清心开窍方挥发油对AD大鼠大脑皮层及海马区GFAP及Caspase-3表达的影响

目的探讨清心开窍方及其挥发油对Aβ25-35杏仁核注射诱导痴呆(Alzheimer′s disease,AD)大鼠皮层及海马区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)、淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)及Caspase-3表达的影响。方法选取32只雄性SD大鼠,采用杏仁核注射Aβ25-35诱导AD大鼠模型,造模后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组[盐酸多奈哌齐片,1.67mg/kg]、清心开窍方组(中药组,清心开窍方煎液12.67mL/kg)和挥发油组(挥发油,3.33mL/kg),另选取8只大鼠作为正常组,正常组、模型组给予等量双蒸水灌胃,各组每天干预1次,连续2周。给药结束后进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠水迷宫测试期间第1～5天逃避潜伏期及跨越平台次数。免疫组织化学法检测各组大鼠大脑皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达。结果与模型组比较,各用药组大鼠第3～5天逃避潜伏期均缩短,皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3表达水平降低,跨越平台次数增加,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与西药组比较,中药组皮层及海马区Aβ表达水平降低、βAPP升高,挥发油组皮层及海马区GFAP、βAPP及Caspase-3均升高,挥发油组第3～5天逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方能明显改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能是通过降低皮层及海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达发生作用。

黄竹清脑颗粒对痰热腑实证脑出血大鼠急性期脑组织中Caspase-3表达的影响

目的:探讨黄竹清脑颗粒对痰热腑实证脑出血模型大鼠急性期脑组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)表达的影响。方法:采用SD大鼠自体粪便灌胃配合胶原酶Ⅶ-肝素混合液立体定位注射的方法复制痰热腑实证脑出血大鼠模型,免疫组化法测定大鼠脑组织中Caspase-3表达的变化。结果:①黄竹清脑颗粒可明显减轻痰热腑实证脑出血大鼠喉中痰鸣、鼻分泌物多,粪便干结,烦躁等症状,并可改善大鼠脑出血后的神经体征;②黄竹清脑颗粒大、中剂量组明显优于清开灵颗粒组(P<0.05)。结论:黄竹清脑颗粒能降低大鼠脑出血后血肿周围神经元活化caspase-3的表达,阻止神经元的凋亡,可能是其保护脑神经细胞的作用机理之一。

通痹方热奄包外敷对家兔退变颈椎间盘细胞凋亡相关基因Caspase-3和Bcl-2 mRNA的影响

目的:探讨通痹方热奄包外敷对家兔退变椎间盘细胞凋亡相关基因天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA表达的影响。方法:普通级新西兰大白兔18只随机均分为空白组(正常兔,不做任何干预)、模型组(颈椎病模型兔,不予任何治疗)及热敷组(颈椎病模型兔,通痹方热奄包外敷治疗),各组家兔于造模前、造模第30天及治疗结束后拍摄颈椎X线并评分;治疗15次后留取各组家兔C3-4和C4-5椎间盘,采用苏木精-伊红(HE)染色观察C3-4椎间盘组织形态学变化并评分,实时荧光定量法检测C4-5椎间盘Caspase-3和Bcl-2 mRNA相对表达量。结果:模型组和热敷组家兔造模后颈椎X线评分分别较空白组升高,热敷组家兔治疗后颈椎X线积分改善程度较模型组大,差异均有统计学意义(P<0.05);HE染色结果显示,模型组家兔C3-4椎间盘评分比空白组升高,热敷组评分比模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白组相比,模型组家兔C4-5椎间盘内Casepase-3 mRNA表达升高、Bcl-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,热敷组家兔椎间盘内Casepase-3 mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:通痹方热敷可通过上调Bcl-2 mRNA表达、抑制Casepase-3 mRNA表达减少椎间盘细胞凋亡,延缓椎间盘退变。

