南京地区人群CYP2E1基因多态性及吸烟、饮酒与前列腺癌易感性

目的:探讨Ⅰ相代谢酶细胞色素P450 2E1(CYP2E1)基因RsaⅠ和PstⅠ位点多态性及吸烟、饮酒习惯与前列腺癌(PCa)发病风险的关系,并探讨基因与生活习惯在PCa发病中的联合作用。方法:采用PCR-RFLP技术检测109例原发性PCa患者及202例年龄匹配的男性非肿瘤患者外周血CYP2E1基因RsaⅠ和PstⅠ多态位点的基因型。结果:深吸烟(OR=2.29,95%CI:1.28～4.09)、重度吸烟史(OR=1.81,95%CI:1.02～3.22)等生活习惯为PCa易感因素。CYP2E1 C1/C1基因型与PCa易感性有显著相关(OR=1.71,95%CI:1.04～2.82),且与饮酒的联合作用明显与PCa易感性相关(OR=2.21,95%CI:1.06～4.59)。重度吸烟人群中,携带CYP2E1易感基因型(C1/C1)与不吸烟且携带非易感基因型(C1/C2或C2/C2)个体相比PCa的发病风险显著增高(OR=2.80,95%CI:1.20～6.56)。结论:携带CYP2E1易感基因型(C1/C1)并有烟酒嗜好者PCa的发病风险显著增高,且与烟草的暴露呈显著剂量反应关系。

新生儿基因CYP2E15′端RsaⅠ和PON2311位点多态性与早产的关系

探讨新生儿基因细胞色素P4 5 0 2E1(CYP2E1) 5′端RsaⅠ多态性和对氧磷酶 2 (二乙基对硝基苯磷酸酯酶 2 )基因 311位点 (PON2 311)多态性对早产的影响。采用横断面调查方法 ,使用统一的调查表 ,由安庆市各县医院对入院分娩孕妇及其单胎、活产、早产和对照新生儿进行调查 ,共得到有效样本 194个母亲 -新生儿对。单因素分析结果显示 :CYP2E1野生纯合子基因型 (cut/cut)与突变纯合子基因型 (uncut/uncut) /杂合子基因型 (cut/uncut)比较 ,对早产的影响不具有统计学意义。而PON2Ser311Ser纯合子基因型与Cys311Cys纯合子基因型 /Cys311Ser杂合子基因型比较 ,对早产的影响具有显著的统计学意义。进一步分析CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性和PON2 311位点多态性是否存在交互作用 ,结果显示 :CYP2E1野生纯合子基因型和PON2Ser311Ser纯合子基因型这一组合与参照组比较 ,对早产的影响具有显著的统计学意义。基因CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性与新生儿早产不相关 ,但基因PON2 311位点多态性与新生儿早产相关 ,且CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性和PON2 311位点多态性之间对早产的影响存在交互作用。

抗结核药物性肝损害与CYP2E1和GSTM1基因多态性的相关性研究

目的:分析抗结核药物性肝损害(ADIH)与细胞色素P450酶(CYP)2E1和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)M1基因多态性的相关性,并探讨其易感因素。方法:选择我院2011年10月-2015年6月收治的我国南方汉族肺结核住院患者91例,根据治疗过程中是否出现ADIH将其分为ADIH组(34例)和无ADIH组(57例);抽取患者外周静脉血,分别采用聚合酶链式反应(PCR)和多重PCR法检测其CYP2E1和GSTM1基因多态性,采用Logistic回归分析考察ADIH的易感因素。结果:所有患者CYP2E1基因型均为c2/c2型(100%);GSTM1基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。ADIH组GSTM1(+/-)基因型患者有9例(26.5%),GSTM1(-/-)基因型患者有25例(73.5%),差异有统计学意义(P<0.05);无ADIH组GSTM1(+/-)基因型患者有17例(29.8%),GSTM1(-/-)基因型患者有40例(70.2%),差异有统计学意义(P<0.05);但GSTM1(+/-)和(-/-)基因型在两组患者中的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,患者性别、年龄、体质量指数和GSTM1基因型与ADIH均无相关性(P>0.05)。结论:患者性别、年龄、体质量指数和GSTM1基因型可能与ADIH无关。由于仅检出1种CYP2E1基因型,尚无法判断其多态性与ADIH的相关性。

