Comparative Study on the Antioxidant Activity of Peptides from Pearl Oyster(Pinctada martensii) Mantle Type V Collagen and Tilapia(Oreochromis niloticus) Scale Type Ⅰ Collagen

In this study, Pearl oyster mantle type V collagen(POMC) and tilapia scale type I collagen(TSC) were extracted and hydrolyzed by various proteases in order to obtain peptides. The antioxidant activity of the peptides was investigated by DPPH, hydroxyl radical scavenging experiments and a dynamic digestion model in vitro. The results show that there are significant differences in amino acid composition between POMC and TSC. The collagen peptides obtained from pearl oyster mantle(POMCP) by treating with alkaline protease exhibited higher antioxidant activity than that from tilapia scale(TSCP) treated with papaya protease, and both of them showed greater DPPH and hydroxyl radical scavenging activity than other peptides. After being separated via Sephadex G-25 chromatography, the M1 fraction isolated from POMCP, and the S1 fraction from TSCP with which both had higher molecular weights showed the strongest antioxidant activity than other fractions, and the M1 fraction exhibited stronger antioxidant activity than the S1 fraction in scavenging free-radicals and protecting cells from the oxidation damage. Furthermore, after treating the dynamic digestion system model in vitro, the DPPH and hydroxyl radical scavenging activity of the M1 fraction increased slightly. These results suggest that POMCP exhibits stronger antioxidant activity than TSCP, which means that PMOP may be a good candidate to be a potential natural antioxidant in the food-processing industry.

Antioxidant and anti-HepG2 cell activities of a novel bioactive peptide from cowhide collagen in vitro

In the present study,the antioxidant and anti-human liver cancer(HepG2)cells effects of bioactive peptides from cowhide collagen(BPCC)were evaluated.BPCC exhibited significant scavenging effect on l,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)radicals((60.09±3.51)%),2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)(ABTS)radicals((77.40±3.10)%)and hydroxyl radicals((56.00±2.30)%)as well as strong reducing power(0.320士0.025).Meanwhile,BPCC effectively protected biomacromolecules including proteins,lipids and DNA from oxidative damage induced by Cu^(2+)H_(2)O_(2)and 2,2'-azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride(AAPH).Moreover,BPCC significantly inhibited cell viability of HepG2 cells in a dose-dependent manner with an estimated IC_(50)of 7.61 mg/mL.The results of 4',6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)and acridine:orange/ethidium bromide(AO/EB)staining demonstrated the apoptotic morphological changes and cell mediated death in BPCC treated HepG2 cells.In addition,BPCC induced decrease of mitochondrial membrane potential(MMP)in HepG2 cells.Therefore,the present finding proved that BPCC encompasses significant antioxidant activity and anticancer property on HepG2 cells and can be used as alternative food antioxidants for cancer prevention benefits.

The Antioxidant Effects of Complexes of Tilapia Fish Skin Collagen and Different Marine Oligosaccharides

An excess of reactive oxygen species（ROS）leads to a variety of chronic health problems.As potent antioxidants,marine bioactive extracts containing oligosaccharides and peptides have been extensively studied.Recently,there is a growing interest in protein-polysaccharide complexes because of their potential uses in pharmaceutical and food industries.However,only few studies are available on the antioxidant activities of such complexes,in terms of their ROS scavenging capability.In this study,we combined and superoxide radicals,and to evaluate the influences on the activities of superoxide dismutase（SOD）,glutathione peroxidase（GSH-Px）and the level of malondialdehyde（MDA）in UV-induced photoaging models.The results indicated that the antioxidant activities of all the complexes were stronger than those of their individual components.Among the 11 complexes tested,two complexes,namely MA1000＋CP and κ-ca3000＋CP,turned out to be highly effective antioxidants.Although the detailed mechanisms of this improved scavenging ability are not fully understood,this work provides insights into the design of highly efficient peptide-oligosaccharide complexes for potential applications in pharmaceutical,cosmetics and food industries.

