SARS-CoV-2靶向CypA/CD147受体途径诱导心肌细胞凋亡

目的探究SARS-CoV-2靶向亲环素A(CypA)/细胞外金属蛋白酶诱导剂(CD147)受体途径诱导心肌细胞凋亡的可能机制。方法构建pEncmv-SARS-CoV-2 S-3xflag重组载体质粒转染H9c2细胞,TUNEL实验、流式细胞术和DNA ladder分析细胞凋亡,免疫共沉淀(CoIP)验证CD147与SARS-CoV-2 S蛋白之间相互作用,Western blotting法检测细胞凋亡信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,TUNEL实验和流式细胞术结果显示转染组细胞凋亡显著增加(P<0.05),DNA ladder分析发现DNA降解明显。Western blotting法检测显示Caspase12、DR3表达显著升高(P<0.001),FAS表达升高(P<0.01),TRF1、DR4表达降低(P<0.01)。结论SARS-CoV-2 S蛋白靶向CypA/CD147受体入侵宿主细胞,激活内质网通路(Caspase12)和死亡受体通路(DR3、FAS),以内源性和外源性凋亡途径诱导心肌细胞凋亡。

CyPA和XBP1在糖尿病大鼠外周血和动脉组织中的表达

目的研究2型糖尿病大鼠中亲环蛋白A(cyclophilin A,CyPA)和X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)的表达情况。方法建立1型糖尿病和2型糖尿病SD大鼠模型,同期饲养普通饮食和高脂饮食大鼠,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测4组大鼠CyPA和XBP1在外周血的表达情况,苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)观察4组大鼠冠状动脉组织形态学改变,免疫组化法检测4组大鼠下肢股动脉组织CyPA和XBP1的表达情况。结果2型糖尿病大鼠血清CyPA表达水平较普食组、高脂喂养组和1型糖尿病组升高,差异有统计学意义(t分别为-7.626、3.677、5.040,P<0.01)。2型糖尿病组大鼠血清XBP1表达水平较普食组、高脂喂养组降低,差异有统计学意义(t分别为4.208、2.997,P分别为0.001、0.013),较1型糖尿病组降低,差异无统计学意义(t=1.843,P=0.084)。HE染色未见4组大鼠冠状动脉发生明显脂肪化改变。免疫组化法检测结果显示,CyPA在2型糖尿病组大鼠动脉组织中表达水平最高;XBP1在高脂喂养组大鼠动脉组织中表达水平最高,在2型糖尿病组大鼠动脉组织中表达水平最低。结论高糖、高脂环境与大鼠外周血和动脉组织CyPA和XBP1表达水平具有相关性,其中高糖、高脂联合作用的影响相较单纯高糖或单纯高脂环境强。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清Endocan,CyPA,asprosin水平与病情及认知功能的关系

目的研究阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者血清内分泌素(Endocan)、亲环素A(CyPA)、白脂素(asprosin)水平与病情及认知功能的关系。方法收集2021年1月~2023年12月石家庄市第三医院收治的99例OSAHS患者,根据呼吸暂停低通气指数(AHI)分为轻度组(n=29)、中度组(n=45)和重度组(n=25)。采用ELISA方法检测血清Endocan、CyPA、asprosin水平,多因素Logistic回归分析患者病情程度的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析,血清Endocan、CyPA、asprosin对患者认知功能的诊断价值,Spearman分析血清Endocan、CyPA、asprosin与病情程度及认知功能的相关性。结果与轻度组相比,中、重度组患者血清Endocan、CyPA、asprosin水平显著升高(P<0.05),且重度组血清Endocan、CyPA、asprosin水平较中度组显著升高(P<0.05);三组患者的AHI、Epworth嗜睡量表(ESS)评分、部分睡眠相关参数之间差异有统计学意义(P<0.05);进一步分析,平均血氧饱和度(mean oxygen saturation,MSaO2)为影响患者病情程度的保护因素(P<0.05),AHI、血清Endocan、CyPA、asprosin水平均为影响患者病情程度的危险因素(P<0.05);认知障碍患者的血清Endocan、CyPA、asprosin水平显著高于认知正常患者,蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分低于认知正常组(P<0.05);血清Endocan、CyPA、asprosin以及联合诊断患者认知功能障碍的AUC分别为0.889、0.893、0.861、0.974,且联合诊断显著优于Endocan(Z=2.832,P=0.005)、CyPA(Z=2.907,P=0.004)、asprosin(Z=3.225,P=0.001)单独诊断;血清Endocan、CyPA、asprosin与AHI呈正相关,与MoCA评分呈负相关(P<0.05)。结论在重度OSAHS患者以及认知功能障碍患者中,血清Endocan、CyPA、asprosin水平均升高,且对患者病情程度及认知功能具有一定辅助诊断价值。