CYP2E1基因多态性和DNA损伤修复酶表达对肺癌易感性的影响

[目的 ]研究CYP2E1基因型与不同肺组织中切除修复鼠缺陷交叉互补基因 2蛋白 (ERCC2 )、尿嘧啶DNA糖基化酶 (UDG)、细胞增殖核抗原 (PCNA)的表达水平的关系 ,探讨CYP2E1基因多态性对DNA稳定性和肺癌易感性的影响。 [方法 ]通过免疫组织化学和原位杂交方法研究 3种生物标志物在不同肺组织中蛋白质和mRNA的表达水平 ,同时采用PCR -RFLP方法进行CYP2E1分型。 [结果 ]在 3种CYP2E1基因型 (ww、mw、mm)中 ,ww和mm基因型对ERCC2的表达有明显影响 ,mw基因型对UDG的表达有明显影响 ,3种基因型均与PCNA的表达有关。交互分析结果显示CYP2E1多态性与UDG的表达存在交互作用。 [结论 ]不同个体CYP2E1遗传多态性与DNA切除修复功能有关 ,并存在CYP2E1与UDG的交互作用 ,两者在肺癌易感性中均具有一定的作用。

新生儿CYP2E1基因5′端RsaⅠ位点多态性和PON2基因148位点多态性与早产的关系

为探讨新生儿细胞色素P4 5 0 2E1(CYP2E1)基因多态性和对氧磷酶 2 (二乙基对硝基苯磷酸酯酶 2 )基因(PON2 ) 14 8位点多态性对早产的影响 ,采用横断面调查方法 ,使用统一的调查表 ,由安庆市各县医院对入院分娩孕妇及其单胎、活产、早产和对照新生儿进行调查 ,共得到有效样本 2 0 9个母亲 新生儿对。单因素分析结果显示 :CYP2E1野生纯合子基因型 ( + + )与突变纯合子基因型 ( - - ) 杂合子基因型 ( + - )比较 ,对早产的影响不具有统计学意义。而PON2Ala14 8Ala纯合子基因型与Gly14 8Gly纯合子基因型 Ala14 8Gly杂合子基因型比较 ,对早产的影响具有显著的统计学意义。进一步分析CYP2E1基因 5′端RsaⅠ位点多态性和PON2基因 14 8位点多态性是否存在交互作用 ,结果显示 :CYP2E1野生纯合子基因型和PON2Ala14 8Ala纯合子基因型这一组合与参照组比较 ,对早产的影响有显著的统计学意义。基因CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性与新生儿早产不相关 ,但基因PON2 14 8位点多态性与新生儿早产相关 ,且CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性和PON2 14

CYP2E1基因多态性与肺癌遗传易感性的关系

目的研究CYP2E1基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性。方法应用PCR-RFLP技术检测150例中国四川汉族肺癌患者和152例健康人的CYP2E1基因RsaⅠ／PstⅠ和DraⅠ多态性的分布频率，并分析了这两种基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性，以及与吸烟在肺癌易感性中的交互作用。结果①CYP2E1基因RsaⅠ／PstⅠ和DraⅠ多态基因型分布频率在2组间比较无显著性差异（分别为Х^2=3．186，P=0．203和Х^2=1．756，P=0．416）；②按照吸烟因素分层，携带c1／c1基因型的不吸烟个体较携带突变基因型的个体肺癌风险显著增加（OR=2．453，95％CI=1．140～5．276，P=0.022）；③与携带至少1个突变c2基因型的个体比较，携带c1／c1基因型的个体患肺腺癌的风险显著增加（OR=2．440，95％CI=1．235～4．820，P=0．01）；④没有发现DraⅠ多态性与肺癌风险之间的相关性。结论①CYP2E1的c1／c1基因型为中国四川汉族人群肺癌易感基因型；②RsaⅠ／PstⅠ多态性与中国四川汉族人群患肺腺癌的风险显著相关；③DraⅠ多态性与中国四川汉族人群肺癌风险无相关性。

CYP2E1遗传型与饮酒习惯对广西肝癌易感性的影响

目的:研究细胞色素P450 2E1(CYP2E1)基因多态性与饮酒因素交互作用在广西原发性肝细胞癌(肝癌)发生中的作用。方法:对广西壮族自治区300例肝癌和292例正常对照进行流行病学调查研究,并用PCR-RFLP方法检测CYP2E1基因型。结果:病例组和对照组中变异基因CYP2E1者分别占32.3%和32.9%(P>0.05)。饮酒频度每周≥3次(高频饮酒)且携带野生基因和变异基因CYP2E1者发生肝癌的危险度分别是饮酒频度每周<3次(低频饮酒)且携带野生基因型者的1.299倍和1.803倍。结论:单一易感基因CYP2E1变异基因型与肝癌易感性无关;频繁饮酒可能提高CYP2E1变异基因型携带者患肝癌的危险性。提示对于CYP2E1变异基因型携带者,高频饮酒是一个重要的危险因子。

