锁阳多糖CSP-D1的分离纯化与表征

以植物锁阳(cynomorium songaricum rupr.)为材料,对其中水溶性多糖进行分离纯化、表征。锁阳粉末经过热水浸提、乙醇沉淀方法得到锁阳粗多糖。经过木瓜蛋白酶,Sevag法脱蛋白,H2O2法脱色,DEAE-纤维素离子交换柱层析,冷冻干燥,分离得到锁阳多糖CSP-D1组分,并用红外光谱(IR),热重-差热法(TG-DTA)进行了表征。咔唑法测定其糖醛酸含量为27.9%,凝胶渗透色谱法(GPC)测得分子量为5.5×104。经完全酸水解,衍生化,结合气相色谱-质谱法(GC-MS)测定了其单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖;百分含量分别为:3.70%、15.15%、13.58%、44.26%、23.30%。研究表明CSP-D1是锁阳中新发现的一种多糖。

两种不同产地锁阳多糖组分的结构解析及体外抗氧化活性对比研究

研究两种不同产地锁阳多糖的组成及初级结构,并探讨体外抗氧化活性。利用水提醇沉法提取粗多糖,采用红外分光光度法、离子色谱法、高效凝胶色谱法等对样品进行初级结构解析、单糖组成及分子量的测定;并测定其体外抗氧化活性。结果显示,苏尼特粗多糖中总糖含量(49.65%)比阿拉善粗多糖中总糖含量(35.44%)略高。苏尼特右旗锁阳TCA法脱蛋白多糖及阿拉善锁阳TCA法脱蛋白多糖的重均分子量分别为56.131、50.696kDa,两种脱蛋白多糖中单糖组成没有明显区别。在一定浓度范围之内均有一定的体外抗氧化活性,并呈质量浓度依赖关系。研究发现,苏尼特右旗产锁阳中多糖含量比阿拉善产锁阳高,分子量、单糖组成及抗氧化活性等方面没有明显差异。本研究可为锁阳及其它类似药材中多糖的提取、纯化及药理活性研究提供参考。

超声波辅助提取锁阳多糖的工艺研究

为了提高锁阳多糖的提取率,采用超声波辅助乙醇法提取锁阳多糖。在单因素试验基础上,设计以料液比、乙醇浓度、超声时间、超声功率为四因素三水平的正交试验。结果表明,影响提取率的先后顺序为料液比>超声时间>乙醇浓度>超声功率;最佳提取条件为料液比1∶10(m∶V),乙醇浓度80%,超声时间1.5h,超声功率800 W,经多次实验验证锁阳多糖含量可达45.07%。

超声波—生物酶法提取锁阳多糖工艺优化及其抗肿瘤活性

为了获得较高的锁阳多糖得率,以河西锁阳为原料,采用超声波协同生物酶技术进行锁阳多糖提取工艺及活性的研究,选用单因素试验探索料液比、超声时间、超声功率及纤维素酶加酶量、酶解时间、酶解温度、pH值对锁阳多糖得率的影响,在单因素试验的基础上,采用正交试验对工艺条件进行优化,并采用四甲基噻唑蓝(methlthiazoletrazolium,MTT)法评价锁阳多糖对HeLa细胞的抗肿瘤活性。结果表明,锁阳多糖超声波—纤维素酶法提取最佳工艺为:料液比1∶10(g/mL)、超声功率300 W、酶解温度60℃、超声时间10 min、加酶量1.8%、酶解时间90 min、pH 5.5。最优条件下锁阳多糖得率达3.01%。MTT实验结果表明,提取多糖对HeLa细胞具有明显的抗肿瘤活性。

锁阳多糖提取工艺的研究

以浸膏得率和浸膏中多糖质量分数综合评价,利用L9(34)正交实验从水提和醇沉两方面优选锁阳中水溶性多糖最佳提取工艺条件,为锁阳活性多糖的开发提供科学依据和实验基础。最佳水提工艺条件为:m(锁阳):v(水)=1:12,回流提取0.5 h,提取2次;最佳醇沉工艺条件为:在m(生药):v(水提液)=1 g:2 mL溶液中加入乙醇,使φ(乙醇)=70%,静置6 h。