血清ZAG、TLR4及CyPA在癫痫患者中的检测意义及其与癫痫认知功能异常的相关性分析

目的探讨血清锌α2糖蛋白(ZAG)、Toll样受体4(TLR4)及亲环素A(CyPA)在癫痫患者中的检测意义及其与癫痫认知功能异常的相关性。方法回顾性选取2020年10月至2023年10月唐山市人民医院收治的83例癫痫患者作为观察组,根据患者蒙特利尔认知功能评估量表(MoCA)评测结果,将其分为认知功能异常组(n=53)与认知功能正常组(n=30)2个亚组,另选取同期在本院体检的83名健康志愿者作为对照组。比较观察组与对照组血清ZAG、TLR4及CyPA表达水平,采用受试者操作特征(ROC)曲线明确血清ZAG、TLR4及CyPA对癫痫的诊断价值。进一步对比认知功能异常组与认知功能正常组血清ZAG、TLR4及CyPA表达水平的差异,采用Pearson相关性分析对ZAG、TLR4及CyPA与癫痫患者认知功能的相关性进行分析。结果观察组ZAG水平为(34.24±4.26)μg/mL,低于对照组[(48.33±7.21)μg/mL],观察组TLR4、CyPA水平分别为(4.57±1.25)、(5.76±1.35)ng/L,均高于对照组[(1.01±0.23)、(2.15±0.34)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,CyPA、TLR4、ZAG对癫痫的诊断曲线下面积(AUC)分别为0.698、0.721、0.641,3者联合对癫痫的诊断AUC为0.897,AUC明显高于单一指标(P<0.05)。认知功能异常组ZAG水平为(31.45±5.26)μg/mL,低于认知功能正常组[(40.36±5.64)μg/mL],认知功能异常组TLR4、CyPA水平分别为(6.56±1.66)、(7.15±2.47)ng/L,均高于认知功能正常组[(3.64±0.67)、(4.57±1.68)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,ZAG与癫痫患者MoCA评分呈负相关(r=-0.521,P<0.05),TLR4、CyPA与癫痫患者认知功能呈正相关(r=0.483、0.597,P<0.05)。结论血清ZAG、TLR4及CyPA 3者联合对癫痫的诊断及预测具有重要价值,且其与癫痫患者认知功能具有密切关系。

CypA/CD147在SARS-CoV-2感染性心血管疾病诊疗中的作用研究进展

新型冠状病毒感染(COVID-19)疫情当前已得到有效控制,然而其相关并发症仍不容忽视,尤其是心血管循环系统更是新型冠状病毒(SARS-CoV-2)活跃的场所。血管紧张素转换酶2(ACE2)是一种高表达于心脏、肾脏和睾丸的Ⅰ型跨膜糖蛋白,新型冠状病毒刺突蛋白通过结合细胞表面受体ACE2入侵宿主细胞,但以此为靶点研发的疫苗、药物在临床应用中仍存在诸多不足。亲环素A(CypA)作为分子伴侣可促进蛋白质折叠及T细胞活化,CD147是研究最为广泛的CypA受体之一,CypA/CD147相互作用在新型冠状病毒进入宿主细胞时发挥重要作用,但新型冠状病毒通过CypA/CD147信号通路入侵心血管系统的研究鲜有报道。基于此,本文在总结前期研究证据并结合课题组研究的基础上,通过对CypA/CD147结构功能、CypA/CD147在心血管疾病中的作用及新型冠状病毒靶向CypA/CD147信号通路引发的心血管疾病进行综述,以期为COVID-19感染并发心血管系统疾病的诊疗提供参考。