caspase-3和caspase-8在铅中毒大鼠心肌细胞中的表达特点研究

目的构建铅中毒大鼠模型,观察心脏中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(cysteinyl aspartate specific proteinase-8,caspase-8)蛋白及mRNA的表达特点。方法 40只SD(Sprague Dawley)大鼠在适应性喂养2周后采用数字表法随机分为正常组(无铅水)、低剂量铅中毒组(0.5g/L醋酸铅水溶液)、中剂量铅中毒组(1g/L醋酸铅水溶液)和高剂量铅中毒组(2g/L醋酸铅水溶液),中毒1个月后处死,收集血液和心脏,检测血铅、心铅、心功能指标[肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)]、血清炎性指标[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和白介素-8(interleukin-8,IL-8)]和心肌caspase-3和caspase-8蛋白及mRNA的表达特点。结果心肌组织病理学显示,正常组心肌纤维排列整齐,低剂量铅中毒和中剂量铅中毒组有一定紊乱,高剂量铅中毒组则明显排列无序,细胞界限不清晰;与正常组比较,低剂量、中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),与低剂量铅中毒组比较,中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8也明显高于中剂量铅中毒组(P<0.05);与正常组比较,低剂量和中剂量铅中毒组CK、CK-MB、LDH、caspase-3与caspase-8蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,高剂量铅中毒组明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组明显高于低剂量和中剂量铅中毒组(P<0.05)。结论 2g/L醋酸铅水溶液中毒大鼠可引起其心肌中caspase-3和caspase-8表达异常,诱发血液炎性介质TNF-α、IL-6和IL-8的升高,最终造成心肌损伤。

环境高温促进猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达

高温热应激条件下,凋亡蛋白表达量升高,生殖细胞凋亡增加。凋亡蛋白酶活化因子1（apoptosis protease activating factor 1,Apaf-1）和凋亡蛋白酶活化起始者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9,（cysteine aspartic acid specific protease 9,Caspase-9）是细胞凋亡内源途径中的重要调节蛋白,热应激条件下猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达未见报道。本研究发现,夏季畜舍高温使Apaf-1和Caspase-9表达量升高。qRT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组（正常舍温20℃）相比,短时热应激组（40-42℃,1 h/d,7 d）和长时热应激组（40-42℃,1 h/d,42 d）,Apaf-1和Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量均显著升高。免疫组织化学研究发现,Apaf-1在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞。热应激处理导致精母细胞和精子细胞Apaf-1表达量升高。在各实验猪睾丸组织中,Caspase-9定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中。与对照组相比,热应激处理导致减数分裂以后的生精细胞和支持细胞Caspase-9表达量升高。上述结果表明,高温热应激促进Apaf-1和Caspase-9的表达,提示Apaf-1和Caspase-9表达的变化可能与猪舍高温导致的猪精液品质下降存在关联。

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型(MI/RI模型),造模成功后第1天起,空白组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、参红通络方剂低、中、高剂量组(1.031、2.063、4.126 g·kg^(-1)参红通络方标准浓缩液)和辛伐他汀组(辛伐他汀0.71 mg·kg^(-1)),定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升(P<0.05);心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05);与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平(P<0.05);明显下调心肌细胞凋亡率(P<0.05);Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加(P<0.05)。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高(P<0.05)。结论:参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。

电针对帕金森病小鼠Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡的影响

目的:观察电针对帕金森病(PD)小鼠黑质中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路的影响,探讨其神经保护机制。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、假电针组、电针组,每组10只。采用鱼藤酮灌胃4周建立PD小鼠模型。电针组于“风府”和双侧“太冲”“足三里”给予电针刺激,每日1次,连续2周;假电针组于同样穴位浅刺至皮下,连接电针仪后不通电,其余操作均同电针组。采用敞箱实验观察各组小鼠的行为学变化,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量,免疫组织化学法检测小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达,实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β和IL-18mRNA表达水平,Western blot法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠行为学评分升高(P<0.01),自主运动的总时间缩短、总路程减少、平均速度降低(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量增加(P<0.01),黑质中TH阳性表达减少(P<0.01),Nrf2mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18mRNA表达水平均升高(P<0.01)。与模型组、假电针组比较,电针组小鼠行为学评分降低(P<0.01),自主运动的总时间延长、总路程增加、平均速度升高(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量减少(P<0.01,P<0.05),黑质中TH阳性表达增加(P<0.01),Nrf2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18 mRNA表达水平均降低(P<0.01)。与模型组比较,假电针组小鼠上述各项指标差异均无统计学意义。结论:电针“风府”“太冲”和“足三里”可改善PD小鼠运动障碍,减少黑质多巴胺神经元的丢失,抑制神经炎性反应,其作用机制可能与调控Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡相关。

