冬凌草甲素对鼻咽癌HNE-1细胞株生长及其PCNA、Caspase-3表达的影响

目的观察冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株HNE-1生长及其细胞核抗原(PCNA)、Caspase-3表达的影响。方法 HNE-1中加入冬凌草甲素,MTT法观察其生长情况,FCM检测细胞周期,免疫细胞化学染色法检测PCNA,Western-blot技术检测Caspase-3。结果加入冬凌草甲素后HNE-1细胞生长受抑制,细胞被阻滞于G_0/G_1期;冬凌草甲素作用48 h后,HNE-1细胞的PCNA蛋白表达下调,Caspase-3蛋白表达增加。结论冬凌草甲素在体外可显著抑制人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞生长并诱导其凋亡,其机制可能是下调PCNA蛋白表达,激活Caspase-3的活性。

电针对帕金森病小鼠Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡的影响

目的:观察电针对帕金森病(PD)小鼠黑质中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路的影响,探讨其神经保护机制。方法:将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、假电针组、电针组,每组10只。采用鱼藤酮灌胃4周建立PD小鼠模型。电针组于“风府”和双侧“太冲”“足三里”给予电针刺激,每日1次,连续2周;假电针组于同样穴位浅刺至皮下,连接电针仪后不通电,其余操作均同电针组。采用敞箱实验观察各组小鼠的行为学变化,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量,免疫组织化学法检测小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达,实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β和IL-18mRNA表达水平,Western blot法检测小鼠黑质中Nrf2、NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠行为学评分升高(P<0.01),自主运动的总时间缩短、总路程减少、平均速度降低(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量增加(P<0.01),黑质中TH阳性表达减少(P<0.01),Nrf2mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18mRNA表达水平均升高(P<0.01)。与模型组、假电针组比较,电针组小鼠行为学评分降低(P<0.01),自主运动的总时间延长、总路程增加、平均速度升高(P<0.01),血清IL-1β和IL-18含量减少(P<0.01,P<0.05),黑质中TH阳性表达增加(P<0.01),Nrf2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平及IL-1β、IL-18 mRNA表达水平均降低(P<0.01)。与模型组比较,假电针组小鼠上述各项指标差异均无统计学意义。结论:电针“风府”“太冲”和“足三里”可改善PD小鼠运动障碍,减少黑质多巴胺神经元的丢失,抑制神经炎性反应,其作用机制可能与调控Nrf2/NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡相关。

八宝丹通过抑制NLRP3/Caspase-1通路减轻对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤

目的:研究八宝丹(BBD)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3/胱天蛋白酶-1(NLRP3/Caspase-1)通路蛋白的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分组,BBD(75、150、300 mg·kg^(-1))灌胃给药3 d,2次/d,于末次给药后2 h,腹腔注射APAP(400 mg·kg^(-1)),14 h后摘眼球取血,随后脱颈椎处死取材。苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织细胞形态学变化;生化法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6) mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肝脏中环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、NLRP3、Caspase-1、白细胞介素-18(IL-18)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肝脏组织小叶结构部分破坏、肝窦扩张,血清中ALT和AST水平,肝组织中NLRP3、Caspase-1、iNOS、IL-18、COX-2蛋白表达水平和IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平均明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠肝细胞破裂现象有所好转,肝血窦挤压情况有所缓解,血清中ALT和AST水平,肝组织中NLRP3、Caspase-1、iNOS、IL-18、COX-2蛋白表达水平和IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论:BBD可减轻APAP诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与抗氧化应激,抑制NLRP3/Caspase-1通路,进而降低IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6表达水平有关。

加味不忘散对AD模型大鼠海马区NLRP3炎症通路中相关因子表达的影响

目的:通过观察加味不忘散对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及海马区NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症通路中相关分子NLRP3,天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL^-1β)表达的影响,探讨其作用机制。方法:通过Morris水迷宫筛选出合格SD大鼠52只,随机均分为假手术组,AD模型组,加味不忘散低剂量组(1.5 g·kg^-1),加味不忘散高剂量组(3 g·kg^-1)。采用双侧海马注射β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)5μL(2 g·L^-1)建立AD模型大鼠。造模后分别予低、高剂量加味不忘散灌胃,每日1次,连续4周。灌胃结束后通过Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆能力,判断造模是否成功;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织中NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达水平。结果:与假手术组比较,AD模型组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05);与AD模型组比较,加味不忘散低剂量组大鼠学习记忆能力无改善,NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达水平均无统计学差异,加味不忘散高剂量组大鼠学习记忆能力明显改善,NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达均明显下降(P<0.05)。结论:高剂量加味不忘散可改善大鼠学习记忆能力,其机制可能与下调NLRP3炎症通路中NLRP3及下游Caspase-1,IL^-1β的表达,抑制海马组织内的炎症反应有关。

急性胰腺炎患者外周血细胞焦亡相关因子表达及与预后的关系研究

目的检测急性胰腺炎(AP)患者血清细胞焦亡相关因子核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平,并探讨其与AP患者病情严重程度及预后的关系。方法选取2020年4月—2021年2月于本院住院治疗的264例AP患者为研究对象,根据严重程度将其分为重症AP(SAP)组86例、中重症AP(MSAP)组89例和轻症AP(MAP)组89例,根据SAP患者和MSAP患者28 d生存情况将其分为生存组145例和死亡组30例。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清细胞焦亡相关因子NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平,采用多因素Logistic回归分析影响AP患者预后的因素。结果SAP组血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平均高于MSAP组和MAP组,MSAP组血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平均高于MAP组(P<0.05)。死亡组血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平及APACHEⅡ评分均高于生存组(P<0.05)。死亡患者血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平与APACHEⅡ评分呈正相关关系(P<0.05)。血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平及四者联合预测AP患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.902、0.870、0.869、0.894、0.986,特异度分别为88.3%、89.7%、89.0%、86.2%、98.6%,敏感度分别为80.0%、80.0%、76.7%、76.7%、80.0%。NLRP3、Caspase-1是影响AP患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论血清细胞焦亡相关因子NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平与AP患者病情严重程度有关,且可作为早期预测AP患者预后的良好参考指标。