食蟹猴疟原虫 (Plasmodium cynomolgi)中一个真核翻译起始因子4A(eIF-4A)同源蛋白的cDNA克隆、表达和ATP酶活性测定(英文)

真核翻译起始因子 4A(eukaryoticinitiationfactor 4A ,eIF 4A)是DEAD盒蛋白家族的ATP依赖性的RNA解旋酶类中的一个原型成员 .它在真核细胞的蛋白质合成的起始过程中起着关键性作用 .通过PCR扩增和放射探针杂交相结合的方法筛选食蟹猴疟原虫 (Plasmodiumcynomolgi)的cDNA文库 ,克隆了一个eIF 4A同源蛋白的完整cDNA序列 ,命名为CH1F .CH1F全长 1 75 3bp ,包含一个1 1 97bp的完整阅读框 ,推测编码一个由 398个氨基酸组成的蛋白 .对CH1F的蛋白序列用BlastP进行搜索和分析 ,提示它应该是DEAD盒家族的一个eIF 4A同源蛋白 ;用DNAStar将其与许多典型的DEAD盒蛋白序列进行比对分析 ,结果显示 :比起其它的DEAD盒蛋白 ,它与eIF 4A或eIF 4A的同源蛋白具有更高的同源性和更多序列上的相似结构域 .将包含完整阅读框的片段亚克隆进表达载体pET 2 8a (+) ,在大肠杆菌DH5α中表达 ,产生的融合蛋白大小在 4 5kD左右 .对该融合蛋白进行纯化、重新折叠和初步鉴定 .ATP酶活性检测显示 ,该融合蛋白只有很低的ATP酶活性 ,而且它的ATP酶活性似乎不依赖于核酸底物 .对这一检测结果给出 3种可能的原因 .这一检测结果与根据序列分析得到的推论———CH1F蛋白可能是一个eIF

以恒河猴为模型的DNA疫苗的免疫保护作用研究

研究了以霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）为载体的重组疟疾多价抗原（ＡＷＴＥ）表位的ＤＮＡ疫 苗在恒河猴中的免疫原性及对相应疟原虫感染的免疫保护作用。结果表明：ＤＮＡ疫苗组免疫 ２次后即产生了较高水平的细胞免疫和体液免疫，免疫后９１天用 １．２５ ×１０８个食蟹疟原虫攻 击，对照组５只动物在攻击后１４天左右全部感染，感染持续３４天以上；ＤＮＡ疫苗组的５只动 物一直到攻击后６０天，没有感染。另外，还检测了免疫后不同时间各组的免疫应答水平，与对 照组相比，ＤＮＡ疫苗组免疫２次后即产生了较高水平的细胞免疫和体液免疫。从实验结果来 看，首先说明了选择的这种鸡尾酒式的抗原表位组合构建的ＤＮＡ疫苗具有很好的免疫原性， 同时也说明了ＤＮＡ疫苗在抗疟感染中起着举足轻重的作用。

阿奇霉素治疗间日型猴疟效果的研究

目的探讨阿奇霉素对疟原虫的杀灭作用及对疟原虫复燃的影响。方法健康和免疫缺陷的恒河猴(体重5 kg)各1只,血传感染食蟹猴疟原虫,待血液中疟原虫密度分别到达2 266.67个/μl和3 796.08个/μl时,每只猴每天口服阿奇霉素500 mg,健康猴和免疫缺陷猴分别连续服药12和19 d。每天采血镜检观察。结果健康猴感染后11 d,免疫缺陷猴感染后17 d血中疟原虫消失。两只猴连续7个月血检疟原虫均为阴性。结论单服阿奇霉素对间日型猴疟原虫具有直接杀灭作用,提示对间日型猴疟有较好的近期和远期疗效。

食蟹猴疟原虫和恶性疟原虫两种抗原检测不同疟区人群中间接荧光抗体的实用性

[目的 ]比较食蟹猴疟原虫 (P c.)和恶性疟原虫 (P f.)两种抗原在不同疟区人群疟疾抗体检测的实用性。 [方法 ]1997年 5～ 10月在海南省间日疟和恶性疟混合流行区及河南省单纯间日疟区用P c 和P f 两种抗原测试人群疟疾抗体。 [结果 ]在海南省间日疟和恶性疟混合流行区P c 和P f 两种抗原检测人群疟疾间接荧光抗体阳性率分别为 37 4%和 31 3% ,其阳性符合率为 83 9% ;河南省单纯间日疟流行区的P f和P c两种抗原阳性率分别为 2 3 0 %和 9 7% ,阳性GMRT分别为 42 9%和 2 9 3%。 [结论 ]间日疟和恶性疟混合流行区P f和P c两种抗原均可用于人群疟疾抗体的检测 ,而单纯间日疟地区则以P c 抗原为优。