稳定高表达CYP2E1基因肝癌HepG2细胞系的构建

目的构建稳定高表达CYP2E1基因的肝癌HepG2细胞系。方法通过NCBI查询CYP2E1的编码序列,设计并构建表达质粒p LV(Exp)-Puro-CMVm-CYP2E1,用载体对应的慢病毒包装质粒(p MDLg/pRRE、pRSVREV和p MD2.G)共同转染293T细胞。利用携带CYP2E1基因的慢病毒(Lenti-CYP2E1-e GFP-Puro)感染HepG2细胞系,采用嘌呤霉素抗性筛选方法构建高表达CYP2E1肝癌HepG2细胞系。增强绿色荧光蛋白检测转染情况,荧光定量PCR及Western blotting检测HepG2、空载及转染CYP2E1基因的HepG2细胞系中CYP2E1 mRNA和蛋白。结果 HepG2细胞系均成功转染CYP2E1基因。HepG2、空载及转染CYP2E1基因的HepG2细胞系中CYP2E1mRNA相对表达量分别为1.02±0.06、1.06±0.05、7.42±0.07,蛋白相对表达量分别为0.26±0.02、0.29±0.01、1.61±0.08,转染CYP2E1基因的HepG2细胞系与前两者比较,P均<0.05。结论通过慢病毒转染成功构建了稳定高表达CYP2E1基因的肝癌HepG2细胞系。

醉酒人群CYP2E1基因多态性研究

目的:通过对醉酒人群的CYP2E1基因的检测,获得该基因遗传多态性数据,及其在醉酒人群中的分布。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测CYP2E1基因在154例醉酒样本的等位基因、基因型、基因频率。结果:CYP2E1基因在154例醉酒样本中共检出两种等位基因:等位基因c1和c2,观察到3种基因型c1/c1、c1/c2和c2/c2,基因型频率分别是68.8%、29.2%和1.9%。结论:对醉酒人群的CYP2E1基因的检测实验结果与本课题组先前的研究结果(酒依赖和健康对照组CYP2E1基因多态性)做统计分析。统计结果提示:醉酒人群的CYP2E1基因分布和酒依赖组没有差别,而与健康人群的CYP2E1基因分布存在差异,并且差异有统计学意义(P<0.05)。本研究用饮酒量分组与基因型分组,做统计分析,结果没有统计学意义。

气虚体质及CYP2E1基因多态性与抗结核药物性肝损伤的关系

目的:归纳总结抗结核药物性肝损伤患者常见中医体质,阐明其中气虚体质与CYP2E1基因多态性的内在关联,及其在药物性肝损伤中的防治作用。方法:入选病例填写中医体质辨识量表进行中医体质类型分类,运用多聚酶链反应技术(PCR法)检测CYP2E1基因多态性,分析抗结核药物性肝损伤患者临床常见体质,比较其中气虚体质患者基因频率的差异。结果:肝损伤组患者气虚体质分布频率明显高于对照组(P<0.05),由于9种类型中医体质在肝损伤组及对照组患者中均有体现,影响不同体质患者样本量分布,气虚体质样本量少,与CYP 2E1基因型分布频率的关联及其差异不能进行有意义的比较。结论:气虚体质与抗结核药物性肝损伤密切相关,对指导结核病的个体化治疗,预防肝损伤有重要意义。

CYP2E1基因在2型糖尿病大鼠肝脏的表达

[目的 ]运用基因芯片技术 ,比较正常大鼠和糖尿病大鼠肝脏中细胞色素p45 0 2E1(CYP2E1)基因表达的差异。[方法 ]对雄大鼠腹腔注射链脲佐菌素 (STZ) ,并予以高脂饮食制造 2型糖尿病模型 ;从其肝脏抽提总RNA ,进行反转录 ,并用Cy3 dUTP和Cy5 dUTP分别对正常组与实验组探针进行荧光标记 ,探针与基因表达谱芯片杂交 ,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。 [结果 ]糖尿病组与对照组的肝脏相比 ,Cy5 /Cy3比值为 10 0 82 ,有统计学意义 ,CYP2E1mRNA表达升高。[结论 ]