沙丁鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备及其抗氧化活性研究

目的优化沙丁鱼(Sardinapilchardus)鱼鳞胶原蛋白肽的制备工艺和评价不同分子量大小胶原蛋白肽的抗氧化活性。方法以沙丁鱼鱼鳞为原料,通过酶工程结合单因素与响应面实验优化胶原蛋白肽制备工艺,采用超滤膜分级分离鱼鳞胶原蛋白肽,并通过体外自由基化学体系分析对比不同分子量大小(10、5、1 kDa)的胶原蛋白肽的抗氧化活性。结果采用碱性蛋白酶进行酶解鱼鳞,胶原蛋白肽的得率最高;最优酶解工艺参数为:碱性蛋白酶加酶量7526 U/g、料液比1:20(g/mL)、pH 10.5、酶解温度67℃、酶解时间4 h,此条件下鱼鳞胶原蛋白肽得率最高,达43.44%±1.59%。通过超滤获得的分子量小于1k Da的鱼鳞胶原蛋白肽对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基(hydroxyl radical,·OH)的清除能力最强,其半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为0.72 mg/mL和1.76 mg/mL;分子量为1~5 kDa的鱼鳞胶原蛋白肽对超氧阴离子自由基(superoxide radical,O^(2-)·)的清除效果最好,其IC50为1.45 mg/mL。结论碱性蛋白酶能够有效制备鱼鳞胶原蛋白肽,且小于1 kDa的鱼鳞胶原蛋白肽抗氧化活性最好。

大西洋鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性及稳定性研究

该研究以大西洋鳕鱼骨胶原蛋白肽为研究对象,通过测定其自由基清除能力和还原力系统评价大西洋鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性,并考察温度、酸碱度、模拟胃肠道消化等因素对其稳定性的影响。结果表明,大西洋鳕鱼骨胶原蛋白肽具有良好的自由基清除能力和显著的还原能力,其清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基和ABTS阳离子自由基的IC_(50)值分别为33.48、9.68、6.86、17.78 mg/mL,其还原力呈浓度依赖效应。大西洋鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性在温度25~100℃条件下较为稳定;在pH 6.0~8.0条件下可保持较高抗氧化活性,但在强酸或强碱条件下抗氧化活性显著下降(P<0.05);经体外模拟胃肠道消化后仍能保持原有抗氧化活性的80.26%以上。综合分析,大西洋鳕鱼骨胶原蛋白肽具有较好的抗氧化活性,其相关产品的加工贮藏应避免强酸、强碱条件的影响。研究结果可为鳕鱼骨资源高值利用以及多肽类抗氧化产品开发提供科学指导。

Chicken collagen hydrolysates differentially mediate anti-inflammatory activity and type I collagen synthesis on human dermal fibroblasts

Collagen is a major extracellular matrix protein.Given the potential anti-inflammatory and antioxidant profiles of these bioactive compounds,there has been increasing interest in using collagen derived peptides and peptide-rich collagen hydrolysates for skin health,due to their immunomodulatory,antioxidant and proliferative effects on dermal fibroblasts.However,all hydrolysates are not equally effective in exerting the beneficial effects;hence,further research is needed to determine the factors that improve the therapeutic applicability of such preparations.We used different enzymatic conditions to generate a number of different collagen hydrolysates with distinct peptide profiles.We found that the use of two rather than one enzyme for hydrolysis generates a greater abundance of low molecular weight peptides with consequent improvement in bioactive properties.Testing these hydrolysates on human dermal fibroblasts showed distinct actions on inflammatory changes,oxidative stress,type I collagen synthesis and cellular proliferation.Our findings suggest that different enzymatic conditions affect the peptide profile of hydrolysates and differentially regulate their biological activities and potential protective responses on dermal fibroblasts.