冠心病患者血清CypA水平的影响因素分析

目的:探讨冠心病患者血清亲环蛋白A(CyPA)水平的影响因素,为冠心病的防控提供理论依据。方法:选取2021年7月—2022年1月新疆医科大学第一附属医院收治的冠心病患者120例作为研究对象,根据CyPA水平分为CyPA水平较高组和CyPA较低组,各60例。收集并比较患者一般资料、血脂指标水平,分析冠心病患者血清CyPA水平的影响因素。结果:两组患者性别、年龄、BMI、有无吸烟史、有无饮酒史、是否合并高血压、甘油三酯水平、总胆固醇水平、低密度脂蛋白胆固醇水平、高密度脂蛋白胆固醇水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);CyPA水平较高组合并2型糖尿病的占比高于CyPA水平较低组,差异有统计学意义(P<0.05)。合并2型糖尿病是冠心病患者CyPA水平的独立影响因素(P<0.05)。结论:多数冠心病患者血脂控制不佳,合并2型糖尿病是冠心病患者血清CyPA水平的独立影响因素,临床针对CyPA水平较高的冠心病患者,应重视检测其血糖水平。

三角帆蚌CypA基因的克隆及其在嗜水气单胞菌感染后的表达分析

为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742)。三角帆蚌CypA基因cDNA序列全长1237 bp,其5′非编码区(UTR)长度为57 bp,3′非编码区长度为688 bp,三角帆蚌CypA基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长度为492 bp,编码164个氨基酸,CypA蛋白质理论等电点为8.9,相对分子量为17.29 kD。在GenBank中进行同源序列检索,三角帆蚌CypA氨基酸序列与其他贝类CypA的相似性依次为池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)(99.39%)、青蛤(Cyclina sinensis)(77.44%)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)(78.05%)、近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)(78.66%)和大竹蛏(Solen grandis)(75.05%)。通过SWISS-MODEL预测三角帆蚌CypA含有8个β折叠和2个α螺旋,可能形成CypA的活性中心区域。利用MEGA 5.1软件将三角帆蚌CypA与其他物种CypA基因进行序列比对并构建系统进化树,分析发现三角帆蚌CypA与池蝶蚌的CypA聚为一支,其与池蝶蚌CypA具有最近的亲源关系。通过qRT-PCR检测CypA基因在三角帆蚌不同组织中表达,发现三角帆蚌性腺中CypA基因的表达量最高,肝脏、肾和鳃中的表达量次之。对三角帆蚌浸泡感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),CypA基因在肝脏、性腺、肠和鳃中的表达水平在感染72h先升高后降低,其表达量在性腺和鳃中6h最高,肝脏中12h达到峰值,肠中24h达到最高值,表明三角帆蚌感染嗜水气单胞菌后,可显著诱导CypA基因的表达。CypA基因在性腺中的表达量到达峰值的时间要早于肠与肝脏,且到达峰值时的相对表达量(14.91)也显著高于肝脏(9.89)、肠(9.78)和鳃(7.53),推测CypA在三角帆蚌性腺中具有防御细菌感染的重要作用,三角帆蚌性腺可能不仅具有生殖的功能,同时在免疫防御系统中也发挥着重要的作用。