感染食蟹猴疟原虫的大劣按蚊血淋巴和胃水解物氨基酸分析

大劣按蚊感染食蟹猴疟原虫B株后第10d,血淋巴内的蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、鸟氨酸、赖氨酸含量均较对照组低。第9d蚊胃水解物分析结果表明,感染蚊胃中的多数氨基酸含量增加,其中缬氨酸、蛋氨酸、酪氨酸的含量是对照组3倍以上,氨基酸的总量比对照组高70％以上。

食蟹猴疟原虫B株配子体对大劣按纹感染性的活力周期

用食蟹猴疟原虫Ｂ株早期环状体接种１只恒河猴，接种后第２－１２天（血内仅存在１群原虫）测试了由第１－４代裂殖子形成的４代配子体（Ｇ）对大劣按蚊（海南株）感染性的活力周期。结果表明第１－４代裂殖子均形成了一定数量的Ｇ，由裂殖子发育到Ｇ功能成熟（可使蚊感染）各代有差异，第２代Ｇ至少需５５±１ｈ，第３代Ｇ则需６５±１ｈ；发育至７２±４ｈ时活力最旺，Ｇ寿命长者可达１００ｈ；生活期（对蚊有感染力的时间）第１、２代Ｇ约为１２－４２ｈ，第３代Ｇ约为１０－１９ｈ。Ｇ密度与蚊胃卵囊均数不成正比，第１、２代Ｇ对蚊的感染性比第３。

食蟹猴疟原虫B株配子体对中老龄大劣按蚊的感染性

用中老龄（羽化后８．７５—１４．７５和２４．７５日龄）大劣按蚊（海南株）与其４．７５日龄蚊（对照）同时在感染Ｂ株猴疟的同一供血猴上血餐，饱血蚊饲养至第６—８ｄ解剖检查蚊胃、第１２ｄ检查涎腺。结果表明中老龄蚊胃感染率（８５—１００％）与对照（７７—１００％）无显著性差异，涎腺感染率中龄蚊（８３—１００％）与对照（７５—１００％）无显著性差异，胃与涎腺感染率比值中龄蚊（０．９２—１．０）与对照（０．９３—１．０）均很高，中老龄蚊的卵囊均数（７．３—１１５．０）为对照（５．４—８３）的１．Ｏ３—１．５８倍。结果提示Ｂ株猴疟配子体对中老龄大劣按蚊的感染性未下降。感染后的半数存活时间（ＬＴ５０），中龄蚊（１１—１５）比对照（１３—１８）少２—３ｄ。

PCR检测食蟹猴疟原虫的实验研究

目的 建立一种特异、敏感、简捷的PCR检测食蟹猴疟原虫（P.C）的方法。方法 检测样品来自人工接种感染P.C的阳性猴血膜及滤纸血斑。根据P.C SSUrRNA基因序列,设计P.C特异引物Pc1和Pc3,用PCR常规操作对P.C DNA模板扩增。同时用多对间日疟原虫（P.V）特异引物对照比较。结果 从 P.C血样中扩增出 425bp特定扩增带,而P.V红内期和子孢子、恶性疟原虫、伯氏疟原虫、人基因组DNA和健康猴血均未见扩增带;敏感度可检测 1.68 ×10-6的原虫感染水平。同时发现P.C对多对 P.V特异引物均出现阳性扩增带,以往一直未被注意。结论 该方法检测 P.C特异、敏感和简捷,提供了鉴别 P.V与 P.C的准确诊断。建议在 PCR的P.V引物设计和特异性的检测过程,把应用P.C DNA检测列为常规对照,以提高检测质量。

建立疟疾近期复发动物模型的研究Ⅳ.食蟹猴疟原虫子孢子感染恒河猴的近期复发

按照实验设计，用食蟹猴疟原虫子孢子感染恒河，待原虫血症出现，然后用咯萘啶６ｍｇ／ｋｇ、蒿甲醚１０ｍｇ／ｋｇ和氯喹２０ｍｇ／ｋｇ联合治疗３ｄ，清除红内期原虫，观察１００ｄ内的近期复发情况。如复发则再给予联合治疗。接种子孢子５０个的猴Ｍ１９２和５５×１０＾２个的猴Ｍ１９３无近期复发，而接种子孢子１１×１０＾３个的猴Ｍ１９４于治疗后４７ｄ复发１次。

