速效救心丸干预心肌缺血/再灌注大鼠线粒体通透性转换孔及心肌细胞凋亡

目的观察速效救心丸(川芎、冰片)对心肌缺血/再灌注大鼠线粒体通透性转换孔及心肌细胞凋亡的影响。方法将55只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,速效救心丸低、中、高剂量组(每组11只)。药物组给予对应剂量的速效救心丸混悬液灌胃,空白组与模型组给予同等容积的双蒸水灌胃,连续灌胃7 d结束后结扎左冠状动脉前降支建立心肌缺血/再灌注大鼠模型。观察速效救心丸干预后心肌线粒体通透性转换孔(MPTP)、细胞色素C的表达情况,并采用TUNEL检测心肌细胞凋亡,HE染色观察大鼠心肌细胞形态。结果与空白组比较,模型组MPTP开放程度增加,细胞色素C水平升高(P<0.05),TUNEL的阳性反应面积率显著上升(P<0.01)。速效救心丸高、中、低剂量组的TUNEL阳性反应面积率等较模型组降低(P<0.01),但药物组间比较无统计学差异。速效救心丸高剂量组的MPTP开放程度(P<0.05)、细胞色素C水平(P<0.01)较模型组降低。结论速效救心丸对大鼠心肌缺血/再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制MPTP的开放有关。

三叶 五叶木通提取物药效及对药酶影响的比较研究

目的:比较三叶木通[Akebia trifolia ta(Thunb.)Koidz,简称AK]和五叶木通[Akebia quina ta(Thunb)Decne,简称AD]水提物抗炎、利尿及抗菌作用的同时,探索性观察了两种木通对细胞色素P4503A(CYP3A)活性和P-糖蛋白(P-gp)水平的影响。方法:抗炎作用采用小鼠腹腔毛细血管通透法和小鼠耳肿胀法,观察其抗炎作用;利尿作用采用大鼠代谢笼法,观察其利尿作用;采用体外抑菌实验,观察其抑菌作用。用聚乙二醇制备肝微粒体,测定肝和小肠CYP3A活性;以免疫组化法检测肝和小肠组织P-gp水平。结果:两种木通均明显抑制小鼠腹腔毛细血管炎性渗出,抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀;并利尿和抑菌作用明显;三叶木通对肝脏CYP3A活性和P-gp水平有一定的抑制作用。与正常对照组相比差异显著(P<0.05);五叶木通对肝脏CYP3A活性和P-gp水平无明显作用,与正常对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论:两种木通抗炎、利尿及抑菌作用基本相等;三叶木通水提物可能是肝CYP3A和P-gp的抑制剂;但五叶木通对CYP3A和P-gp影响不明显。

黄连解毒汤对人细胞色素P450酶6个亚型的体外抑制作用研究

目的:研究黄连解毒汤对人肝微粒体6个亚型CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的体外抑制作用。方法:采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定对乙酰氨基酚、6α-羟基紫杉醇、4-羟基双氯芬酸、4-羟基美芬妥英、右啡烷、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮,分别代表CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的活性;黄连解毒汤提取物和7种混合探针底物在人肝微粒体中共同孵育,并计算其IC50值表示对CYP450酶的抑制程度。结果:在人肝微粒体体外孵育体系中,黄连解毒汤对CYP2D6的IC50值为3.54μg/mL,对CYP1A2的IC50值为10.8μg/mL,对CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4_T和CYP3A4_M亚酶的IC50值依次为67.7、299、530、199和607μg/mL。结论:在正常剂量下,黄连解毒汤对人肝微粒体CYP2D6和1A2可能有抑制作用,对人肝微粒体CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4无明显抑制作用。

PPARγ上调对PCOS患者卵巢颗粒细胞P450arom mRNA的表达及T转化效应的影响

目的:探讨PPARγ上调对PCOS患者卵巢颗粒细胞P450arom mRNA表达的调控作用及对T转化效应的影响。方法:提取10例雄激素正常的PCOS患者(NA-PCOS组)、10例伴高雄激素血症的PCOS患者(HA-PCOS组)及10例仅因输卵管因素不孕患者(对照组)的卵巢颗粒细胞,分别给予0、1、10 nmol/L的PPARγ激动剂罗格列酮培养48 h后,采用RT-PCR测定PPARγ、P450arom mRNA的表达,采用ELISA法测定培养液中E2值,计算T转化率。结果:PPARγ上调后,3组患者P450arom mRNA的表达均降低,T转化率下降,尤其是HA-PCOS组(P<0.05)。PPARγ上调(10 nmol/L罗格列酮处理)后,HA-PCOS组卵巢颗粒细胞中PPARγmRNA的表达水平和T转化率负相关,P450arom mRNA的表达水平和T转化率正相关(r=-0.633、0.829,P<0.05)。结论:PPARγ可能通过抑制P450arom参与PCOS高雄激素血症的发生。

黄芩甙对肝癌细胞BEL-7402线粒体膜电位、细胞内Ca^(2+)和Cyt C的影响

目的:探讨线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中的作用及可能的机制.方法:应用细胞培养技术培养肝癌细胞BEL-7402,透射电镜观察线粒体的变化:应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及线粒体膜电位、细胞内Ca^(2+)的改变。荧光发光法检测细胞色素(cytochrome C,Cyt C)含量,Bcl-2蛋白表达和流式细胞仪测定caspase-3活性.结果:黄芩甙诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡呈剂量依赖关系,线粒体结构出现明显改变;肝癌细胞线粒体膜电位降低,6h、24h、48h分别为85.49±2.17、82.59±2.18、28.45±2.39;细胞内Ca^(2+)和Cyt C的释放增加,Bcl-2蛋白表达下降和caspase-3活性增加.在6h、24h、48 h时细胞线粒体膜电位,细胞内Ca^(2+)和Cyt C的释放分别为(6h:85.49±2.17、19.56±2.09、35.36±3.21:24h:82.59±2.18、14.76±1.03、44.57±5.56:48h:28.45±2.39、88.79±4.32、78.63±7.65).结论:线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中起重要作用,其机制可能为抑制肝癌细胞Bcl-2蛋白表达,促进caspase-3活性增加,使细胞内Ca^(2+)增加,激发线粒体膜通透性转运孔开放,降低线粒体跨膜电位,促进Cyt C的释放.