八宝丹通过抑制NLRP3/Caspase-1通路减轻对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤

目的:研究八宝丹(BBD)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3/胱天蛋白酶-1(NLRP3/Caspase-1)通路蛋白的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分组,BBD(75、150、300 mg·kg^(-1))灌胃给药3 d,2次/d,于末次给药后2 h,腹腔注射APAP(400 mg·kg^(-1)),14 h后摘眼球取血,随后脱颈椎处死取材。苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织细胞形态学变化;生化法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6) mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肝脏中环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、NLRP3、Caspase-1、白细胞介素-18(IL-18)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肝脏组织小叶结构部分破坏、肝窦扩张,血清中ALT和AST水平,肝组织中NLRP3、Caspase-1、iNOS、IL-18、COX-2蛋白表达水平和IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平均明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠肝细胞破裂现象有所好转,肝血窦挤压情况有所缓解,血清中ALT和AST水平,肝组织中NLRP3、Caspase-1、iNOS、IL-18、COX-2蛋白表达水平和IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论:BBD可减轻APAP诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与抗氧化应激,抑制NLRP3/Caspase-1通路,进而降低IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6表达水平有关。

解毒活血方调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1促进大鼠胸主动脉损伤血管再内皮化

目的:探讨解毒活血方调节核转录因子(NF)-κB/NOD样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶(Caspase)-1介导细胞焦亡促进损伤血管再内皮化的可能机制。方法:通过球囊损伤的方法建立大鼠胸主动脉损伤模型,36只大鼠分为假手术组、模型组、解毒活血方低、中、高剂量组、阿托伐他汀钙片组,在术后28 d采集主动脉损伤段,苏木素-伊红(HE)染色观察血管结构形态学变化、伊文思蓝染色观察血管再内皮化情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)及内皮相关因子一氧化氮(NO)的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血管组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、NF-κB p65、磷酸化(p-)NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1的表达。结果:模型组血管内膜增厚,组织血管壁平滑肌细胞增生且排列紊乱,组织可见明显炎症细胞浸润,管腔面积狭窄,解毒活血方各剂量组和阿托伐他汀钙片组胸主动脉血管病理损伤均有不同程度改善。球囊损伤后,模型组内皮覆盖率明显下降,解毒活血方高剂量组和阿托伐他汀钙片组再内皮化率明显升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清TNF-α、ICAM-1、IL-1β含量均显著升高(P<0.01),血清中血管活性因子NO含量均显著下降(P<0.01),血管组织中eNOS蛋白表达显著下降(P<0.01),模型组大鼠细胞焦亡相关通路蛋白NLPR3、Caspase-1和NF-κB p65磷酸化的表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,给药组大鼠血清TNF-α、ICAM-1、IL-1β明显降低(P<0.05,P<0.01),NO明显升高(P<0.05,P<0.01),血管组织中eNOS表达显著升高(P<0.01),各给药组能降低NLRP3、Caspase-1和NF-κB p65磷酸化蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:解毒活血方可以促进球囊损伤血管再内皮化抑制内膜增生,其机制可能与调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1抑制细胞焦亡,抑制内皮细胞炎性损伤有关。