细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展

细胞色素P450CYP2E1酶参与代谢活化及失活多种前毒物、前致癌物和少数药物。在细胞色素P450超家族中,CYP2E1具有易介导自由基生成引发氧化应激反应的特征。CYP2E1表达水平可能是机体对环境和工业毒物或致癌物敏感程度的重要因素。研究表明,CYP2E1可被多种内、外源性物质所调控,并且CYP2E1的药理和毒理学功能与其以蛋白构型为基础的代谢行为密切相关。本文综述了CYP2E1基因多态性、酶构型特征与其代谢活性间的关系,并分析了其区别于其他细胞色素P450亚型的表达调控机制。

黄药子与当归配伍对大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响

目的:观察单用黄药子和黄药子配伍当归后对大鼠肝CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定大鼠肝CYP1A2、CYP2E1基因mRNA在给药后的变化。结果:黄药子组明显诱导CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达,黄药子配伍当归后mRNA表达受到抑制。结论:黄药子诱导P450酶系CYP1A2和CYP2E1mRNA的表达,导致肝中毒。当归配伍黄药子后抑制mRNA表达拮抗肝中毒。

CD44和CYP2E1基因多态性与食管癌的相关性研究

背景与目的:食管癌是一种常见的恶性肿瘤,由于侵袭转移,手术后存活率低,而CD44和CYP2E1就是和侵袭转移相关的基因,因此我们研究了CD44和CYP2E1基因多态性与食管癌的关系。方法:应用PCR及Western blot技术等方法对45例食管癌患者癌组织及癌旁组织进行CD44表达分析和CYP2E1基因多态性分析。结果:癌组织中CD44蛋白呈高表达,明显高于癌旁组织,差异具有显著性(P<O.01)。CYP2E1三种基因型中,C1C1、C1C2基因型的表达明显高于C2C2,差异具有显著性(P<O.05)。结论:食管癌组织中CD44和CYP2E1多态性改变与食管癌的易感性关系较密切。

Tet调控CYP2E1基因表达细胞系的代谢能力分析

应用Tet-On基因表达系统,调控CYP2E1基因在NIH3T3细胞中的表达水平,探讨CYP2E1在化学致癌物二甲基亚硝胺(N-nitrosodimethylamine,NDMA)代谢中的作用.先后将Tet-on基因表达系统的调控质粒pRevTet-on和反应质粒pRevTRE-2E1转染NIH3T3细胞,分别用G418和潮霉素筛选,并通过RT-PCR和Western印迹检测,成功获得了3个具有良好诱导性Tet调控的CYP2E1基因表达细胞系(Tet/3T3-2E1).应用不同浓度强力霉素(doxycycline,Dox)处理Tet/3T3-2E1细胞诱导CYP2E1表达,HPLC分析细胞对CYP2E1特异性药物探针氯唑沙腙的原位代谢能力及MTT法分析CYP2E1介导的NDMA细胞毒性作用.结果显示,Tet/3T3-2E1细胞CYP2E1的表达及其代谢能力有明显的Dox浓度依赖性,而且NDMA对Dox诱导组细胞有明显浓度依赖性细胞毒性作用,其IC50值为12.06μmol/L,无Dox诱导组未见明显的NDMA细胞毒性作用.该细胞模型的成功建立对于开展与CYP2E1相关的毒物、致癌物代谢研究,筛选抗毒物、抗癌物等具有重要价值.

利用CRISPR/Cas9技术构建CYP2E1基因敲除的HEK293FT细胞系

目的:利用CRISPR/Cas9系统在HEK293FT细胞系中敲除CYP2E1基因并探讨其在检测化学物毒性中的应用。方法:设计3对分别靶向CYP2E1基因第2、第3和第7外显子的sg RNA序列并构建PX461表达载体;将携带靶向CYP2E1的sg RNA表达载体转染至HEK293FT细胞中,通过SURVEYOR检测分析sg RNA的切割效率;利用有限稀释法获得CYP2E1敲除细胞株,通过实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测细胞株中CYP2E1的敲除效果;并检测其对N-(4-羟基苯基)乙酰胺和1,2-二氯乙烷的细胞毒性效应的影响。结果:SURVEYOR检测分析靶向CYP2E1基因第3外显子的sg RNA的切割效率为23%;成功构建了2株CYP2E1基因敲除的细胞株,实时荧光定量PCR结果显示CYP2E1 m RNA表达下降,蛋白印迹结果显示CYP2E1蛋白无表达;CYP2E1基因敲除会显著降低N-(4-羟基苯基)乙酰胺和1,2-二氯乙烷的细胞毒性。结论:通过CRISPR/Cas9构建出CYP2E1稳定敲除的肾细胞系,为研究CYP2E1的功能和作用机制提供了有效的工具。