响应面优化藏羊皮胶原蛋白肽超声辅助提取工艺及其体内抗氧化活性分析

为明确超声辅助提取对藏羊皮胶原蛋白肽含量及功能活性的影响。试验采用响应面法研究了料液比、超声功率和超声时间3个因素,确定了胶原蛋白肽最佳超声辅助提取工艺;并对藏羊皮胶原蛋白肽进行了抗氧化能力分析,模拟消化过程中的还原力和·OH清除能力研究。结果表明:超声辅助处理能明显提高胶原蛋白肽含量,最佳超声提取工艺为料液比1:18、超声功率220 W,超声时间27 min,藏羊皮胶原蛋白肽含量为30.21%±1.67%。超声波辅助提取后胶原肽的还原力和·OH清除率为0.49和83.2%,与超声前的胶原肽相比分别提高了4%和38.3%,经胃肠消化后还原力和·OH均有一定程度的下降,但仍然具有较好的抗氧化活性。超声辅助提取藏羊皮胶原蛋白肽具有提高胶原蛋白肽含量和增强体内抗氧化活性的优势,为功能性产品的开发提供了数据参考。

牛骨胶原蛋白肽的超声辅助提取及抗氧化活性研究

该文采用超声辅助酶解法提取牛骨胶原蛋白肽,并研究其抗氧化性能。以牛骨为原料,蛋白水解度为评价指标,在单因素基础上结合响应面法优化得出最佳提取工艺条件。研究了多肽液中游离氨基酸组成和肽分子质量分布规律,并在多肽液1~5 mg/mL质量浓度梯度下对DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除能力进行测定,评价牛骨胶原蛋白肽的抗氧化活性。结果表明,在超声功率为400 W,超声时间120 min,底物浓度4.4 g/100 mL和加酶量6000 U/g的酶解条件下,牛骨胶原蛋白水解度为20.94%,与预测值21.33%接近。多肽液中疏水性氨基酸和必需氨基酸含量丰富,1000 Da以下的肽段含量达到86.83%。体外抗氧化指标的结果显示,DPPH自由基清除率最高为43.80%,超氧阴离子自由基清除率最高为64.74%,均显著高于未超声处理组的37.33%和57.41%(P<0.05),表明超声波辅助酶解法提取的多肽液具有明显的抗氧化性。因此,超声波辅助酶解法提取牛骨胶原蛋白肽是一种绿色、高效的提取方法,对牛骨蛋白的利用和活性肽的开发具有重要意义。

胶原肽的抗光老化性能研究

紫外线照射会使皮肤发生光老化,从而导致皮肤产生皱纹、红斑甚至癌变,所以抗皮肤光老化受到研究者的极大关注。为此,本文开展了胶原肽的抗光老化研究,以期开发出高性能的抗皮肤光老化剂。本文考察了胶原肽的分子量分布与氨基酸组成,并开展了三种成品胶原肽(CP-A、CP-B和CP-C)对ABTS^(+)·清除能力、超氧自由基清除能力以及酪氨酸酶抑制能力的研究,证明了CP-A具有较高的抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性。

响应面优化鱼鳔胶原肽制备工艺及其抗氧化活性研究

鱼鳔富含胶原蛋白,营养价值高,但目前对鱼鳔的加工利用不足,造成资源浪费、环境污染。以草鱼鱼鳔为原料,以DPPH自由基清除能力为评价指标,通过单因素和响应面实验优化酶解鱼鳔胶原蛋白制备抗氧化活性肽的最佳工艺,并研究其体外抗氧化活性。结果表明:抗氧化活性肽的最佳制备工艺为,以风味蛋白酶为酶制剂,酶解时间79.34 min,料液比为3.09∶100(g∶m L),酶添加量为6 343.43 U/g,在此条件下制备的鱼鳔胶原肽的DPPH自由基清除能力达79.98%。鱼鳔胶原肽清除DPPH自由基、羟自由基的IC50分别为8.05 mg/m L和3.54 mg/m L,并且具有较强的还原力。因此,鱼鳔胶原肽具有较强的抗氧化活性,草鱼鱼鳔是制备抗氧化活性肽的良好原料。