X连锁凋亡抑制蛋白通路在金黄色葡萄球菌α-毒素诱导人外周血单核细胞凋亡过程中的作用

目的研究金黄色葡萄球菌的主要毒力因子α-毒素感染人外周血单核细胞后细胞的凋亡率及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、凋亡抑制蛋白1/2(cIAP1/2)、Survivin、Bcl-2、Bax和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)等的表达。方法以Annexin V异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染流式细胞仪检测人外周血单核细胞的凋亡率,Western blot法检测XIAP、cIAP1/2、Survivin、Bcl-2、Bax和caspase-3等的表达,采用荧光比色法测定细胞内caspase-3蛋白酶活性。结果α-毒素能够以时间依赖的方式诱导人外周血单核细胞凋亡,α-毒素感染30、60和90 min凋亡率与感染0 min比较,其差异有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。随着作用时间的延长,XIAP、cIAP1/2、Survivin和Bcl-2表达逐渐下降,而Bax和caspase-3表达逐渐增加。结论α-毒素可诱导人外周血单核细胞凋亡,XIAP信号通路在金黄色葡萄球菌的致病过程中起重要作用。

推拿㨰法介导机械敏感性离子通道Piezo1对骨骼肌损伤模型大鼠细胞凋亡的影响

目的观察推拿㨰法对骨骼肌损伤模型大鼠的机械敏感性离子通道Piezo1及细胞凋亡的影响,探讨推拿㨰法治疗骨骼肌损伤的作用机制。方法32只SD大鼠随机分成正常组、模型组、㨰法组、㨰法+抑制剂组,每组8只。采用肌内注射200μL虎蛇毒素(notexin,NTX)(10μg/mL)制备大鼠腓肠肌损伤模型。造模24 h后,㨰法组使用实验动物㨰法器模拟㨰法治疗,滚动频率为140次/min,每天2次,每次3 min,连续治疗3 d;㨰法+抑制剂组在实施㨰法治疗前,给予腹腔注射Piezo1抑制剂GsMTx4(270μg/kg),每天1次,连续注射3 d;正常组和模型组腹腔注射等体积生理盐水。采用平衡木测试进行行为学评估,HE染色观察腓肠肌组织显微结构变化,TUNEL染色计算腓肠肌组织细胞凋亡率,Western blot法检测大鼠腓肠肌组织Piezo1、B淋巴细胞瘤-2(B-lymphoma-2,Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2相关X蛋白质(B-lymphoma-2 related X protein,Bax)、胱天蛋白酶-3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3)表达。结果与正常组比较,模型组和㨰法+抑制剂组平衡木行走时间延长(P<0.01),滑爪次数增加(P<0.01),腓肠肌细胞凋亡率升高(P<0.01),腓肠肌组织Piezo1、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),肌细胞破裂、坏死、大小不一,排列稀疏、无规律,周围有大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润。与模型组比较,㨰法组平衡木行走时间缩短(P<0.01),滑爪次数减少(P<0.01),腓肠肌细胞凋亡率降低(P<0.01),腓肠肌组织Piezo1、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05),肌细胞病理情况好转,有少量细胞破裂、萎缩、坏死,细胞间隔缩小,轻度局灶性炎性细胞浸润。与㨰法组比较,㨰法+抑制剂组平衡木行走时间延长(P<0.01),滑爪次数增多(P<0.01),腓肠肌细胞凋亡率增高(P<0.01),腓肠肌组织Piezo1蛋白表达降低(P<0.05),Caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),见较多肌细胞萎缩、坏死、大小不一,排列间隔较大,周围仍有一定数量中性粒细胞和淋巴细胞浸润。结论推拿㨰法可促进骨骼肌运动功能恢复,缓解骨骼肌损伤,其作用机制可能与激活Piezo1,抑制细胞凋亡有关。