锁阳多糖超声提取工艺及含量测定研究

目的:筛选优化得到锁阳多糖最佳超声提取工艺,研究锁阳多糖含量测定方法,测定比较锁阳样品中多糖含量情况。方法:以多糖得率为考察指标,苯酚-硫酸法为含量测定方法,采用单因素和(L9(34))正交实验考察锁阳多糖超声提取工艺,并在含量测定方法学研究的基础上测定比较各样品多糖含量。结果:锁阳多糖超声提取最佳工艺为:超声功率420W,料液比1∶35,提取温度80℃,超声提取时间60min,提取2次。在此条件下,锁阳多糖平均得率可达4.51%(n=5,RSD=1.98%)。瓜州锁阳多糖含量明显较新疆和内蒙高,且瓜州三九锁阳多糖含量最高。结论:实验得到的超声提取工艺能明显提高锁阳多糖得率,实验采用的含量测定方法快速、简便,结果可靠,研究结果可为锁阳资源的合理开发及其产品的质量控制提供科学的参考依据。

甘肃河西沙区锁阳多糖提取工艺优化及含量测定

采用水提醇沉法,利用L9(33)正交试验优选锁阳多糖的提取工艺,用硫酸苯酚比色法对甘肃河西沙区不同地区锁阳中多糖含量进行测定。结果表明:提取最佳工艺条件为料液比1:15(g/mL)、提取时间90min、提取次数为2次;甘肃河西沙区不同地区锁阳多糖含量差别显著。锁阳多糖可作为控制锁阳质量的一项指标性成分。

锁阳多糖对运动训练大鼠抗氧化水平与运动能力的影响

探讨锁阳多糖对运动训练大鼠不同组织抗氧化水平与运动能力的影响,为锁阳多糖在运动医学中的应用提供实验依据。以SD雄性大鼠40只,体重180～220 g,随机分为安静对照组(n=8)、运动训练组(n=16)、运动锁阳多糖组(n=16)。在最后一次训练后,运动训练组和运动锁阳多糖组各有8只大鼠进行力竭运动,测定其运动至力竭的时间。8周后取材,测定不同组织与抗氧化水平相关的SOD(superoxide dismutase,超氧化物歧化酶)、CAT(catalase,过氧化氢酶)活性与MDA(malondialdehyde,丙二醛)含量以及跑台运动至力竭时间等指标。结果显示,锁阳多糖可以提高运动训练大鼠不同组织SOD和CAT活性,降低MDA含量,延长大鼠跑台运动至力竭时间,具有抗疲劳作用。

锁阳多糖对去卵巢大鼠骨质疏松的改善作用

目的观察锁阳多糖对去卵巢大鼠骨质疏松的作用并探讨其机制。方法雌性SD大鼠分为假手术组、造模组。术后2个月造模组分为模型组、阳性对照组、锁阳多糖治疗组,每组10只。治疗组灌胃给予锁阳多糖(20、40、80 mg/kg),阳性药组灌胃给予尼尔雌醇(1.5 mg/kg),每日1次,连续给药12周。ELISA法检测血清雌二醇(E2)、骨钙素(BGP)、降钙素(CT)及尿液脱氧吡啶啉(DPD)的含量,双能X线骨密度检测仪检测腰椎及股骨的骨矿物密度(BMD),三点弯曲法测定胫骨生物力学,Western blot检测大鼠股骨组织中骨保护素(OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白的表达。结果摘除卵巢后模型组大鼠血清中E2、CT显著下降(P<0.05,P<0.01),血清BGP及尿液DPD含量则显著升高(P<0.01),中、高剂量锁阳多糖及尼尔雌醇能够显著升高血清E2、CT含量(P<0.05),降低血清BGP及尿液DPD含量(P<0.01);锁阳多糖及尼尔雌醇能够逆转去卵巢大鼠腰椎和股骨BMD的降低(P<0.01),改善胫骨生物学特性中的最大载荷及最大应力降低的趋势(P<0.05,P<0.01),并能增强OPG蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低RANKL蛋白表达(P<0.01),升高OPG/RANKL比值(P<0.01)。结论锁阳多糖有明显抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用,其机制可能与其调节E2,CT、BGP和DPD水平,激活OPG/RANK/RANKL信号系统有关。

锁阳中粗多酚和粗多糖抗氧化活性的比较

目的:比较锁阳粗多酚和粗多糖的抗氧化活性,为锁阳入药提供依据。方法:100g锁阳粉末提取粗多酚和粗多糖。采用超声波辅助乙醇法提取粗多酚,依次用石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯和正丁醇进行萃取。同时用水提醇沉法提取粗多糖。用DPPH·法和ABTS+法进行锁阳粗多酚和粗多糖的抗氧化活性检测。结果:多酚粗提物中的总酚含量达到了922.9mgGAE·g-1(没食子酸当量),而多糖粗提物中的多糖含量为366.6mg·g-1(葡萄糖当量)。DPPH·法检测锁阳粗多酚和粗多糖的IC50值分别为79.3μg·mL-1和145.6μg·mL-1。经ABTS+法检测,二者的TEAC值分别为2.12mmol·g-1和0.69mmol·g-1。结论:锁阳粗多酚的抗氧化活性远高于锁阳粗多糖。