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。

罗非鱼鳞胶原蛋白的提取及其酶解产物的抗氧化性

以罗非鱼鳞为原料,提取酸溶胶原蛋白(acid-soluble collagen,ASC)和酶促酸溶胶原蛋白(pepsin-soluble collagen,PSC),并对PSC的理化性质及其酶解产物抗氧化性进行探讨。实验结果表明:0.1 mol/L HCl提取ASC和PSC的得率分别为3.52%和14.88%;PSC氨基酸组成中,每1000个氨基酸残基甘氨酸为351个,亚氨基酸——脯氨酸和羟脯氨酸为180;PSC强吸收峰在205 nm处,磷酸盐缓冲液检测PSC的性质,与I型胶原蛋白相符。PSC经胃蛋白酶水解3 h,过氧化抑制率达到82.8%,抗氧化效果略优于等量的Vc。

水解进程对酶法制备的鱼鳞胶原蛋白肽性能的影响

以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)鳞为原料,研究在3种常用工业蛋白酶作用下,水解进程对酶法制备的鱼鳞胶原蛋白肽性能的影响。结果发现:对于碱性蛋白酶,在试验条件下水解4h后,水解度为9.5%,此时胶原蛋白肽的综合性能最为理想,对DPPH·的清除率为82.14%,乳化活性指数为70.12m2/g。对于复合蛋白酶,在试验条件下水解4h后,水解度为8.7%,胶原蛋白肽对DPPH·的清除率为86.32%,乳化活性指数为32.93m2/g。对于中性蛋白酶,在试验条件下水解4h后,水解度为7.2%,胶原蛋白肽对DPPH·的清除率为70.15%,乳化活性指数为36.88m2/g。以上结果表明,不同水解程度的胶原蛋白肽性能存在差异,使用不同蛋白酶进行水解,在水解程度相同时,所得胶原蛋白肽的性能也不相同。

不同来源胶原肽的抗氧化活性及吸湿保湿性能

目的:对不同来源(猪皮、牛皮、驴皮、鳕鱼皮、牛骨)胶原肽的抗氧化活性和吸湿保湿性能进行比较研究。方法:采用清除DPPH自由基和ABTS+·及还原力测定进行胶原肽抗氧化活性的评价,同时对胶原肽的吸湿性和保湿性进行比较分析。结果:驴皮胶原肽具有较强的清除DPPH自由基的能力,IC50值为0.63mg/mL。鳕鱼皮胶原肽具有较强的清除ABTS+·的能力,IC50值为0.12mg/mL。驴皮胶原肽具有较强的还原力,在质量浓度10mg/mL时,OD700nm值为0.61。驴皮胶原肽具有较好的吸湿保湿性,在相对湿度43%的环境下,24h,吸湿率10.17%、72h,保湿率98.90%。结论:驴皮胶原肽具有很好的抗氧化性和吸湿保湿性。

鱼鳔胶原肽抗氧化稳定性研究

以DPPH自由基、OH自由基清除能力和还原力为评价指标,探究pH、温度、食品配料、金属离子、防腐剂以及体外模拟胃、肠道消化对鱼鳔胶原肽抗氧化稳定性的影响。结果表明:鱼鳔胶原肽在酸性环境中抗氧化活性保持得较好,在碱性条件下丧失较快;鱼鳔胶原肽具有较强的耐热性,高温不会降低其抗氧化活性;蔗糖、葡萄糖以及防腐剂(苯甲酸钠和山梨酸钾)对鱼鳔胶原肽的活性影响不明显,但添加高浓度的食盐会降低鱼鳔胶原肽的抗氧化活性;金属离子Zn^(2+)、Cu^(2+)对鱼鳔胶原肽抗氧化活性的影响较大,Ca^(2+)的影响较小,K^+、Mg^(2+)无显著影响;模拟胃肠道消化对鱼鳔胶原肽抗氧化活性无显著影响。

酶解法制备胶原蛋白肽及其抗氧化活性的研究

以浙东白鹅为研究对象,在木瓜蛋白酶和风味蛋白酶复合一次酶解鹅皮胶原蛋白基础上,选取4种常见蛋白酶对胶原蛋白酶解产物进行二次酶解,并优化二次酶解条件以提高其产物的抗氧化活性,以抗氧化能力为指标确定二次酶解中的最佳水解酶.在单因素试验基础上,以还原力为指标,选取p H、酶解温度和酶解时间为考察因素,利用响应曲面法确定最佳酶解条件.结果表明,在胶原蛋白的二次酶解中,以碱性蛋白酶酶解所得产物抗氧化活性较好,响应曲面法确定碱性蛋白酶最优酶解条件为p H 8.96、酶解温度49.3℃、酶解时间5.7 h,此时所得多肽还原力达到13.48×10-2,较优化前提高了3.51%.