水蛭素对高同型半胱氨酸大鼠血管平滑肌细胞的影响

目的:观察水蛭素对高同型半胱氨酸(Hcy)大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)的作用机制。方法:50只SD大鼠,采用随机数字表法分为正常组、模型组和水蛭素3个不同剂量组(25、50、100 AT-U/mL),每组10只。正常组予以普通饲料喂养,模型组及水蛭素组大鼠予以普通饲料及DL-蛋氨酸灌胃,造模21周,测血脂4项、血清Hcy,水蛭素组皮下注射水蛭素,2周后测血脂和Hcy,取胸主动脉组织。采用苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色观察胸主动脉组织病理变化及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶3(Caspase3)表达;实时荧光定量(RT-qPCR)检测Bcl-2、Bax和Caspase3的mRNA表达。结果:水蛭素各剂量组三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量显著降低(P<0.01),水蛭素高剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量显著升高(P<0.01);水蛭素各剂量组主动脉内膜增厚、VSMC增生减轻;水蛭素高、中剂量组胸主动脉组织Caspase3、Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白的表达减少,水蛭素各剂量组Caspase3、Bax的mRNA不同程度降低,Bcl-2的mRNA表达显著降低(P<0.01),水蛭素高剂量组对胸主动脉组织Caspase3、Bcl-2、Bax的mRNA的调控最佳。结论:水蛭素可能通过调节脂质、促进Hcy诱导下异常增殖的VSMC凋亡,延缓动脉粥样硬化进展,而且可以通过Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有效促进高Hcy诱导的异常增殖的VSMC凋亡,为动脉粥样硬化的早期防治提供了新方向。

参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死大鼠NOD样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响

目的探讨参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死(AMI)大鼠NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、倍他乐克组(0.9 mg/kg)和联合组(倍他乐克0.9 mg/kg联合参附注射液6 mL/kg),每组10只,连续灌胃3周。检测造模前、造模后和治疗3周时大鼠血清肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。造模后和治疗3周时,比较各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)等心脏彩超参数以及心肌梗死面积。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及Western blot检测心肌梗死面积NLRP3、Caspase-1的mRNA及其蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组造模后和治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,倍他乐克组和联合组治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均降低,且联合组上述指标均低于倍他乐克组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参附注射液辅助治疗AMI能够进一步减轻心肌细胞损伤,缩小梗死面积,抑制炎症反应和细胞焦亡活性。

西红花苷通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3-聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨西红花苷通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)-聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(PARP)通路对心肌缺血再灌注(MIR)大鼠的保护作用。方法将72只大鼠随机分为假手术组、模型组、西红花苷低、中、高剂量[20、40、80 mg/(kg·d),灌胃]组、西红花苷+PPARγ抑制剂T0070907组[西红花苷80 mg/(kg·d)+T00709071.5 mg/(kg·d)]。结扎冠状动脉前降支法构建MIR大鼠模型。建模成功后,测定大鼠血流动力学参数左心室舒张压(LVDP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dt_(max));试剂盒检测大鼠血清和心肌组织中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛水平;苏木精-伊红(HE)染色法检测大鼠心肌组织病理学变化;原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western-blot)法检测大鼠心肌组织中PPARγ-caspase-3-PARP通路蛋白表达。结果假手术组大鼠心肌纤维排列整齐,间质无炎症细胞浸润;模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,间质伴有大量炎症细胞浸润;与模型组比较,西红花苷低、中、高剂量组大鼠心肌组织病变得到改善,西红花苷中、高剂量组心肌纤维排列较整齐,存在少量炎症细胞浸润;与西红花苷高剂量组比较,西红花苷+T0070907组大鼠心肌组织病变严重。模型组大鼠血流动力学参数LVDP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)、PPARγ、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达较假手术组降低,LVEDP、血清和心肌组织中LDH[血清LDH(2762.74±317.69)比(1105.68±286.45)U/L,q=18.605,P<0.001;心肌组织LDH(4852.34±244.82)比(2456.84±315.63)U/mg,q=29.820,P<0.001]、CK-MB、丙二醛水平,心肌细胞凋亡数目、Bcl-2相关X基因(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、活化的PARP(Cleaved PARP)蛋白表达较假手术组升高(P<0.05);与模型组比较,西红花苷低、中、高剂量组LVDP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)及PPARγ、Bcl-2蛋白表达升高,LVEDP、LDH、CK-MB、丙二醛水平、心肌细胞凋亡数目及Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达降低,且随着西红花苷剂量的增加,呈一定的剂量依赖性变化(P<0.05);T0070907可逆转西红花苷对心肌缺血再灌注大鼠的保护作用。结论西红花苷可能通过激活PPARγ-caspase-3-PARP通路预防MIR大鼠心肌损伤。