锁阳多糖对实验性急性胃溃疡大鼠模型的影响

目的研究锁阳多糖对急性胃溃疡大鼠模型的影响。方法采用水浸束缚应激、幽门结扎致胃溃疡两种模型,观察锁阳多糖对大鼠急性胃溃疡的预防作用。结果与模型组比较,锁阳多糖高、中剂量组能抑制水浸应激性大鼠胃溃疡的形成,溃疡抑制率分别为37.7%、26.2%(P<0.01);同时锁阳多糖高、中、低剂量组能降低幽门结扎型大鼠胃溃疡指数,溃疡抑制率分别为42.0%、23.3%、16.3%(P<0.05,P<0.01)。结论锁阳多糖具有抗急性胃溃疡作用,其机制与改善胃黏膜的微循环,增强胃黏膜防御能力有关。

傅里叶红外光谱法在锁阳多糖提取工艺优化中的应用

优化提取工艺流程和参数通常是在单因素试验基础上,按照正交试验或响应面法设计实验方案,工作量大。将红外光谱技术应用到提取工艺单因素试验过程中,对锁阳多糖和锁阳药渣进行了研究,以期探讨一种快速辅助优化提取工艺的新方法。结果显示,锁阳多糖第1次提取液中含有油脂、蛋白等成分,不合并;提取3次后锁阳药渣中可提取多糖类成分已基本提取完全;酶用量1.5%时酶解作用充分,提取制备的锁阳多糖品质好。傅里叶红外光谱法可以快速辅助确定提取次数和酶用量的最佳水平,为下一步方案设计简化了影响因素,也为简化工艺流程提供了依据。

超声辅助提取锁阳多糖的工艺优化

以多糖得率为指标,采用正交试验考察超声提取时间、提取温度、料液质量比、超声波功率4个因素对超声提取锁阳多糖的影响,筛选超声辅助提取锁阳多糖的最佳工艺.结果表明:超声辅助提取锁阳多糖的最佳工艺条件为提取温度90℃,液料质量比12∶1,超声功率200W,提取2次,每次提取30min,在该条件下锁阳多糖得率为25.41mg/g.

不同方法提取的锁阳多糖光谱分析

以锁阳为原料,分别采用酶解法、热水法、超声法、冷水法和碱提法五种方法制备锁阳多糖,研究不同提取方法对锁阳多糖得率、多糖含量、蛋白含量的区别,并利用红外光谱、二阶导数红外光谱结合紫外光谱对五种锁阳多糖进行对比分析。结果表明:酶解法制备的多糖得率最高,达21.45%;红外光谱中均有糖类复合物官能团的特征吸收峰;冷水法制备的多糖与药材成份相似度最高;二阶导数红外光谱中出现1 157,1 080,1 023,995cm-1等表征锁阳多糖的特征吸收峰,可对锁阳多糖结构分析、活性研究及产品的开发和应用提供基础。

锁阳多糖对H_2O_2诱导非洲绿猴肾上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的研究锁阳多糖对过氧化氢(H2O2)诱导非洲绿猴肾上皮(Verda Reno,简称VERO)细胞损伤的保护作用。方法建立H2O2致VERO细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;通过荧光光度法检测caspase-3活性;利用荧光探针DCFH-DA对荧光染色的胞内活性氧(ROS)检测其荧光强度;化学比色法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以及细胞培养液中丙二醛(MDA)水平。结果锁阳多糖能明显改善H2O2诱导的VERO细胞的氧化损伤,与模型组相比,锁阳多糖组可使细胞存活率升高,细胞内的ROS的积累量显著降低(P<0.01),caspase-3活性下降(P<0.05),同时细胞内的SOD和GSH-Px活性明显增加(P<0.01),细胞培养液中的MDA水平明显降低(P<0.01)。结论锁阳多糖能对H2O2诱导的VERO细胞的氧化损伤保护提示其具有潜在的防治肾脏相关疾病的作用。