脑梗死继发癫痫患者血清miR-146a、CyPA、NSE水平与认知功能的关系

目的分析脑梗死继发癫痫患者血清miR-146a、亲环素A(CyPA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平与认知功能的关系,以期为临床诊断治疗脑梗死继发癫痫提供参考依据。方法将2022年4月至2023年12月河南省直第三人民医院神经内科的200例脑梗死患者的临床资料进行回顾性分析,按照脑梗死是否继发癫痫分为未继发癫痫组(158例)、继发癫痫组(42例)。对比两组患者血清miR-146a、CyPA、NSE水平及认知功能,分析血清miR-146a、CyPA、NSE水平与认知功能的关系,以及影响脑梗死继发癫痫的危险因素。结果相较于未继发癫痫组,继发癫痫组患者血清miR-146a水平更低,CyPA、NSE水平更高(P<0.05);相较于未继发癫痫组,继发癫痫组患者蒙特利尔认知评估(MoCA)总分、语言功能、命名、视空间与执行能力、注意力、记忆力、定向力、抽象思维得分更低(P<0.05);继发癫痫组患者皮质梗死部位、心房颤动、存在心源性梗死、大面积梗死占比均高于未继发癫痫组(P<0.05);多因素数据中得出,miR-146a水平低、CyPA水平高、NSE水平高、皮质梗死部位、心源性梗死、大面积梗死是脑梗死继发癫痫患者的影响因素(P<0.05)。结论脑梗死继发癫痫患者会降低血清miR-146a水平,增加CyPA、NSE水平,损伤认知功能,此外miR-146a水平低、CyPA水平高、NSE水平高、皮质梗死部位、心源性梗死、大面积梗死是脑梗死继发癫痫患者的影响因素,临床可对有以上临床特征的患者进行密切关注,并开展实施针对性措施,以降低脑梗死继发癫痫发生风险,减轻认知功能损伤。

血清GADA、CypA、SIRT1在糖尿病肾病中的表达及早期诊断价值分析

目的:探究血清谷氨酸脱羧酶抗体(Glutamic acid decarboxylase,GADA)、亲环素A(Cyclophilin A,CypA)、Sirtuin-1(SIRT1)在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)中的表达及早期诊断价值。方法:选取2020年1月至2023年1月期间本院收治的81例DN为研究组,另选取同期81例糖尿病患者为对照组。将DN患者根据肾功能损伤程度进一步分为微量蛋白尿组、大量蛋白尿组、肾功能损伤组。比较两组及不同程度肾损伤患者入院时血清GADA、CypA、SIRT1水平及联合诊断价值。结果:研究组血清GADA、CypA水平高于对照组,SIRT1水平低于对照组(P<0.05);不同程度肾损伤患者血清GADA、CypA水平比较:微量蛋白尿组<大量蛋白尿组<肾功能损伤组,SIRT1水平比较:肾功能损伤组<大量蛋白尿组<微量蛋白尿组(P<0.05);入院时血清GADA、CypA、SIRT1水平联合检测糖尿病肾病的AUC为0.840,最佳敏感度、特异度为88.89%、80.25%。结论:血清GADA、CypA、SIRT1水平与DN病情发展密切相关,可作为早期诊断的辅助指标。

急性脑梗死患者血清中CyPA、Lp-PLA2含量与动脉粥样硬化、神经损伤的相关性

目的分析急性脑梗死患者血清中亲环素A(CyPA)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)含量与动脉粥样硬化、神经损伤的相关性。方法 2014年5月-2016年5月在郑州人民医院接受住院治疗的急性脑梗死患者49例作为观察组,同期在该院进行体检的健康人49例作为对照组。入院后即刻,检测两组患者的血清CyPA、Lp-PLA2、淀粉蛋白A(SAA)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及脑源性神经营养因子(BDNF)含量,采用数字彩色多普勒超声仪测定颈动脉内膜中层厚度(CIMT)和斑块最大面积,计算颈动脉斑块的Crouse积分。结果入院后即刻,观察组患者的血清CyPA、Lp-PLA2含量高于对照组(P<0.05);观察组患者的动脉粥样硬化指标CIMT、斑块最大面积、Crouse积分高于对照组(P<0.05);观察组患者的血清神经损伤指标SAA、NSE含量高于对照组,观察组患者的IGF-1、BDNF含量低于对照组(P<0.05);经Pearson检验发现,急性脑梗死患者的血清CyPA、Lp-PLA2含量与动脉粥样硬化、神经损伤指标呈直接相关关系。结论急性脑梗死患者血清CyPA、Lp-PLA2含量上升,与动脉粥样硬化、神经损伤等病情直接相关。