醒神益智饮协定方联合奥拉西坦治疗血管性痴呆临床研究

目的:观察醒神益智饮协定方联合奥拉西坦治疗血管性痴呆的临床效果。方法:将86例血管性痴呆患者按随机数字表法分为对照组和观察组各43例。对照组给予奥拉西坦注射液静脉滴注,观察组在对照组基础上加醒神益智饮协定方内服。通过观察中医证候积分、认知能力、日常生活能力评分变化评价临床治疗效果,检测脑血流速度,监测外周血清中心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、天冬氨酸活化水解酶(Caspase-3)蛋白表达水平,评价用药安全性。结果:观察组总有效率为90.70%,显著高于对照组的72.09%(P <0.05)。治疗后,2组反应迟缓、耳鸣重听、腰膝酸软、智能减退、表情呆板等中医证候积分均低于治疗前,且观察组反应迟缓、耳鸣重听、腰膝酸软、智能减退、表情呆板等中医证候积分低于对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。治疗后,2组简易智能状态量表(MMSE)、日常生活活动量表(ADL)评分较治疗前升高,且观察组高于对照组(P <0.05)。治疗后,2组脑血流动力学指标大脑前动脉(ACA)、大脑后动脉(PCA)、大脑中动脉(MCA)、基底动脉(BA)、椎动脉(VA)等水平明显升高,且观察组脑血流动力学改善更明显,差异均有统计学意义(P <0.05)。治疗后,2组外周血H-FABP、Caspase-3水平较治疗前明显下降,CGRP水平较治疗前明显升高;且观察组外周血H-FABP、Caspase-3水平低于对照组,CGRP水平高于对照组;差异均有统计学意义(P <0.05)。结论:醒神益智饮协定方联合奥拉西坦利于缓解血管性痴呆患者的临床症状,提高认知能力、日常生活能力,其机制可能与提高脑血流动力学以增强脑组织血液灌注及调控血清中HFABP、CGRP、Caspase-3水平以修复受损神经功能密切相关。

牡丹花总黄酮对痛风性肾病大鼠NLRP3炎症小体及炎症因子表达的影响

目的:探究牡丹花总黄酮对大鼠痛风性肾病模型保护作用的可能机制。为治疗痛风性肾病的药物研究提供科研数据支撑。方法:使用腺嘌呤合并乙胺丁醇复制大鼠痛风性肾病模型,大鼠随机每12只分为空白组、模型组、别嘌醇组(42 mg·kg^(-1))、阳性药痛风舒片组(600 mg·kg^(-1))、牡丹花总黄酮高、中、低剂量组(TFPF,260、130、65 mg·kg^(-1));酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠肾脏组织匀浆中转化生长因子-β1(TGF-β1)、IL-1β含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织细胞形态变化;原位末端标记法(TUNEL)观察肾脏组织细胞DNA损伤情况;免疫组化法观察肾脏NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾脏组织中NLRP3、Caspase-1、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、MCP-1、IL-1β、IL-18含量均显著增加(P<0.01),模型组大鼠肾脏NLRP3、Caspase-1、NF-κB、IL-1β表达量均显著升高(P<0.01),肾组织细胞呈现胞质肿胀、细胞膜破裂,细胞核固缩断裂数量增加,模型组大鼠肾组织细胞TUNEL染色阳性率显著升高(P<0.01),大鼠肾组织匀浆中IL-1β、TGF-β1的含量均显著上升(P<0.01);与模型组比较,牡丹花总黄酮高、中剂量组可不同程度的降低大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-18含量(P<0.05,P<0.01),牡丹花总黄酮高剂量组MCP-1含量明显降低(P<0.01),牡丹花总黄酮高、中剂量组明显降低肾组织匀浆中TGF-β1含量(P<0.05,P<0.01),牡丹花总黄酮中剂量组肾组织匀浆中IL-1β含量显著降低(P<0.01);HE染色显示牡丹花总黄酮各剂量组可不同程度的改善肾小管上皮细胞状态,减轻胞质肿胀,细胞核固缩的数量;降低肾组织细胞TUNEL染色阳性率(P<0.01),肾脏细胞DNA损伤减少;抑制肾脏组织细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、NF-κB蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:牡丹花总黄酮对痛风性肾病模型大鼠的肾脏保护作用与抑制炎症因子分泌相关,其抗炎作用机制可能是通过抑制NF-κB信号通路与NLRP3/Caspase-1通路的活化,从而下调IL-1β、IL-18等炎性因子表达、成熟及释放,遏制肾脏细胞程序性死亡的初始阶段细胞焦亡的发生,从而逆转痛风性肾病肾脏的炎症损伤。

