血清AMPK-αmRNA、Caspase-6 mRNA水平对非酒精性脂肪肝疗效的预测价值及影响因素分析

目的 分析血清腺苷酸活化蛋白激酶-αmRNA(Adenosine monophosphate activated protein kinase α,AMPK-αmRNA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-6(Cystein-asparate protease,caspase-6) mRNA水平对非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)疗效的预测价值及影响因素。方法 选取2021年10月-2023年8月聊城市人民医院感染性疾病科收治的188例NAFLD患者为研究对象,治疗6个月后以甘油三酯(TG)降低≥20%和(或)总胆固醇(TC)降低≥10%判断为治疗有效,归入有效组,否则判断为治疗无效,归入无效组。所有患者治疗前后检测血清AMPK-αmRNA、Caspase-6 mRNA水平。收集NAFLD患者一般资料,分析NAFLD疗效的影响因素。绘制受试者工作特征(Receiver operating characteristic curve,ROC)曲线分析血清AMPK-αmRNA,Caspase-6 mRNA水平对NAFLD疗效的预测价值。结果 188例NAFLD患者治疗6个月脱落6例,有效随访182例,其中治疗有效126例(69.23%),纳入有效组,治疗无效56例(30.77%),纳入无效组。与本组治疗前比较,治疗6个月后患者血清AMPK-αmRNA水平升高,Caspase-6 mRNA水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与无效组比较,有效组治疗前、治疗6个月血清AMPK-αmRNA水平升高,Caspase-6 mRNA水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。患有糖尿病,血清TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein,LDL-C)、谷丙转氨酶(Alanime aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST),Caspase-6 mRNA水平是NAFLD疗效的独立危险因素,治疗前血清AMPK-αmRNA水平是其独立保护因素(P<0.05)。建立Logistic回归模型:logit(P)=-29.182-0.867×AMPK-αmRNA+0.890×Caspase-6 mRNA+1.956×糖尿病+1.283×TG+0.982×TC+0.703×LDL-C+0.066×ALT+0.101×AST,拟合度较好。治疗前血清AMPK-αmRNA、Caspase-6 mRNA水平及Logistic回归模型预测NAFLD疗效的曲线下面积(Area under curve,AUC)值分别为0.757、0.717、0.816,Logistic回归模型的预测价值大于AMPK-αmRNA,Caspase-6 mRNA单独评估价值(Z=2.149,P=0.032;Z=2.879,P=0.004)。结论 患者是否患有糖尿病,血清TG、TC、LDL-C、ALT、AST、AMPK-αmRNA、Caspase-6 mRNA水平是NAFLD疗效的影响因素,检测血清AMPK-αmRNA、Caspase-6 mRNA水平对NAFLD疗效具有一定预测价值。

精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡与caspase-3蛋白的表达

目的:探讨caspase-3在精索静脉曲张大鼠生精细胞中的表达及其与生精细胞凋亡的关系。方法:雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组(SOG)、30 d术后组(PG1)、60 d术后组(PG2),每组8只。建立左精索静脉曲张模型,TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化SABC法检测caspase-3表达。结果:SOG、PG1、PG2大鼠左、右侧睾丸每生精小管截面caspase-3阳性细胞数分别为0.117 5±0.012 9、0.246 3±0.042 1、0.293 8±0.051 1及0.165 0±0.019 2、0.253 8±0.021 9、0.277 5±0.034 3。与SOG相比,PG1和PG2组大鼠双侧睾丸生精细胞caspase-3表达均增加,差异有显著性(P=0.011 5及P=0.014 4)。结论:精索静脉曲张可能是大鼠生精细胞caspase-3表达增加且生精细胞凋亡增多的机制之一。

电针对完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠脊髓组织中Caspase-9、细胞色素C及凋亡蛋白酶激活因子-1表达的影响

