幽门螺杆菌cagA、vacA抗体与胃十二指肠疾病的相关性研究

目的 :探讨幽门螺杆菌 (Hp)毒力基因cagA、vacA抗体与胃十二指肠疾病之间的关系。方法 :采用免疫印迹法检测 440例胃十二指肠疾病患者血清中的cagA、vacA抗体。结果 :cagA、vacA抗体在 440例患者中的检出率分别为 73 %、37.0 %。在慢性胃炎 (CG)、十二指肠球部溃疡 (DU)、胃癌 (GC)患者中 ,cagA、vacA抗体的阳性率分别为 62 .9% ,76 .1 %、96 .9%与 33 .0 %、31 .0 %、62 .5 % ;经u检验显示 :慢性胃炎组与十二指肠球部溃疡组比较 ,无明显差异。胃癌组与慢性胃炎组、十二指肠球部溃疡组比较 ,有显著性差异。结论 :本文通过患者血清中Hp抗体 (cagA和vacA)的检测 ,推知其cagA和vacA抗体的表达状况 ,可为胃十二指肠疾病的诊断提供依据 。

Hp菌株cagA、picB基因与胃粘膜IL-8表达、消化性溃疡关系的初步研究

目的 :初步探讨Hp菌株cagA、picB基因表达与胃粘膜IL - 8分泌 ,消化性溃疡发病的关系。方法 :采用分离培养技术行Hp培养 ;PCR扩增技术检测cagA、picB基因表达 ,ELISA法检测胃窦部IL - 8表达水平。结果 :消化性溃疡患者胃窦部粘膜IL - 8表达水平显著高于慢性胃炎患者 (t=15 .5 2 ,P <0 .0 1) ;消化性溃疡患者中cagA+ / picB+ 菌株感染率显著高于慢性胃炎患者 (χ2 =9.99,P <0 .0 1) ;cagA+ / picB+ 菌株感染者胃窦粘膜IL - 8表达水平显著高于cagA-/ picB-菌株感染者 (t=5 .43,P <0 .0 1)。结论 :IL - 8在Hp相关性消化性溃疡中起重要作用 ;cagA+ / picB+

幽门螺杆菌CagA抗体与胃十二指肠疾病的相关性探讨

目的探讨本地区表达细胞毒素相关蛋白A(CagA)的幽门螺杆菌(HP)与胃十二指肠疾病的关系。方法将127例消化系统疾病患者分为四组。采用金标免疫斑点法检测各组患者血清中HP抗体,采用间接ELISA法测定各组CagA-IgG,并作组间的比较。结果慢性胃炎(CG),十二指肠溃疡(DU),胃溃疡(GU),胃癌(GC)患者及无症状组(AC)血清中HP抗体的检出率分别为74.2%,85.7%,81.5%,77.8%,61.6%,CagA-IgG的检出率分别为61.3%,66.7%,63.0%,70.4%,34.0%。经χ2检验显示,在DU与GU组,HP及CagA+HP感染率均明显高于AC组(P<0.05、P<0.01),而CG及GC组与AC组比较,HP感染率无显著性差异(P>0.05),而CagA+HP感染率仍有显著性差异(P<0.01)。各胃肠疾病组间的HP及CagA+HP感染率均无显著性差异(P>0.05)。结论在广州地区,仅DU与GU组的HP感染率高于AC组,而CagA+HP感染率在CG、DU、GU与GC组,均高于AC组,可见CagA-IgG的表达情况,可为胃十二指肠疾病的致病因素与诊疗、防治提供依据,但不能作为区分CagA+HP感染所致胃十二指肠疾病的单一指标。

HP-CagA基因型与胃十二指肠溃疡相关性的病例对照研究

探讨昆明地区胃十二指肠溃疡与HP -CagA感染的相互关系 .方法 :采用病例对照研究 ,病例组活动性十二指肠溃疡 (DU) 4 8例 ,胃溃疡 (GU) 4 8例 .对照 1组为同期住院的本科及其它科住院的非胃十二指肠疾病患者 48例 .对照 2组为同期普查的健康人群 48例 .血清HP -CagA -IgG抗体的检测采用斑点金免疫渗泸法 (DIGFA) .结果 :192例中 ,HP -CagA -IgG总的检测率为 5 0 5 2 % (97/ 192 ) ,其中DU组85 42 % (4 1/ 48) ,GU组 70 83 % (34/ 48) ,非消化系统疾病组 2 5 0 % (12 / 48) ,健康人组 2 0 83 % (10 /48) .Du组的HP -CagA -IgG阳性率显著高于两个对照组 (χ2 =2 0 10 3 ,P <0 0 0 0 1) ;GU组CagA -IgG阳性HP感染率显著高于两个对照组 (χ2 =13 92 1,P <0 0 0 1) .结论 :提示昆明地区CagA阳性的HP感染与DU和GU的发病密切相关 ;高毒株HP感染是溃疡形成的重要因素 .