下调Cyclophilin A对喉鳞癌裸鼠移植瘤模型肿瘤生长和转移的影响

目的通过RNA干扰技术,研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)基因对喉鳞癌裸鼠移植瘤模型在肿瘤生长和肿瘤转移方面的影响。方法构建沉默CypA基因慢病毒颗粒,转染Hep2喉癌细胞,将15只裸鼠完全随机分为3组,分别为空白对照组、阴性对照组、基因沉默组,每组5只,建立喉鳞癌裸鼠移植瘤转移模型,观察肿瘤生长情况及淋巴结转移情况。PV二步法免疫组化检测CypA、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN、CD147)、细胞外基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肿瘤组织的表达,RT-PCR检测CypA、CD147、MMP-9 m RNA的表达水平,Western blot法检测CypA、CD147、MMP-9蛋白的表达水平。结果基因沉默组肿瘤体积较空白对照组、阴性对照组小,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化观察肿瘤为中分化鳞状细胞癌,CypA主要表达在细胞质,CD147主要表达在细胞膜,MMP-9主要表达在肿瘤间质;在m RNA水平和蛋白水平基因沉默组CypA、CD147、MMP-9的表达都明显降低(P<0.05)。结论下调CypA可以通过调节CD147、MMP-9的表达水平抑制喉癌的生长,延缓肿瘤转移。

脊椎动物Cyclophilin A肽基脯氨酰顺反异构酶活性及遗传变异分析

Cyclophilin A(简称CypA)由PPIA(Peptidylprolyl isomerase A)基因编码,是典型的Cyclophilin家族蛋白,具有肽基脯氨酰顺反异构酶活性,在蛋白质的折叠和转运、信号转导、炎症、免疫调节、细胞凋亡及病毒复制等生物学过程中发挥着重要作用。本研究重点探讨了不同脊椎动物CypA的肽基脯氨酰顺反异构酶活性及其遗传变异。根据Gen Bank数据库PPIA基因的序列信息,克隆了脊椎动物的PPIA基因并构建其原核表达载体,其中鼠耳蝠(Myotis davidi)和绿头鸭(Anas platyrhynchos)的PPIA基因序列为首次报道。利用大肠杆菌表达GST-Cyp A融合蛋白并进行亲和层析,切除GST标签后再进行分子筛层析,获得纯化的CypA蛋白。利用胰糜蛋白酶偶联法测定CypA的肽基脯氨酰顺反异构酶活性,发现12种脊椎动物CypA的肽基脯氨酰顺反异构酶活性无显著差异。同时,通过一系列遗传变异和分子进化分析,发现12种脊椎动物CypA的酶活位点、CsA结合位点等重要功能域的氨基酸序列完全一致,而且其结构和在染色体中的基因定位也非常保守。研究结果表明,脊椎动物CypA的关键功能域高度保守,这是CypA维持其酶活及生物学功能的有力保障。

日本血吸虫Sj CyclophilinA基因的克隆、表达及其生物学功能研究

【目的】克隆和表达了日本血吸虫CyclophilinA(Sj CyPA)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,PCR扩增一EST序列的基因全长cDNA,提交到NCBI,登录号为GQ403666。应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达。诱导、表达、纯化和复性重组蛋白,测定其PPIase活性。利用Western blot检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。【结果】PCR获得了Sj CyPA编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为519bp。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在13d童虫表达量最高,为童虫期高表达基因。构建了重组表达质粒pET28a(+)-Sj CyPA,并在大肠杆菌中成功表达。复性重组蛋白具有PPIase活性。Western blot试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得18.72%的减虫率和44.6%的肝脏减卵率。【结论】获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPA基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPA原核重组表达质粒,在大肠杆菌中成功表达,纯化复性得到有PPIase活性的Sj CyPA重组蛋白,并证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。