目的观察电针对完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱功能及脊髓组织中Caspase-9、细胞色素C(Cyt-C)及凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)表达的影响。方法雌性Sprague-Dawley大鼠60只,随机抽取36只,采用改良T_(10)脊髓横断法制作完全性脊髓损伤后神经源性膀胱模型,取24只成功模型分为模型组和电针组各12只,其余未造模大鼠24只随机分为假手术组和空白组各12只。于造模后第19天取次髎、中极、三阴交、大椎行电针,连续7 d后行尿流动力学检测,TUNEL法测定细胞凋亡率,Western blotting测定脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1蛋白的表达情况。结果与空白组和假手术组比较,模型组和电针组膀胱最大容量及膀胱顺应性均明显降低(P<0.01),膀胱基础压力和漏尿点压力增加(P<0.05);脊髓组织TUNEL阳性率显著升高(P<0.001);脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,电针组的膀胱最大容量及膀胱顺应性明显增加(P<0.01),膀胱基础压力和漏尿点压力降低(P<0.05);脊髓组织TUNEL阳性率明显降低(P<0.01);脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C及Apaf-1蛋白表达量降低(P<0.05)。结论电针次髎、中极、三阴交、大椎可改善完全性脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠膀胱功能,其作用机制可能与脊髓组织中Caspase-9、Cyt-C和Apaf-1的表达下调,凋亡减少有关。

Caspase蛋白酶与细胞凋亡

自从发现线虫死亡基因ｃｅｄ３编码产物与哺乳动物白细胞介素１β转化酶（ＩＣＥ）结构、功能上的相似性以来，一系列半胱氨酸蛋白酶基因相继被克隆，并显示出在细胞凋亡执行阶段中的重要功能．激活的ＩＣＥ／ＣＥＤ３家族蛋白酶（因其为Ａｓｐ特异的半胱氨酸蛋白酶，又被称为ｃａｓｐａｓｅ）能降解细胞中多个底物，进而引发随后的细胞学事件．

因子Ⅶa依赖组织因子激活PAR2/ERK/NF-κB抑制结肠癌SW620细胞caspase-3表达

目的探讨凝血因子Ⅶa对结肠癌SW620细胞增殖能力以及表达凋亡分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的影响及其作用机制。方法用一定剂量的蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、凝血因子Ⅶa等刺激物处理SW620细胞,观察细胞生长情况;western blot和定量PCR分别检测细胞表达caspase-3蛋白质及mRNA水平;利用相关抗体、拮抗剂和抑制剂等观察因子Ⅶa对caspase-3表达的效应变化。结果 PAR2-AP(100μmol/L)及因子Ⅶa(10 nmol/L)能够明显促进SW620细胞的生长,减少细胞caspase-3蛋白质和mRNA的表达;抗组织因子(TF)抗体(а-TF)、PAR2拮抗剂(PAR2-аAP)、ERK1/2抑制剂U0126以及NF-κB抑制剂PDTC均能逆转因子Ⅶa对SW620细胞caspase-3表达的抑制效应,而p38MAPK抑制剂SB203580对caspase-3的表达无明显的干预作用。结论因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经ERK1/2和NF-κB信号通路,抑制SW620细胞caspase-3表达,从而促进细胞的增殖与生长。

Nodosin通过Apaf-1和caspase-3诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究传统中药提取物nodosin对人肝细胞癌Hep G2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:将nodosin设置为1. 25μmol/L、2. 5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L不同浓度组,作用于Hep G2细胞24 h后,用Hoechst 33258染色和电镜观察不同浓度的药物对细胞形态学的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用RT-qPCR检测凋亡蛋白酶激活因子1 (Apaf-1) mRNA的表达,用Western blot检测caspase-3及其前体和活化体的蛋白水平。结果:形态学结果显示,随着用药剂量的增加,细胞皱缩和细胞核偏移越明显,凋亡小体在5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L剂量组明显增多。Apaf-1 mRNA的表达增加,caspase-3及其前体的表达和cleaved caspase-3的蛋白水平随着用药剂量的增加逐渐增加(P <0. 01)。结论:Nodosin能够诱导Hep G2细胞凋亡。该作用可能是通过增加Apaf-1 mRNA的表达继之激活caspase-3实现的。