ABTS法和DPPH法测定锁阳多糖抗氧化活性的适用性

以开发锁阳多糖工业化生产工艺过程中的锁阳多糖粗提物为原料,比较了ABTS法和DPPH法进行抗氧化活性检测的适用性,结合化学成分分析和红外光谱法表征,结果表明:DPPH法易被锁阳多糖粗提物中蛋白、多酚及其复合物等成分影响,测定结果不准确;而ABTS法不受杂质成分干扰,实验结果更可靠,可作为锁阳多糖粗提物体外抗氧化活性检测方法之一;且锁阳多糖粗提物比纯化锁阳多糖具有更强的抗氧化能力,可为抗氧化剂产品开发提供原料。

锁阳多糖对乙酸损伤性胃溃疡模型的影响

目的:研究锁阳多糖抗胃溃疡的作用及其机制。方法:采用乙酸烧灼法建立大鼠胃溃疡模型,给予锁阳多糖进行治疗12天后检测大鼠溃疡指数及血清中超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;测定血清前列腺素E2(PGE2)、表皮生长因子(EGF)、血小板活化因子(PAF)的含量。结果:锁阳多糖能促进溃疡的愈合,使血清中SOD活性升高、MDA含量下降,能显著升高血清中PGE2、EGF水平,降低血清中PAF水平,与模型组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:锁阳多糖具有抗溃疡作用,其机制可能与抗氧自由基损伤、降低PAF和提高PGE2、EGF水平有关。

红外光谱结合有效成分分析在锁阳多糖提取分离中的应用

利用红外光谱技术结合有效成分含量测定方法对提取分离过程中的锁阳多糖进行了研究,以期探讨一种快速简便分析含量变化的新方法。红外光谱图显示光谱变化主要在1 800~800cm^(-1),对此波段进行二阶导数处理,确定用吸光度比A_(1 026)/A_(3 404)考察多糖相对含量变化,与苯酚-硫酸法测定的多糖含量进行对比分析。结果显示,不同工艺过程中多糖含量有明显变化,吸光度比法可快速判断多糖含量的变化情况,与苯酚-硫酸法测定的多糖含量结果一致,在优化工艺过程参数时提供方向性参考。红外光谱结合含量测定,可为下一步制定药效成分的提取分离方案提供定性定量分析依据。

锁阳多糖通过激活PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化

目的从MC3T3-E1小鼠前成骨细胞中PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的角度,揭示锁阳多糖(cynomorium songaricum polysaccharide,CSP)的促成骨分化机制。方法使用含有不同浓度CSP的成骨诱导液培养MC3T3-E1细胞,在第1、3、5、7天采用MTT法检测细胞活力。随后分为Con组(0μg/m LCSP)、CSP组(100μg/m L CSP)及CSP+BEZ组(100μg/m L CSP及50μmol/L BEZ(PI3K特异性抑制剂));干预14 d后采用茜素红染色观察比较MC3T3-E1的成骨分化情况、Real-time PCR定量分析相关成骨分化m RNA,如Runt相关转录因子2(Runx2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨钙素(Osteocalcin)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的表达水平;并使用Western blot法检测Runx2、CollagenⅠ、Osteocalcin成骨相关蛋白;PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin通路蛋白的表达情况,以及免疫荧光检测β-catenin的核易位情况。结果与Con组(0μg/m L)相比,CSP干预均可有效促进MC3T3-E1增殖,100μg/m L的效果更加明显。与Con组比较,CSP可有效促进MC3T3-E1细胞茜素红染色的阳性率,以及成骨相关的m RNA、蛋白表达水平(P<0.05),以及PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达(P<0.05),同时还可促进β-catenin入核;但是这些促进作用均可被BEZ逆转。结论CSP可能通过激活PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin通路,诱导MC3T3-E1细胞成骨分化。

锁阳肉质茎不同部位有效成分的含量差异研究

目的分析锁阳肉质茎不同部位儿茶素、熊果酸、多糖和鞣质含量的差异,以期为锁阳合理用药及人工优质栽培提供理论依据。方法根据锁阳生物学特征将肉质茎分为花序部、花茎接合部、茎上段、茎中段和茎下段5部分。用HPLC法测定儿茶素和熊果酸,硫酸-苯酚法测定多糖,络合滴定法测定鞣质的含量。结果锁阳肉质茎各段儿茶素、熊果酸和多糖的分布规律相似,3种成分的含量均以茎部较高,花序部较低,而鞣质含量的分布规律与此相反。结论锁阳肉质茎不同部位有效成分的累积和分布规律不同,应用锁阳时应根据用药目的合理选择入药部位。