高压氧预处理对减压病大鼠脑组织B细胞淋巴瘤/白血病基因-2蛋白及相关X蛋白表达的影响

目的 探讨高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）预处理对减压病大鼠脑组织B细胞淋巴瘤/白血病基因-2蛋白（B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）及相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白（cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3）表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠72只,采用数字表法随机分为正常对照组（对照组）、高压氧预处理组（HBO组）、减压病组（DCS组）,每组分别设置4个观察时间点（1、5、7、10 d）,每个时间点（亚组）6只.建立大鼠减压病模型,HE染色观察减压病后脑组织病理变化,免疫组织化学染色观察各组脑组织Bcl-2、Bax、Caspase-3 的表达.结果 （1） HBO组与DCS组脑组织皮层病情分级为轻度～中度（1～3级）.（2）HE染色发现,DCS组大鼠大脑皮层区出现大片疏松区,皮层与海马神经元细胞呈三角形变性坏死,细胞萎缩、体积缩小变性,染色质浓缩甚至碎裂,HBO组神经元变性坏死明显减轻.（3）1、5、7d时,DCS组脑组织皮层Bcl-2阳性细胞数分别为（89.5±15.60）、（176.4±10.22）、（265.52±15.74）个,与对照组（408.67 ±29.57）个相比明显减少,差异均有统计学意义（P＜0.01）;HBO组[脑组织皮层阳性细胞数分别为（179.64±12.21）、（253.91±14.00）、（341.15±13.52）个],较DCS组明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）.1、5、7d时,DCS组脑组织皮层Bax阳性细胞数分别为（389.56±18.62）、（337.04±14.85）、（176.41±20.75）个,Caspase-3阳性细胞数分别为（495.64 ±21.03）、（283.04±13.12）、（352.41 ±21.34）个,较对照组1d时[脑组织皮层Bax和Caspase-3分别为（98.64±14.25）、（106.20±14.64）个]明显增加.HBO组Bax阳性细胞数分别为（313.54±21.02）、（253.05±13.60）、（129.03±12.85）个,Caspase-3分别为（429.43±14.08）、（228.05 ±13.60）、（301.02±15.79）个,较DCS组明显减少,差异均有统计学意义（P＜0.05）.DCS组Bcl-2/Bax值较对照组明显降低,HBO组Bcl-2/Bax值较DCS组明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 DCS组大鼠大脑皮层区神经元凋亡1d时最严重,海马区10 d时最明显;HBO预处理可以减轻减压对大鼠脑组织的病理损伤,减轻神经细胞的变性坏死,抑制线粒体途径的细胞凋亡.