蛋白酶体抑制剂MG132诱导caspase-8依赖的骨肉瘤细胞凋亡机制研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂Z-LLL-CHO(MG132)对人骨肉瘤细胞MG-63的作用以及可能作用机制。方法:将不同浓度的MG132作用于骨肉瘤细胞MG-63,采用显微镜观察形态改变、电镜观察细胞超微结构、MTT检测细胞增殖活力、琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及细胞周期改变、RT-PCR检测基因转录、Western blotting检测蛋白表达水平。结果:MG132能有效诱导人骨肉瘤细胞系MG-63细胞周期在G2-M期的停滞,并引起MG-63的凋亡,出现凋亡的典型形态学改变,同时出现p27kip1蛋白的积累,caspase-8活化蛋白表达增加,Bax∶Bcl-2蛋白含量比例的增高,而对正常的人二倍体成纤维细胞,MG132并未表现诱导其凋亡的活性。结论:MG132引起的人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡也许是与caspase-8、p27kip1和Bcl-2蛋白相关的。

癫癎模型大鼠海马神经元凋亡细胞中caspase3新底物的寻找

目的:在癫癎模型大鼠海马神经元凋亡细胞中寻找caspase 3新底物。方法:建立癫癎模型大鼠海马组织cDNA文库,构建含caspase 3的P12和P17两亚基的三杂交诱饵载体,检测其效果,并进行酵母三杂交筛库。结果:成功建立了癫癎模型大鼠海马组织cDNA文库,构建了大鼠caspase 3基因的酵母三杂交诱饵载体,并通过caspase 3与eIF2α之间的相互作用验证;以此三杂交诱饵载体筛库获得caspase 3的新底物PIAS1及MIZ1。结论:从癫癎模型大鼠海马的cDNA文库中筛库获得caspase 3的新底物,为进一步研究caspase 3在癫癎发作引起海马神经损伤中的作用创造了条件。

补阳还五汤及其有效部位对大鼠脑缺血再灌注后caspase表达的影响

目的研究补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷对大鼠脑缺血再灌注后脑组织caspase-1、3、8表达的影响。方法采用颈内动脉线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(M CAO)再灌注模型,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定缺血脑组织中caspase-1、3、8 mRNA的表达。结果脑缺血2 h再灌注22 h后,模型组caspase-1、3、8表达较假手术组均显著增强(P<0.05)。生物碱组、苷组caspase-1表达显著低于模型组(P<0.05);补阳还五汤组、生物碱组、苷组、三七总皂苷组caspase-3与模型组比较均显著降低(P<0.05);生物碱组caspase-8表达较模型组显著降低(P<0.05)。三七总皂苷组caspase-8表达较假手术组显著增强(P<0.05)。结论补阳还五汤及其有效部位通过抑制缺血后脑组织caspase-1、3、8的表达,从而有可能对抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,保护缺血脑组织。

活血熄风方对MCAO局灶性脑缺血模型大鼠脑组织Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察活血熄风方对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO),制备局灶性脑缺血模型,观察活血熄风方对MCAO模型大鼠脑缺血后神经功能缺损导致的行为学变化,并以免疫组化法检测对其大脑皮质细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响,以此探讨活血熄风方抗细胞凋亡及对脑缺血的神经保护作用及作用机制。结果:活血熄风方能抑制MCAO模型大鼠大脑皮质Caspase-3蛋白表达。结论:活血熄风方对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其机理可能与活血熄风方影响抑制细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达有关。