青海地区藏族人群CYP2E1基因多态性与肝癌易感性

目的探讨青海地区藏族人群CYP2E1基因多态性和环境因素的交互作用,以及与原发性肝癌的关系。方法病例对照研究。将青海地区藏族原发性肝癌患者(病例组)、同期健康藏族志愿者(对照组),应用PCR、DHPLC法检测两组人群CYP2E1基因多态性位点。以非条件logistic同归模型分析比较CYP2E1基因型在两组分布频率的差异,以及基因多态性和环境因素的交互作用。结果青海地区藏族人群中CYP2E1基因5'-端位点3种基因型c1/c1、c1/c2、c2/c2在病例组和对照组中分布频率分别为84.2%、15.8%、0.0%和86.6%、13.4%、0.0%,两组差异无统计学意义(P>0.05);携带野生纯合子c1/c1基因型个体罹患PHC的风险是c1/c2基因型的5.33倍(95%CI:0.413～15.517),但差异无统计学意义(P>0.05);经logistic逐步回归分析结果显示,吸烟OR 3.808(95%CI:1.742～8.321);家族肝炎病史OR14.195(95%CI:4.304～46.809);家族肝癌史OR5.851(95%CI:1.972～17.360)。结论 CYP2E1基因与青海地区藏族肝癌发生可能无密切关系;藏族人群CYP2E1基因多态性与吸烟、直系亲属肝癌家族史、直系亲属肝炎病史在肝细胞癌发生中存在交互作用,能增加罹患原发性肝癌的风险。

Cyp2e1基因在肝硬化和阻塞性黄疸肝组织中的表达

为比较 cyp2 e1基因在肝硬化和阻塞性黄疸及正常肝组织中的表达差异 ,并探讨其麻醉药理学意义 ,取肝炎后肝硬化、阻塞性黄疸肝组织及正常肝组织 (来自肝血管瘤患者 )标本 ,一步法抽提肝组织总 RNA,随机引物标记法制备 cyp2 e1c D-NA探针 ,Northern印迹法检测 cyp2 e1基因在以上 3种肝组织中的表达。结果发现阻塞性黄疸患者肝组织中 cyp2 e1基因表达量仅为正常肝组织的 2 1% ,而肝炎后肝硬化该基因表达量是正常肝的 98%。结果表明阻塞性黄疸肝组织 cyp2 e1基因表达显著降低 ,可能导致其功能蛋白 CYP2 E1同工酶含量减少 ;

CYP2E1基因过表达细胞株的建立及鉴定

目的:应用分子克隆技术,构建CYP2E1基因过表达载体,转染L02肝细胞,建立CYP2E1过表达细胞株并进行鉴定,为深入研究环境和职业毒物的毒作用机制提供模型细胞。方法:根据GenBank提供的CYP2E1基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒过表达载体pLVX-acGFP1-C1中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到转染CYP2E1基因的L02细胞,通过基因测序、荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。结果:测序证明重组慢病毒过表达载体CYP2E1基因序列与GenBank提供的CYP2E1序列一致,荧光定量PCR检测转染CYP2E1基因的L02细胞比正常肝细胞CYP2E1 mRNA表达提高273倍,Western blot实验显示转染CYP2E1基因的L02细胞CYP2E1蛋白表达水平比正常肝细胞提高3.2倍。结论:成功构建了CYP2E1基因过表达细胞株,可应用于环境毒物和职业毒物的分子机制研究。

CYP2E1基因rs3813867位点多态性与客家人群胃癌遗传易感性的研究

目的:探讨细胞色素P450(CYP2E1)基因单核苷酸位点rs3813867多态性与客家人群胃癌遗传易感性的相关性。方法:分别对梅州客家人群中52名健康体检者(对照组)和51例胃癌病人(胃癌组)的CYP2E1基因rs3813867位点进行基因分型及等位基因检测,评价该位点与胃癌易感性的关系。结果:CYP2E1基因rs3813867位点在梅州地区客家人群中存在GG、GC、CC多态性,在胃癌组和对照组中基因型分布频率分别为62.75%、33.33%、3.92%和59.62%、34.61%、5.77%,等位基因G、C分布频率分别为79.41%、20.59%和76.92%、23.08%,2组差异均无统计学意义(P>0.05),2组人群性别和年龄<60岁者各基因型分布差异均无统计学意义(P>0.05),而2组人群年龄≥60者各基因型分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CYP2E1基因单核苷酸rs3813867位点与客家人群胃癌的易感性无明显关系。