宫颈鳞癌中Plkl和CyclinBl的表达及其临床意义

目的:探讨Plk1及Cyclin Bl在宫颈鳞癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法:利用组织芯片技术,结合免疫组化Elivision方法对88例宫颈鳞状细胞癌、20例宫颈上皮内瘤变(CIN)、20例正常宫颈组织中Plkl和Cyclin Bl表达情况进行检测。结果:Plkl在宫颈鳞癌、CIN中的表达阳性率分别为72.7%、55.0%,明显高于正常宫颈组织10.0%,差异有统计学意义(P<0.01),但前两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。Cyclin Bl在宫颈鳞癌中的表达阳性率54.5%,明显高于CIN 30.0%和正常宫颈组织10.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。Plk1的表达与宫颈鳞癌淋巴结转移相关(P<0.05),Cyclin B1的表达与宫颈鳞癌浸润深度相关(P<0.05),且Plkl和Cyclin Bl在宫颈鳞癌中的表达呈正相关(rs=0.261,P=0.014)。结论:Plkl和Cyclin Bl的表达与宫颈鳞癌的发生发展、浸润深度和转移相关,两者联合有可能成为宫颈鳞癌临床治疗的新靶点。

氯化两面针碱对KB及KBV200细胞周期的影响及其机制

目的:研究氯化两面针碱抑制人口腔鳞癌细胞KB及其耐药株KBV200增殖的作用及机制。方法:应用MTT比色法测定氯化两面针碱对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测氯化两面针碱对细胞周期的影响;RT-PCR技术和免疫细胞化学法检测cdc2和cyclinB1的mRNA水平及其蛋白表达。结果:氯化两面针碱在体外呈浓度依赖性显著抑制KB及KBV200细胞的生长,48hIC50分别为(2.36±0.22)mg/L和(2.43±0.19)mg/L;与对照组相比,经3mg/L氯化两面针碱作用,KB及KBV200G0/G1期、S期细胞明显减少,G2/M期细胞显著增多(P<0.01);cyclinB1的转录与表达降低(P<0.01),而cdc2的转录与表达未见明显变化(P>0.05)。结论:氯化两面针碱有可能通过下调cyclinB1的转录与表达来诱导KB细胞及其耐药株KBV200的G2/M期阻滞,从而抑制其增殖。

DADS通过Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路诱导白血病HL-60细胞G2/M期阻滞

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞周期阻滞及其分子机制。方法采用细胞计数、软琼脂克隆形成实验及流式细胞术观察DADS对HL-60细胞生长抑制与周期阻滞效应。Western blot检测DADS对HL-60细胞Chk1/2以及下游分子的影响。结果细胞计数显示,60、120μmol·L-1DADS处理后,其群体倍增时间从19.14 h增加到35.03、71.82 h(P<0.05)。软琼脂克隆形成实验表明,30、60、90、120μmol·L-1DADS对HL-60细胞克隆形成率的抑制率分别为35.06%、62.10%、93.79%、99.35%(P<0.05)。流式细胞术检测显示,60和120μmol·L-1DADS分别作用HL-60细胞24 h后,DADS可呈时间与浓度依赖性诱导HL-60细胞G2/M期阻滞(P<0.05)。60μmol·L-1DADS处理HL-60细胞后,p-Chk1可呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1与Chk2总蛋白和pChk2无改变(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB 1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但14-3-3蛋白表达没有改变(P>0.05)。结论 DADS能够抑制HL-60细胞增殖,并通过Chk1/Cdc25C/CyclinB 1/CDK1通路阻滞HL-60细胞于G2/M期。

检测细胞周期分布的改变以探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制

目的 探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.方法 实验分4个组,对照组、单纯加热组、单纯照射组和联合处理组.采用流式细胞仪分析G2/M期分布比例及凋亡百分比,Western-Blotting检测CyclinB1的表达,改良的荧光染色法观察核碎片形态.结果 联合处理组G2/M期分布比例较高,CvclinB1表达较高,并产生更多的核碎片,放射诱导的凋亡百分比并不增加.结论 G2/M 期分布比例增高,CyclinB1表达增加是温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.

电离辐射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响

目的 研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响 ,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G2 期阻滞的分子机理。方法 采用流式细胞仪检测了X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化。采用半定量RT PCR方法分别检测cyclinB1、cdc2基因转录水平变化。结果 2GyX射线全身照射后 4及 1 2hG2 +M期细胞百分率升高 (P <0 0 5) ;0 5～ 6Gy照射后 1 2hG2 +M细胞百分率呈剂量依赖性增加 (P <0 0 5～P <0 0 1 )。 2GyX射线照射后 2～ 48h小鼠骨髓细胞cyclinB1转录水平在各个时间点未见明显变化 ,0 5～ 6GyX射线照射后 1 2h ,骨髓细胞cyclinB1基因转录在各剂量点均未见明显改变 ;2GyX射线照射后小鼠骨髓细胞cdc2转录水平从照后 4h即开始不同程度下降 ,1 2h达最低值 (为假照射组的 46 % ) ,照射后 48h开始恢复 ,0 5～ 6GyX射线照射后 1 2h ,骨髓细胞cdc2基因转录水平在各剂量点均明显降低 ,分别达到假照射组的40 %～ 70 %。结论 电离辐射可诱导小鼠骨髓细胞发生G2 期阻滞 ,cdc2激酶活性下降在G2 期阻滞中起重要作用。