丹参酮IIA对帕金森大鼠中脑内Caspase-12和CHOP的影响

目的观察丹参酮IIA对帕金森病(PD)模型大鼠中脑黑质内CHOP蛋白、Caspase-12蛋白、Caspase-3蛋白和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达的影响,探讨其对帕金森病模型大鼠的作用及相关机制。方法(1)帕金森病(PD)模型大鼠的制备:60只健康、雄性SD大鼠,采用数字表法随机分为模型组(30只)、假手术组(sham组)(15只)和正常对照组(15只)。对照组对照组正常饲养,不作任何处理;假手术组,采用在大鼠颈背部皮下注射不含鱼藤酮的葵花油乳化液;模型组采用在大鼠颈背部皮下注射鱼藤酮。每天注射1次,连续30 d。用药期间观察实验大鼠外观和行为学变化。(2)把制备成功的模型组先分为处理组(丹参酮IIA组,15只)和生理盐水组(NS组,15只)。两组大鼠分别被注射生理盐水和丹参酮IIA,每天注射1次,连续注射14 d。(3)用药期间观察实验大鼠外观和行为学变化。(4)第14 d,采用免疫组织化学染色检测3组大鼠中脑黑质内TH蛋白、CHOP蛋白、Caspase-12蛋白和Caspase-3蛋白的表达情况。结果与正常对照组及假手术组比较,模型组大鼠出现典型的帕金森病样症状,可以进行后续实验;免疫组织化学染色见NS组大鼠中脑黑质内可见CHOP蛋白、Caspase-12蛋白和Caspase-3蛋白的表达增多,TH蛋白的表达则降低,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。处理组大鼠中脑黑质内可见CHOP蛋白、Caspase-12蛋白和Caspase-3蛋白的表达降低,TH蛋白的表达则增多,与NS组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹参酮IIA通过减弱内质网应激反应介导的神经元调亡,从而减轻帕金森病模型大鼠中脑黑质内多巴胺能神经元的丢失。

XIAP、Smac、Caspase-3表达与浸润性乳腺癌分化程度及预后的关系

目的分析X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激动剂(Smac)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达与浸润性乳腺癌分化程度、预后的关系。方法收集2018年9月—2019年9月收治的83例浸润性乳腺癌,检测癌组织及癌旁正常组织(距瘤体>5 cm)XIAP、Smac、Caspase-3表达,分析上述因子与浸润性乳腺癌分化程度、预后的关系。结果浸润性乳腺癌组织中XIAP阳性表达率高于癌旁正常组织,Smac、Caspase-3阳性表达率均低于癌旁正常组织(P<0.05)。中、高分化组XIAP阳性表达率低于低分化组,Smac、Caspase-3阳性表达率均高于低分化组(P<0.05),中分化组与高分化组比较差异无统计学意义(P>0.05)。浸润性乳腺癌XIAP阴性组、Smac及Caspase-3阳性组2年生存率分别高于XIAP阳性组、Smac及Caspase-3阴性组(P<0.05)。结论浸润性乳腺癌组织中XIAP、Smac及Caspase-3呈异常表达,三者在肿瘤细胞凋亡中起重要作用,并与患者预后相关。

基底细胞样乳腺癌组织中Apaf-1、Caspase-9的表达变化及意义

目的观察基底细胞样乳腺癌(BLBC)组织中凋亡蛋白酶活化因子1(Apaf-1)、细胞凋亡蛋白酶9(Caspase-9)的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测43例BLBC(A组)、57例non-BLBC(B组)和60例癌旁正常乳腺组织(C组)Apaf-1、Caspase-9的表达,分析两指标间及与BLBC临床病理参数的关系。结果A、B、C组Apaf-1阳性率分别为23.3%(10/43)、49.1%(28/57)、75%(45/60),两两比较,P均<0.01;Caspase-9阳性率分别为27.9%(12/43)、54.4%(31/57)、85%(51/60),两两比较,P均<0.01。Apaf-1表达与BLBC肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05),Caspase-9表达与BLBC淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05)。BLBC组织Apaf-1与Caspase-9阳性表达呈正相关(r=0.639,P<0.01)。结论 BLBC组织Apaf-1、Caspase-9表达降低,两者异常表达可能与BLBC的发生、发展密切相关。