牛骨胶原蛋白肽体外清除自由基活性的研究

对经碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解的牛骨胶原蛋白肽清除自由基活性进行了研究。根据对羟基自由基、超氧阴离子自由基、二苯代苦味酰基自由清除能力的测定,以及还原能力、脂质抗氧化能力等抗氧化活性指标的测定,确定了水解度为7.9%左右的胶原蛋白肽清除自由基的综合效果最好,此时酶解产物的平均分子量为2025Da,含15个左右的氨基酸。在此条件下,超氧阴离子(O2-·)的清除率为63.86%,羟基自由基(·OH)的清除率为99.55%,二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除率为27.03%,对大豆卵磷脂过氧化作用的抑制率为74.78%。

鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的抗氧化活性

选取铁离子还原体系和3种自由基体系为指标,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除自由基效果和抗氧化作用。采用超滤膜分离鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽组分,筛选出体外清除·OH活性最好的组分,再建立小鼠衰老模型,将分离得到活性最好的组分采用灌胃法,测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)和羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)的含量,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化和清除自由基作用。结果表明:鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O-2·、DPPH自由基、·OH具有清除效果,质量浓度为10 mg/mL时对·OH、DPPH自由基、O-2·的清除率和对Fe3+的还原能力分别为70.48%、68.78%、42.53%和0.676;分子质量小于2 000 D的鮟鱇皮胶原蛋白肽组分对·OH具有较好的清除效果,IC50为15.7 mg/mL;剂量为100 mg/(kg?d)时,显著提高了皮肤中SOD、GSH-Px、CAT的活性,较模型组分别增加20.9%、41.3%和58.1%,且显著抑制MDA的形成。

多棘海盘车体壁胶原蛋白肽的制备及其抗氧化活性

以多棘海盘车体壁为材料提取胶原蛋白,制备多棘海盘车胶原蛋白肽(AACPs),并研究其体内、外抗氧化活性。方法:酶法提取胶原蛋白,选取木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶等6种酶,在最适温度和pH下水解胶原蛋白,通过比较各种酶水解物体外清除自由基能力和对兔肝的过氧脂质化的抑制作用,确定多棘海盘车胶原蛋白的适宜水解酶,及酶解工艺,选取体外活性最高的样品进行小鼠体内抗氧化实验(ig,7d),建立小鼠急性乙醇肝氧化模型,测定肝组织中MDA含量及SOD、GSH-Px活力,考察胶原蛋白肽的体内抗氧化活性。结果:木瓜蛋白酶酶解物清除自由基活性最高,对脂质过氧化的抑制作用最明显。中、高剂量AACPs能够显著降低急性酒精肝氧化小鼠肝组织中的MDA含量(P<0.01),显著提高SOD(P<0.05)、GSH-Px活力(P<0.01)。结论:制备多棘海盘车胶原蛋白肽(AACPs)的最佳酶为木瓜蛋白酶,AACPs具有明显的体内外抗氧化作用。

鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性

以鳕鱼骨为原料,采用热水提取法提取胶原蛋白,并采用中性蛋白酶、复合蛋白酶、酸性蛋白酶和胃蛋白酶分别进行酶解制备鳕鱼骨胶原蛋白肽。以对.OH、DPPH.和O2-.自由基的清除率作为评价指标,比较4种蛋白酶酶解制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性。结果表明:4种蛋白酶制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽对3种自由基均有一定的清除能力,且其清除能力随样品质量浓度的增大而增强;4种蛋白酶酶解制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽对3种自由基的清除能力各不相同,其中对.OH的清除能力最强且有较好的量-效关系;当多肽质量浓度在4～10 mg/mL时,4种蛋白酶酶解胶原蛋白肽对DPPH.的清除能力优于对O2-.的清除能力。