细胞毒力因子CagA上调人胃黏膜上皮GES-1细胞TET2蛋白的表达

目的:探讨幽门螺旋杆菌细胞毒素相关基因A(cytotoxin associated gene A,CagA)与胃黏膜中TET2(ten-eleventranslocation 2)蛋白表达的关系,以及TET2在CagA致癌过程中可能的作用。方法:Real-time PCR检测人胃黏膜上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株MGC-803中TET2 mRNA的表达水平,细胞免疫染色法检测TET2蛋白的细胞定位及表达。将pEGFP-CagA通过脂质体介导转染GES-1细胞,用200μmol/L H2O2处理GES-1细胞建立氧化应激模型,流式细胞仪检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞周期的变化。结果:TET2 mRNA在GES-1细胞的表达水平低于胃癌MGC-803细胞(1.00±0.08 vs 1.68±0.07,P<0.05),TET2蛋白在GES-1细胞表达水平低于胃癌MGC-803细胞(8.09±3.57 vs14.60±2.31,P<0.05)。与阴性对照组pEGFP-N1相比,pEGFP-CagA转染组GES-1细胞中TET2 mRNA表达水平升高(1.00±0.04 vs 0.06±0.00,P<0.05),TET2蛋白表达水平也升高(16.45±4.40 vs 10.82±3.39,P<0.05),ROS积累水平升高(18.39±4.52 vs 15.31±4.40,P<0.05),细胞周期检测出现明显的凋亡峰。氧化应激(H2O2处理)模型中GES-1细胞与空白对照GES-1细胞相比,TET2 mRNA水平升高(1.44±0.02 vs 1.00±0.04,P<0.05),TET2蛋白表达水平增高(15.72±4.52vs 11.74±4.34,P<0.05)。结论:幽门螺旋杆菌毒力因子CagA可诱导GES-1细胞ROS增高和细胞周期的失衡,氧化应激可以诱导TET2表达上调,TET2可能参与CagA的致癌过程。

SH2域S、HP2 cDNA的克隆鉴定和在大肠杆菌中的表达及其与CagA的相互作用

目的研究SH2(Src同源体2)域和SHP2(含2个SH2域的蛋白酪氨酸磷酸酶)蛋白的基因克隆和表达。方法根据GeneBank中SH2和SHP2的基因序列设计引物,以PCR法扩增出SH2和SHP2基因,将其插入pQE30质粒中,转化进E.coli感受态细胞中,筛选阳性克隆并研究其表达。结果所克隆的目的基因片断经PCR法鉴定和序列分析证明正确。结论已成功地扩增SH2和SHP2基因并克隆到pQE30载体上,转化大肠杆菌菌株有表达,并探讨其与CagA(细胞毒性关联的基因A抗原)的相互作用及导致胃细胞癌变的原因。

产细胞毒素幽门螺杆菌IgG抗体EIA试剂盒的研制与初步应用

产细胞毒素幽门螺杆菌是消化道溃疡、胃癌等疾病的主要致病菌 ,临床可用血清学检测 HP- Cag A Ig G。本文用重组 Cag A蛋白抗原建立 EIA ,并研制成相应试剂盒。实验证实 ,本试剂盒与 Western Blot试剂盒检测 HP-Cag A Ig G的总符合率为 91.3%。并具有特异性强、精密度高、稳定性好及操作简便等优点。临床初步应用提示它有助于消化道疾病的早期诊治和预报。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白不同片段对胃癌细胞γH2AX表达的影响

目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白不同片段对胃癌细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达的影响。方法取前期分离的H.pylori东亚株GZ7及其CagA敲除株H.pylori GZ7ΔCagA感染的癌细胞株AGS,采用免疫荧光方法检测DNA双链断裂标志物γH2AX的表达;构建不同序列的CagA表达载体(载体a、b、c、d、e),转化大肠杆菌,提取质粒后测序鉴定,将鉴定后的载体转染AGS,采用免疫荧光方法检测γH2AX的表达,并通过流式细胞术检测细胞周期。结果成功鉴定了含不同片段的CagA载体;H.pylori GZ7感染的胃癌细胞AGS核内γH2AX的表达高于H.pylori GZ7ΔCagA感染的细胞(P<0.05);与NC组比较,不同序列CagA载体转染后胃癌细胞AGS中γH2AX表达均有增加(P<0.05或P<0.01),且载体b、c及d表达增加较明显(P<0.01);载体a和c转染后的胃癌细胞AGS的G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),载体b、c、d及e转染后胃癌细胞AGS的G2/M期比例明显升高(P<0.01)。结论CagA是H.pylori感染诱导胃癌细胞DNA双链断裂的重要因素,CagA中的EPYIA基序是这种DNA损伤的重要结构。