猪流行性腹泻病毒通过病毒蛋白酶激活Caspase-3诱导细胞凋亡

冠状病毒是一大类能够引起呼吸系统疾病,从而威胁人类健康的病毒.目前,对冠状病毒诱导细胞凋亡及其机制研究甚少.本研究以动物冠状病毒-猪流行性腹泻病毒(PEDV)为模型探讨冠状病毒诱导细胞凋亡效应及其可能作用机制.通过流式细胞术检测发现感染PEDV病毒后细胞凋亡率明显升高,且PEDV诱导细胞凋亡呈时间和剂量依赖性(P<0.05或P<0.01);进一步研究发现,冠状病毒木瓜样蛋白酶(PLP)在病毒引起凋亡过程中起重要作用.实验发现,转染PEDV PLP质粒后,caspase-3活化体表达水平明显升高.提示冠状病毒PLP蛋白酶通过激活caspase-3在病毒诱导细胞凋亡过程中起着关键作用.以上结果为研究人类冠状病毒PLP蛋白功能及其通过细胞凋亡调节宿主抗病毒天然免疫机制提供重要基础.

环境高温促进猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达

高温热应激条件下,凋亡蛋白表达量升高,生殖细胞凋亡增加。凋亡蛋白酶活化因子1（apoptosis protease activating factor 1,Apaf-1）和凋亡蛋白酶活化起始者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9,（cysteine aspartic acid specific protease 9,Caspase-9）是细胞凋亡内源途径中的重要调节蛋白,热应激条件下猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达未见报道。本研究发现,夏季畜舍高温使Apaf-1和Caspase-9表达量升高。qRT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组（正常舍温20℃）相比,短时热应激组（40-42℃,1 h/d,7 d）和长时热应激组（40-42℃,1 h/d,42 d）,Apaf-1和Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量均显著升高。免疫组织化学研究发现,Apaf-1在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞。热应激处理导致精母细胞和精子细胞Apaf-1表达量升高。在各实验猪睾丸组织中,Caspase-9定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中。与对照组相比,热应激处理导致减数分裂以后的生精细胞和支持细胞Caspase-9表达量升高。上述结果表明,高温热应激促进Apaf-1和Caspase-9的表达,提示Apaf-1和Caspase-9表达的变化可能与猪舍高温导致的猪精液品质下降存在关联。

染锰大鼠生精细胞凋亡中caspase-3 mRNA、凋亡蛋白酶活化因子-1及多聚ADP核糖聚合酶的表达变化

目的:研究染锰诱导的大鼠生精细胞凋亡过程中,天冬氨酸特异性半胱氨酸酶-3(caspase-3)mRNA和凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达及其关系,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠,设立空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学法检测生精细胞caspase-3 mRNA、Apaf-1和PARP的表达。结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)和caspase-3mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI和caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与Apaf-1和PARP阳性细胞率呈负相关。结论:锰可影响大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进Apaf-1和PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应。

FRET技术检测植物类caspase-3蛋白酶活性的质粒构建及其瞬时表达

植物细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)是一种由细胞内部程序控制的、主动的细胞死亡过程。在植物发育、逆境胁迫及超敏反应中,PCD都起着重要的作用。为检测植物PCD过程中类似动物细胞凋亡蛋白酶caspase-3的活性,构建了一个能够在活体植物细胞中实时检测类caspase-3蛋白酶激活的质粒PI-ECFP-EYFP。该质粒在植物细胞中可以表达出两端为青色荧光蛋白(ECFP)和黄色荧光蛋白(EYFP)的融合蛋白。这两个荧光蛋白通过含有caspase-3蛋白酶作用靶点DEVD的短肽相连,从而可以根据荧光共振能量转移现象检测类caspase-3凋亡蛋白酶的激活,以为实时检测植物PCD过程中关键蛋白酶的激活及其调控奠定基础。

