苏云金芽胞杆菌以色列亚种20kDa蛋白质对CytA蛋白溶细胞作用的影响

为了证明苏云金芽胞杆菌以色列亚种２０ｋＤｅ蛋白质对ＣｙｔＡ蛋白溶细胞作用的影响， 根据２０ｋＤｅ蛋白质和ｃｙｔＡ蛋白基因的核苷酸序列，用ＡＭＰＬＩＦＹ程序设计了一套带有酶切位 点的引物，经ＰＣＲ扩增分别获得了２０ｋＤｅ蛋白质和ｃｙｔＡ蛋白基因。将其基因与表达载体 ｐＵＨＥ２４连接并转化到大肠杆菌ＸＬＩ和ＤＨＳ 分别获得含２０ｋＤａ蛋白质基因的克隆子 ＬＺ２９；含ｃｙｔＡ基因的克隆子ＬＺｃｙｔＡ和含有二者基因的重组子ＬＺ２０Ａ．在ＩＰＴＧ诱导下，测定 了不同克隆株基因表达产物对大肠杆菌细胞生长的影响。结果表明：ＬＺ２０的细胞生长不受影 响；ＬＺｃｙｔＡ的细胞被杀死；ＬＺ２０Ａ的细胞生长也不受影响。这表明２０ｋＤａ蛋白质基因与ｃｙｔＡ 蛋白基因重组后，２０ｋＤａ蛋白质基因表达产物可保护ＣｙｔＡ蛋白对大肠杆菌的溶细胞作用，而 巳这种作用并不因不同大肠杆菌受体而改变。