用噬菌体展示技术筛选幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因结合蛋白的研究

目的筛选幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)基因结合蛋白,探索CagA致病机理。方法应用噬菌体展示技术,以幽门螺杆菌CagA基因片段作为固相筛选分子,对噬菌体人胃细胞cDNA文库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"富集,噬斑裂解液PCR扩增后,进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索,确定编码结合蛋白的种类。结果噬菌体经富集后,筛选出36个阳性克隆,构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索,确定幽门螺杆菌CagA基因共编码核纤层蛋白B1和胰岛素样生长因子结合蛋白2两种已知蛋白。结论用噬菌体人胃cDNA文库筛选得到幽门螺杆菌CagA基因DNA结合蛋白,为研究CagA致病机理,幽门螺杆菌疫苗的研制和治疗等提供依据。

慢性萎缩性胃炎与幽门螺杆菌感染的关系

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是引起慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌的重要病因,几乎所有胃部 Hp 感染者均可引起不同程度胃部炎症改变,少数发展为慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG),甚至胃癌.关于 Hp 感染导致 CAG 的确切发病机制,目前仍不十分清楚.现就 CAG与 Hp 感染关系的研究现状作一综述.

具有细胞毒素相关蛋白和细胞空泡毒素的幽门螺杆菌与消化性溃疡的相关性研究

目的探讨能产生细胞毒素相关蛋白（ＣａｇＡ）与细胞空泡毒素（ＶａｃＡ）的幽门螺杆菌（ＨＰ）与消化性溃疡的关系。方法用免疫印迹法检测分析经尿素酶及组织学Ｇｉｅｍｓａ染色证实ＨＰ阳性的血清标本共１１２份，其中慢性胃炎６５份，消化性溃疡４７份。观察两种疾病中ＣａｇＡ与ＶａｃＡ阳性的ＨＰ检测结果。结果慢性胃炎组、消化性溃疡组的ＣａｇＡ与ＶａｃＡ阳性的ＨＰ感染率分别为３３．８５％和５９．５７％，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。

幽门螺旋杆菌空泡/细胞毒素的研究现状

幽门螺旋杆菌感染呈全球性分布，多数地区感染率约为５０％，但并非所有人发生慢性胃炎和消化性溃疡，这与该菌产生细胞毒素的能力有关。本文综述了幽门螺旋杆菌产生的空泡／细胞毒素（ＶａｃＡ）和细胞毒素相关蛋白（ＣａｇＡ）的性质及与临床的关系、ＣａｇＡ阳性菌株在中国人中的流行情况。根据ＶａｃＡ和ＣａｇＡ基因，及它们表达活性产物与否，可将该菌分为两大类型：Ⅰ型具有编码ＣａｇＡ的基因，表达ＣａｇＡ蛋白和空泡毒素，Ⅱ型没有编码ＣａｇＡ的基因，不表达ＣａｇＡ蛋白和空泡毒素，其中Ⅰ型菌株毒力和致病力强。

幽门螺杆菌菌型与消化性溃疡的相关性研究

目的探讨能产生细胞毒素相关蛋白(CagA)与细胞空泡毒素(VacA)的幽门螺杆菌(HP)与消化性溃疡的关系。方法用免疫印迹法检测分析经尿素酶及组织学Giemsa染色证实HP阳性的血清标本共117份,其中慢性胃炎68份,消化性溃疡49份。观察两种疾病中CagA与VacA阳性的HP检测结果。结果慢性胃炎组、消化性溃疡组的CagA与VacA阳性的HP感染率分别为35.29%(24/68)和61.12%(30/49),差异有显著性(P<0.01)。结论具有CagA与VacA的HP的菌株与消化性溃疡发病密切相关。

基于CCD的胶体金免疫层析检测设备的设计

研制开发了一套用于细胞毒素相关基因A定量检测的胶体金免疫层析试纸条检测设备。该设备由硬件部分和软件系统两部分组成。硬件系统主要用于胶体金免疫层析试纸条图像的采集,而软件系统则实现了人机的交互。检测设备利用CCD(电荷耦合器件)图像传感器件采集试纸条图像,并传输至PC模块。然后,软件系统利用算法对其进行数据分析和结果诊断。软件系统主要采用了基于HSI色彩空间的移动k-均值图像分割算法,该算法实现了胶体金免疫层析试纸条图像的有效分割,完成了定量检测。本研究用10个不同浓度的胶体金免疫层析试纸条进行检测,绘制出定量曲线。还分别检测了50个阴性和50个阳性的细胞毒素相关基因A实验样品,检测结果显示特异性和灵敏度均为100%,证明了该设备的可靠性。