Caspase 3-like蛋白酶和TaeMCAⅡ基因对小麦胚乳细胞PCD的影响

对正常生长和淹水处理的华麦8号胚乳细胞发育过程中Caspase 3-like蛋白酶活性和TaeMCAⅡ基因表达量进行了研究。结果显示,正常生长条件下,在胚乳细胞发生PCD早期(花后12d),Caspase 3-like蛋白酶活性较强,且该酶主要定位于胚乳细胞中的淀粉质体上;整个胚乳细胞PCD过程中TaeMCAⅡ基因表达量变化不大。在淹水胁迫处理下,胚乳TaeMCAⅡ基因表达量和Caspase 3-like蛋白酶活性比同期正常处理高。上述研究结果表明,Caspase 3-like蛋白酶参与了正常生长的胚乳细胞PCD过程;淹水胁迫会导致TaeMCAⅡ基因超表达和Caspase 3-like蛋白酶活性升高,这可能是胚乳细胞PCD进程提前的原因之一。

通痹方热奄包外敷对家兔退变颈椎间盘细胞凋亡相关基因Caspase-3和Bcl-2 mRNA的影响

目的:探讨通痹方热奄包外敷对家兔退变椎间盘细胞凋亡相关基因天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA表达的影响。方法:普通级新西兰大白兔18只随机均分为空白组(正常兔,不做任何干预)、模型组(颈椎病模型兔,不予任何治疗)及热敷组(颈椎病模型兔,通痹方热奄包外敷治疗),各组家兔于造模前、造模第30天及治疗结束后拍摄颈椎X线并评分;治疗15次后留取各组家兔C3-4和C4-5椎间盘,采用苏木精-伊红(HE)染色观察C3-4椎间盘组织形态学变化并评分,实时荧光定量法检测C4-5椎间盘Caspase-3和Bcl-2 mRNA相对表达量。结果:模型组和热敷组家兔造模后颈椎X线评分分别较空白组升高,热敷组家兔治疗后颈椎X线积分改善程度较模型组大,差异均有统计学意义(P<0.05);HE染色结果显示,模型组家兔C3-4椎间盘评分比空白组升高,热敷组评分比模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白组相比,模型组家兔C4-5椎间盘内Casepase-3 mRNA表达升高、Bcl-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,热敷组家兔椎间盘内Casepase-3 mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:通痹方热敷可通过上调Bcl-2 mRNA表达、抑制Casepase-3 mRNA表达减少椎间盘细胞凋亡,延缓椎间盘退变。

caspase-3和caspase-8在铅中毒大鼠心肌细胞中的表达特点研究

目的构建铅中毒大鼠模型,观察心脏中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(cysteinyl aspartate specific proteinase-8,caspase-8)蛋白及mRNA的表达特点。方法 40只SD(Sprague Dawley)大鼠在适应性喂养2周后采用数字表法随机分为正常组(无铅水)、低剂量铅中毒组(0.5g/L醋酸铅水溶液)、中剂量铅中毒组(1g/L醋酸铅水溶液)和高剂量铅中毒组(2g/L醋酸铅水溶液),中毒1个月后处死,收集血液和心脏,检测血铅、心铅、心功能指标[肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)]、血清炎性指标[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和白介素-8(interleukin-8,IL-8)]和心肌caspase-3和caspase-8蛋白及mRNA的表达特点。结果心肌组织病理学显示,正常组心肌纤维排列整齐,低剂量铅中毒和中剂量铅中毒组有一定紊乱,高剂量铅中毒组则明显排列无序,细胞界限不清晰;与正常组比较,低剂量、中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),与低剂量铅中毒组比较,中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8也明显高于中剂量铅中毒组(P<0.05);与正常组比较,低剂量和中剂量铅中毒组CK、CK-MB、LDH、caspase-3与caspase-8蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,高剂量铅中毒组明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组明显高于低剂量和中剂量铅中毒组(P<0.05)。结论 2g/L醋酸铅水溶液中毒大鼠可引起其心肌中caspase-3和caspase-8表达异常,诱发血液炎性介质TNF-α、IL-6和IL-8的升高,最终造成心肌损伤。