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对卵巢癌裸鼠移植瘤SKOV3细胞的促凋亡研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白对SKOV3移植瘤细胞半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响及其与肿瘤细胞凋亡的关系。方法建立雌性裸小鼠SKOV3移植瘤24只,随机分为4组,每组6只。TRAIL组单用重组人TRAIL蛋白(10μg/kg),顺铂(DDP)组单用DDP(3 mg/kg),TRAIL+DDP组联合使用TRAIL蛋白(10μg/kg)和DDP(3 mg/kg),空白对照组给予0.5 mL生理盐水。经处理后,各组的组织切片用免疫组织化学染色检测Caspase-3的表达和末端脱氧核苷酸转移酶介导核苷酸缺口标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡指数。结果 Caspase-3的表达水平在TRAIL组(171.67±14.38)、DDP组(172.50±14.75)、联合组(230.00±40.99)中均明显高于对照组(135.83±16.25)(P<0.05)。SKOV3移植瘤细胞凋亡指数在空白对照组、TRAIL组、DDP组和联合组分别为16.67±5.43、33.17±8.42、24.33±4.59和40.50±6.16,TRAIL组和联合组细胞凋亡指数较空白对照组和DDP组明显增高(P<0.05)。结论 TRAIL蛋白使卵巢癌移植瘤细胞的Caspase-3表达增强,TRAIL蛋白促进肿瘤细胞凋亡发生。

加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响,进一步探讨其具体抗肿瘤作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为加味四君子汤低、中、高剂量组(0.213,0.426,0.853 g·kg^(-1)),空白组,每组10只,空白组给予等体积的生理盐水灌胃,各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,水合氯醛腹腔麻醉,心脏采血,分离血清,56℃灭菌,0.22μm过滤,制备加味四君子汤高、中、低剂量组含药血清,各剂量组含药血清孵育胃癌细胞SGC-7901,运用流式细胞仪检测细胞早期和晚期凋亡情况,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测肿瘤抑制基因p53,c-核蛋白类基因(c-Myc),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达,运用细胞免疫荧光技术检测p53,c-Myc,Caspase-3,Bcl-2蛋白的相对表达量情况。结果:与空白组比较,加味四君子汤含药血清高剂量组细胞凋亡比率显著升高(P<0.01),且可使胃癌细胞SGC-7901早期+晚期凋亡率达到22.58%(P<0.01)。Real-time PCR结果显示加味四君子汤中剂量组能显著促进Caspase-3 mRNA表达(P<0.01),加味四君子汤高剂量组能显著上调p53及c-Myc mRNA表达量(P<0.01),加味四君子汤高剂量组显著抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.01)。免疫荧光结果显示加味加味四君子汤高剂量组能使c-Myc,Caspase-3,p53蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:加味四君子汤含药血清能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡相关分子p53,c-Myc,Caspase-3的表达,发挥抗肿瘤作用。

加味不忘散对AD模型大鼠海马区NLRP3炎症通路中相关因子表达的影响

目的:通过观察加味不忘散对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及海马区NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症通路中相关分子NLRP3,天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL^-1β)表达的影响,探讨其作用机制。方法:通过Morris水迷宫筛选出合格SD大鼠52只,随机均分为假手术组,AD模型组,加味不忘散低剂量组(1.5 g·kg^-1),加味不忘散高剂量组(3 g·kg^-1)。采用双侧海马注射β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)5μL(2 g·L^-1)建立AD模型大鼠。造模后分别予低、高剂量加味不忘散灌胃,每日1次,连续4周。灌胃结束后通过Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆能力,判断造模是否成功;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织中NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达水平。结果:与假手术组比较,AD模型组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05);与AD模型组比较,加味不忘散低剂量组大鼠学习记忆能力无改善,NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达水平均无统计学差异,加味不忘散高剂量组大鼠学习记忆能力明显改善,NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达均明显下降(P<0.05)。结论:高剂量加味不忘散可改善大鼠学习记忆能力,其机制可能与下调NLRP3炎症通路中NLRP3及下游Caspase-1,IL^-1β的表达,抑制海马组织内的炎症反应有关。