食蟹猴疟原虫酸性磷酸酶电镜细胞化学研究

利用电镜细胞化学方法对食蟹猴疟原虫红内期酸性磷酸酶进行定位研究．结果发现．酸性磷酸酶广泛定位于疟原虫的食物泡、内质网、核糖体和疟色素上；而一些内含物与红细胞相似的双层膜结构内无ACP活性，不属于食物泡，而是宿主细胞的伪足伸入虫体；并认为ACP是由核糖体转运至食物泡内的；外周胞饮作用和胞口援食可能都是疟原虫红内期的营养方式．而外周胞饮作用可以起主要作用．

猴疟B株感染后猴抗体水平与虫血症对蚊媒感染情况的观察

用食蟹猴疟原虫Ｂ株子孢子感染的３只恒河猴，虫现前期分别是８、１０和１１ｄ，虫血症高峰时间在１４～２５ｄ，３只猴均有两个以上高峰，原虫密度波动于０．０３％～５９．６％。初次抗疟原虫抗体反应於感染后１３～１７ｄ测得，抗体高峰在感染后１６～２０ｄ（１：８０～１：３２０）．在虫血症显著期供４６批大劣按蚊血餐，获得好的感染蚊（Ｍ＞５）３０批，平均为１０批，好的感染蚊批的血餐时间分布在抗体滴度高峰期前为２３．３３％（７／３０），高峰期为３３．３３％（１０／３０），高峰期后为４３．３３％（１３／３０）．抗疟原虫抗体在初次测得后，随着红内期原虫密度的增加，抗体滴度短时间内很快上升，达到高峰后持续一段时间再缓慢下降。同时观察到在原虫血症高峰前，常出现一次较好的感染蚊批；抗体滴度高峰之前期间获感染好的蚊批率最低４６．６７％（７／１５），而高峰之后滴度仍维持较高时期获感染好的蚊批率最高１００％（１３／１３）。

食蟹猴疟原虫B株子孢子感染后的虫血症及按蚊血餐感染情况

用食蟹猴疟原虫Ｂ株子孢子感染的６只恒河猴，初发期虫血症自然消长曲线２只猴为双峰形、４只猴为多峰形。虫血症显著期（原虫密度≥２‰）最短者为１３ｄ，最长者为３７ｄ。在虫血症显著期供１１３批（１批／日）蚊（大劣按蚊或斯氏按蚊）血餐，获得感染好的蚊虫（卵囊均数＝５－３２７．７，胃感染率＝６５－１００％）５８批、平均为９．７批。感染好的蚊批分布：双峰形的初峰期为１４．２９％（２／１４），次峰期为８５．７１％（１２／１４）；多峰形的初峰、次１和次２峰期分别为２２．７３％（１０／４４）、４５．５％（２０／４４）和３１．８２％（１４／４４）。结果提示对蚊感染性较强的血餐时间主要分布在次１和次２峰期。

三吡萘啶在动物模型上的长效预防抗疟作用

本文报告了用 4.5倍ED_(50) 剂量的三吡萘啶游离碱喂饲小鼠,给药后 20 d再用伯氏疟原虫 ANKA 株原虫1×10~7个攻击,小鼠全部获得保护。三吡萘啶磷酸盐对鼠疟的滞效作用虽较其游离碱及哌喹磷酸盐稍好,但进行猴疟实验喂药时易引起恒河猴呕吐,难于准确计算给药量。三吡萘啶羟萘酸盐对鼠疟的滞效抗疟作用则不如其磷酸盐,也不如其游离碱。三吡萘啶游离碱总剂量为200 mg/kg,对食蟹猴疟原虫B株确有 20 d的滞效抗疟作用,但总剂量降至 100 mg/kg 时,其滞效作用即明显下降。总之,三吡萘啶游离碱对猴疟的长效抗疟作用似较哌喹稍逊。

食蟹猴疟原虫和猪尾猴疟原虫红外期的研究

本文以具"复发"特性的食蟹猴疟原虫巴氏亚种(Plasmodium cynomolgi bastianellii)子孢子人工感染4只猕猴(Macaca mulatta)和无"复发"特性的猪尾猴疟原虫(P.inui)子孢子人工感染3只猕猴。氯胍处理感染了猪尾猴疟原虫的2只猕猴,在肝切片中发现发育受阻裂殖体,及首次虫血症推迟出现,二者有直接的关系。4只感染食蟹猴疟原虫的猕猴经1.5～5个月的观察及肝活检证明:疟疾的复发的确与休眠体有关,并且这种"复发"的时间和次数受猕猴个体差异的影响。本文论述了休眠体的成因及其与长潜伏期的关系,认为休眠体的成因和休眠体在宿主体内的进一步发育与宿主、虫株及外界因素有关。

