin B1和p34cdc2蛋白表达均下降 ,最终发生 G2 阻滞。

CyclinB1在非霍奇金淋巴瘤中的表达及诊断价值

目的:探讨CyclinB1在良、恶性淋巴疾病表达差异以及在恶性淋巴瘤中表达与多种预后因素的相互关系,并分析其表达的临床意义。方法:采用免疫组织化学ABC法,检测CyclinB1在83例非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织及20例淋巴结反应性增生(RH)组织中的表达情况。结果:CyclinB1在NHL中的表达显著高于RH组织中的表达(P<0.01);NHL中CyclinB1在Ⅲ+Ⅳ期的表达显著高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05),在有结外受侵的NHL患者中明显高于无结外受侵的患者(P<0.05),在侵袭性NHL显著高于惰性NHL(P<0.05)。结论:CyclinB1可能参与NHL的进展。检测CyclinB1的表达情况,有助于NHL和RH的鉴别诊断,对判断NHL的恶性程度有一定的临床价值。

Stat5与CyclinB1在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性

目的探讨信号转导与转录激活因子5(Stat5)与细胞周期素CyclinB1在非小细胞肺癌和正常肺组织中的表达及关系,进一步探讨Stat5、CyclinB1与非小细胞肺癌发生发展的关系。方法利用SABC免疫组织化学技术检测35例非小细胞肺癌(NSCLC)组织及10例肺正常组织中Stat5和CyclinB1的表达。结果Stat5、CyclinB1在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于肺正常组织(P<0.01)。Stat5蛋白和CyclinB1蛋白在NSCLC组织中的表达与患者的性别、年龄、组织分化程度无关。Stat5蛋白与组织学类型有关,在腺癌组织中的表达强度明显高于鳞癌,差异有统计学意义(P<0.01)。CyclinB1蛋白与TNM分期有关,在Ⅲ、Ⅳ期癌组织中的表达强度明显高于Ⅰ、Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05)。Stat5与CyclinB1的表达呈显著相关性(P<0.01)。结论Stat5、CyclinB1可能在肺癌的发生发展中发挥重要作用,CyclinB1的表达可能由Stat5调控。

PPN/MG61、CyclinB2在甲状腺肿瘤组织及外周血中的表达

利用Realtime RT-PCR技术检测PPN/MG61、CyclinB2在甲状腺肿瘤患者肿瘤组织及外周血的表达情况,分析上述指标的相互关系。发现CyclinB2的表达在甲状腺乳头状癌组织和外周血血清中明显高于甲状腺良性疾病(P<0.05);PPN/MG61基因的表达呈反向变化趋势。提示PPN/MG61、CyclinB2有可能作为甲状腺肿瘤术前良恶性诊断的指标。

CyclinA和CyclinB1在乳房外Paget病中的表达及意义

目的探讨乳房外Paget病中Cyclin A和Cyclin B1的表达及意义。方法采用免疫组化二步法检测28例乳房外Paget病及18例正常对照皮肤组织中Cyclin A和Cyclin B1的表达情况。结果 Cyclin A和Cyclin B1在乳房外Paget病组织中阳性表达率明显高于正常皮肤组。Cyclin A的表达和Cyclin B1的表达呈正相关(P<0.05)。结论Cyclin A和Cyclin B1在乳房外Paget病中高表达,提示两者可能参与了乳房外Paget病的发病过程。

膀胱移行细胞癌中14-3-3σ和CyclinB1表达的临床意义

目的探讨14-3-3σ和细胞周期蛋白B1(CyclinB1)在膀胱移行细胞癌组织中的表达与膀胱移行细胞癌生物学行为的关系。方法用免疫组化S-P方法检测10例正常膀胱组织,48例膀胱移行细胞癌患者肿瘤组织中14-3-3σ和CyclinB1的表达;分析14-3-3σ和CyclinB1的表达与膀胱移行细胞癌分期、分级、术后生存率的相关性及14-3-3σ和CyclinB1在膀胱移行细胞癌组织中表达的相关性。结果正常对照组10例14-3-3σ中9例阳性(90%),膀胱移行细胞癌组48例14-3-3σ8例阳性(16.6%);正常对照组中CyclinB1 2例阳性(20%),而膀胱移行细胞癌组48例CyclinB1 38例阳性(79.2%)。结论 14-3-3σ低表达和CyclinB1的高表达与膀胱移行细胞癌分级、病理分期显著相关;14-3-3σ高表达和CyclinB1低表达可抑制膀胱移行细胞癌的发生。二者的协同作用可能促进肿瘤的演进,检测14-3-3σ和CyclinB1可作为评价膀胱移行细胞癌的新的参考指标。

老年急性淋巴细胞白血病大剂量甲氨蝶呤治疗患者β_2-MG、CyclinB2水平和IgH基因重排及其临床意义

目的探讨老年急性淋巴细胞白血病大剂量甲氨蝶呤治疗患者β_2-MG、CyclinB2水平和IgH基因重排及其与预后的关系。方法以老年急性淋巴细胞白血病患者36例为研究对象,均采用大剂量甲氨蝶呤[3g/(m^2·d)]治疗,并随访至少1年。采用放射免疫法检测其治疗前的外周血β_2-MG水平,实时定量RTPCR法检测外周血CyclinB2,并采用半巢式PCR方法检测外周血IgH基因重排,统计其随访1年生存率。结果 36例患者1年生存率为80.56%(29/36)。与其存活患者比较,其死亡患者治疗前外周血CyclinB2和β_2-MG水平较高,IGH基因重排阳性率亦较高(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,老年急性淋巴细胞白血病外周血β_2-MG、CyclinB2水平和IgH基因重排率与其1年生存率均呈负相关(r=-0.844,-0.818,-0.852,P<0.05)。结论老年急性淋巴细胞白血病大剂量甲氨蝶呤治疗患者β_2-MG、CyclinB2水平和IgH基因重排与其预后情况密切相关,且三者联合预测患者预后价值良好,可能作为老年急性淋巴细胞白血病大剂量甲氨蝶呤治疗预后评估参考指标。