联合检测FeNO、血清sTREM-1、CyPA表达水平在评估COPD患者预后中的价值

目的探讨联合检测呼出气一氧化氮(FeNO)、血清可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、亲环素A(CyPA)表达水平在评估慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者预后中的价值。方法随机选择2017年1月-2018年12月在本院诊治的COPD稳定期患者80例,同时选择同时段在本院门诊体检的健康志愿者60例。对比两组研究对象的FeNO、sTREM-1、CyPA水平以及与肺功能、CAT评分之间的相关性。结果COPD组患者的sTREM-1、CyPA水平均显著高于健康组,FeNO水平较对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05);COPD组患者的IL-16、IL-18、TNF-α的水平显著高于健康组,差异有意义(P<0.05),不同级别GOLD分级患者的FeNO、sTREM-1、CyPA水平之间差异有意义(P<0.05),随着肺功能的下降,sTREM-1、CyPA水平逐渐升高,FeNO水平逐渐下降;随着GOLD分级的升高患者的CAT评分逐渐升高;sTREM-1、CyPA水平与COPD呈正相关,FeNO水平与COPD呈负相关(P<0.05),sTREM-1、CyPA水平与CAT呈正相关,FeNO水平与CAT呈负相关(P<0.05)。使用ROC曲线评价FeNO、sTREM-1、CyPA水平对COPD的诊断价值,结果表明FeNO、sTREM-1、CyPA单独检测的曲线下面积分别为0.794、0.765、0.753,三者联合检测的曲线下面积为0.902,诊断价值较高,敏感度、特异度分别为89.84%、71.54%。结论sTREM-1、CyPA水平与COPD的发生发展有较大关系,并且与病情严重程度呈相关性。FeNO值可用来评估COPD患者的气道损伤情况,并且可反映病情程度,三者联合检测可提高COPD的敏感度、特异度,对病情的评估有重要意义,在临床上可广泛使用。

普通小麦-簇毛麦6VS／6AL易位系cyclophilin基因的克隆与序列分析

利用RT-PCR的方法从普通小麦-簇毛麦6VS／6AL易位系克隆到1个cyp基因，命名为Ta-Hv-cyp。该基因全长为599bp，编码1条171个氨基酸残基的多肽，具有保守的功能位点W128和胞质型CyP蛋白特有的插入序列KSGKPLH48-54。BLAST分析表明，推导的Ta-Hv-CyP蛋白分别与小麦、水稻、玉米、拟南芥的胞质型CyP具有98％，88％，85％和80％的氨基酸序列一致性。构建的进化树显示，推导的Ta-Hv-CyP蛋白与单子叶植物胞质型CyPs的亲缘关系较近。

CyPA 及 CD147在动脉粥样硬化兔血管重构中的表达

目的探讨亲环素A(Cy PA)/CD147在动脉粥样硬化(AS)兔血管重构中的表达特点。方法新西兰雄性白兔32只(3月龄),随机分为对照组、模型组、液氮冻伤组、高脂饮食组(每组8只)。0周和13周分别检测兔血清CD147和Cy PA表达水平。术后13周处死动物,取血管石蜡包埋切片,行HE、弹力纤维染色,观察血管形态,并做巨噬细胞、Cy PA、CD147免疫组织化学染色。利用计算机图像分析系统观察动脉损伤后血管重构相关指标的变化。结果 13周时模型组、液氮冻伤组、高脂饮食组血Cy PA与CD147水平较同时期对照组均明显升高(P<0.05),尤以模型组为甚。除对照组,其余3组均可见内膜增生,模型组还可见典型AS斑块形成;斑块内及增生内膜均可见Cy PA及CD147的表达。模型组、液氮冻伤组、高脂饮食组最小管腔直径及管腔面积较对照组均明显减小(P<0.05),内膜面积、中膜面积、最大内膜厚度、管腔狭窄度较对照组明显增大(P<0.05)。结论 Cy PA与CD147在AS兔血管重构中的表达明显升高。