青蒿琥酯对食蟹猴疟原虫在按蚊体内发育的影响

目的 观察青蒿琥酯(Artesunate)对食蟹猴疟原虫在大劣按蚊体内发育的影响。方法 受疟原虫感染实验猴在肌注和静注青蒿琥酯各60mg之前、之后Oh、2h各感染一批大劣按蚊;另取部分药前感染的大劣按蚊在感染后第3天和10.5天吸药血,另设一对照组吸正常猴血。各组实验蚊均在感染后第9天解剖蚊胃和第13天解剖涎腺,观察疟原虫在蚊体内发育情况。结果药前组和药后Oh组的蚊胃及唾腺感染阳性率均为100％,两组蚊胃卵囊平均密度、卵囊平均大小、子孢子平均感染度都无显著性差异(P>0.5);药前组和药后2h组蚊胃卵囊平均密度有显著性差异(P<0.5);大劣按蚊感染后第3天和10.5天吸药血组和吸正常血组,蚊胃卵囊平均密度、卵囊大小、子孢子平均感染度都无显著性差异(P>0.1,P>0.5)。结论青蒿琥酯对食蟹猴疟原虫在蚊体内的配子生殖、孢子增殖及子孢子进入唾腺无直接的抑制作用。

食蟹猴疟原虫实验感染恒河猴后原虫密度消长的观察

目的 探讨食蟹猴疟原虫感染恒河猴后原虫密度消长和抗体滴度变化及相互关系。 方法 食蟹猴疟原虫实验感染恒河猴后 ,在 7年多的时间内 ,定期进行病原学检测和疟疾荧光抗体检测 ,记录分析原虫密度消长和抗体滴度变化等数据。 结果 实验恒河猴接种食蟹猴疟原虫后 ,最早 3d可检出原虫 ,12～ 19d可达到原虫血症高峰期 ,2 483d(时间最长者 )时还可检出原虫 ;荧光抗体试验显示感染第 8d时可检出阳性 ( 1∶ 2 0 ) ,15 8～ 181d达到高峰滴度 ( 1∶ 6 40～ 1∶ 2 5 6 0 ) ,持续 6 0～ 85 d后抗体滴度逐渐下降 ,到实验结束时各猴抗体滴度还保持在 1∶ 40～ 1∶ 16 0。 结论 食蟹猴疟原虫是一种比较理想的实验虫种 ,用它在疟疾研究和抗疟工作中适时的替代间日疟原虫能获得较好的效果。

食蟹猴疟原虫B株配子体对不同龄斯氏按蚊的感染性

实验结果表明，食蟹猴疟原虫Ｂ株配子体对不同龄斯氏按蚊的感染性存在着差异，随着蚊龄的增长，感染度下降，尤其在不佳感染时间血餐者，这种差异更为明显。因此，在疟疾实验研究中，以选用３～８日龄斯氏按蚊为佳。

食蟹猴疟原虫子孢子多态性研究

采用猴1－蚊－猴。循环感染的方法，对疟原虫子孢子多态性学说进行验证．结果发现．接种了食蟹猴疟原虫速发型虫体子孢子的名只猕猴，在接种后第8天全部出现速发．除一只死之外其余猴也全部出现复发；接种了食蟹猴疟原虫迟发到虫体于孢子的2只猕猴也都出现速发和复发．因此．用子孢子多态性学说很难解释食蟹猴疟原虫的复发．食蟹猴疟原虫不具有两种类型的子孢子．

青蒿琥酯经皮肤吸收治疗猴疟的疗效

青蒿琥酯为高效、速效、低毒的抗疟新药,但近期复燃率较高。为了提高疗效,方便使用,乃研究其经皮肤吸收制剂。青蒿琥酯经皮肤吸收对鼠疟的疗效,在小鼠及兔体内的药代动力学研究已取得较好的结果,现报告对猴疟的疗效。

三种抗凝法取血对食蟹猴疟原虫B株配子体活力的影响

本文报告用三种抗凝法取血，观察Ｂ株猴疟配子体的活力。结果表明，去纤维蛋白抗凝法对该疟配子体的活力影响较小，其次为肝素抗凝法，而枸橼酸钠抗凝法的影响最大。