电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠小脑CypA相关蛋白表达的影响及其阻断效应研究

目的:观察针刺长强穴对脆性X精神发育迟缓1(FMR1)基因敲除(KO)小鼠小脑CypA-ERK1/2通路相关蛋白表达的影响,并探讨其作用机理。方法:选取FMR1基因缺失且日龄为28日的KO小鼠24只,通过聚合酶链式反应(PCR)鉴定小鼠基因表型,采用数字随机表法分为空白组、长强穴组、阻断剂+长强穴组和非经非穴组,每组6只。空白组仅给予抓取动作,其余组别采取针刺干预,Western blot手段检测小脑CypA、P-ERK1/2、ERK1/2相关蛋白的表达情况。结果:长强穴组CypA的表达明显高于非经非穴组和空白组(P<0.05);长强穴组和非经非穴组P-ERK1/2的表达明显高于空白组(P<0.05);长强穴组ERK1/2的表达明显高于非经非穴组和空白组(P<0.05);而上述效应能被ERK通路阻断剂PD98059所逆转,但阻断剂+长强穴组与长强穴组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺长强穴能促进FMR1基因敲除小鼠小脑区域CypA-ERK1/2通路相关蛋白的表达,其作用能被ERK通路阻断剂所阻断。

24 h动态心电图联合CyPA检测在高血压性心脏病诊断中的应用

目的:探讨24 h动态心电图联合亲环素A(CyPA)检测对高血压性心脏病(HHD)的诊断价值。方法:80例HHD患者设为HHD组,另选取同期年龄、性别相匹配且排除心脏损伤的80例高血压患者作为对照组,均行24 h动态心电图检查,并检测血清CyPA水平;比较两组动态心电图ST-T改变阳性率和血清CyPA水平,并应用受试者工作特征曲线(ROC)评价两种检查及其联合对HHD的诊断效能。结果:HHD组ST-T改变阳性率、CyPA水平、CyPA阳性率均高于对照组[83.54%vs.11.25%、(8.15±1.37 ng/L)vs.(10.49±2.06 ng/L)、80.00%vs.16.25%,P<0.05]。24 h动态心电图联合血清CyPA诊断HHD的敏感度为93.75%,特异度为87.50%,ROC曲线下面积(AUC)为0.906,诊断效能优于各单一检查。结论:24 h动态心电图、血清CyPA检测联合应用可提高对HHD诊断的敏感度。

环孢霉素A通过ROS-Cyclophilin A-ERK1/2信号途径抑制人脐静脉内皮细胞与中性粒细胞粘附

为研究环孢霉素 A(cyclosporin A,CsA)对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞(ECV-304)与中性粒细胞粘附的影响,本工作以缺氧/复氧诱导粘附为模型,采用β-N-乙酰氨基己糖苷酶比色法检测粘附率,流式细胞术检测ECV-304细胞表面粘附分子E-选择素(E-selectin)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达,Fenton反应测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,West-ern-blot法检测ECV-304细胞亲环素A(cyclophilin A,CyPA)、磷酸化及总细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的表达。结果发现,ECV-304细胞经缺氧/复氧处理后,ROS释放增多,E-selectin、ICAM-1的表达上调,其表面中性粒细胞的粘附增加,CsA能显著抑制缺氧/复氧的上述作用。缺氧/复氧后,CyPA蛋白表达明显上调,ERK1/2显著活化,细胞总ERK1/2蛋白表达无明显改变。CyPA抑制剂CsA以及CyPA反义寡核苷酸均明显减轻缺氧/复氧诱导的ERK1/2激活,显著减少ECV-304细胞与中性粒细胞粘附。ERK1/2信号通路特异性阻断剂PD98059亦显著抑制ECV-304细胞与中性粒细胞的粘附。上述结果提示,CsA抑制缺氧/复氧诱导的ECV-304细胞与中性粒细胞粘附,并可能通过抑制ROS-Cyclophilin A-ERK1/2的信号转导途径实现。