益气养阴活血法对糖尿病大鼠肝脏P450的影响及其与血糖血脂的关系

目的探讨益气养阴活血法对糖尿病大鼠肝脏P450的影响及与血糖血脂的关系。方法取大鼠55只,分为健康对照组,模型组,丹蛭降糖胶囊(DJC)高、低剂量组,吡格列酮组,除健康对照组外,其余动物给予高脂饲料喂养4周,按35 mg/kg,给大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液1次,造模成功后,DJC高、低剂量组分别给予1.08 g·kg^(-1)·d^(-1)、0.54 g·kg^(-1)·d^(-1),吡格列酮组给予10 mg·kg^(-1)·d^(-1),模型组、健康对照组给予等量0.9%氯化钠注射溶液。均连续灌胃8周,留取肝脏,逆转录反应及实时荧光定量PCR检测大鼠肝脏组织β-actin、P450,取血测定血糖、血脂、糖化血红蛋白(HbA1c)。结果与正常组比较,模型组大鼠肝脏P450表达明显升高(P<0.01),予DJC后显著抑制了P450的过高表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。大鼠造模后血糖、血脂(TG)、HbA1c明显升高(P<0.01),予DJC后,高、低两组血糖、血脂(TG)、HbA1c显著下降(P<0.01或P<0.05),疗效与吡格列酮近似。P450与血糖、HbA1c相关分析显示,均呈显著正相关(P<0.01);P450与血脂各项指标均无明显相关性。结论具有益气养阴活血作用的丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠肝脏P450酶活性有显著的抑制作用,有良好的降低血糖和血脂的作用,同时肝脏P450含量与血糖具有一定的相关性。

咪达唑仑作为探针药物对急性白血病患儿细胞色素P450ⅢA酶活性的研究

目的探讨细胞色素P450ⅢA酶活性在急性白血病患儿中的个体间差异、影响因素以及活性的高低对化疗后产生肝功能损害的影响。方法对20例急性白血病患儿,5 min内静脉推注0.1 mg/kg咪达唑仑,并在开始推注后15、30、60、120、240和360 min时在对侧静脉抽取静脉血2 mL,分离血浆。应用高效液相色谱法检测咪达唑仑的血浆浓度,采用房室模型分析咪达唑仑的药代动力学参数,计算咪达唑仑的代谢清除率和曲线下面积,作为评估急性白血病患儿细胞色素P450ⅢA酶活性的指标。结果咪达唑仑代谢清除率女性([0.11±0.035)L.h-1.kg-1]高于男性([0.073±0.025)L.h-1.kg-1,=0.014]。急性非淋巴细胞白血病患儿的咪达唑仑代谢清除率[(0.085±0.024)L.h-1.kg-1]略低于急性淋巴细胞白血病患儿[(0.094±0.039)L.h-1.kg-1],但差距无显著性意义(=0.641)。9例高危急性淋巴细胞白血病患儿经过相同的化疗方案,化疗后发生肝功能损害的患儿,其化疗前咪达唑仑代谢清除率[(0.112±0.029)L.h-1.kg-1]低于未发生肝功能损害患儿化疗前[(0.208±0.07)L.h-1.kg-1,=0.026]。结论在急性白血病患儿中应用咪达唑仑作为细胞色素P450ⅢA酶活性探针是安全可行的。急性白血病患儿细胞色素P450ⅢA酶活性存在性别差异;急性白血病患儿细胞色素P450ⅢA酶活性能较好的反映其肝脏代谢化疗药物的能力。

Effects of experimental varicocele on mitochondria calcium and cytochrome C of epididymis in adolescent rats

Aim: To investigate the effect of experimental varicocele on mitochondrial calcium and cytochrome C of the epididymal cells in adolescent rats. Methods: Forty male adult Wistar rats were divided into two groups randomly: the varicocele group (VG) and the sham operated group (SOG). Varicocele was produced by partial ligation of the left renal vein. Bilateral epididymides were removed after ten weeks. The mitochondrial calcium and cytochrome C levels of the epididymal cells were determined. Results: The mi-tochondrial calcium was decreased (P<0.01) while the cytochrome C increased (P<0.05) markedly in the experimental group compared with the controls. Conclusion: Varicocele-induced calcium dyshomeostasis and mitochondrial damage of the epididymal cells may play an important role in causing subfertility.

补肾中药对雷公藤多苷所致生殖损伤雄性幼鼠血清睾酮及睾丸组织P450scc的影响

目的:研究雷公藤多苷(glycosides of Tripterygium wilfordii,GTW)对幼年雄性大鼠血清睾酮及睾丸组织中睾酮生成酶细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(cyto-chrome P450 side chain cleavage,P450scc)的影响以及补肾中药(菟丝子黄酮、六味地黄丸)对其损伤的干预作用。方法:3～4周龄SD雄性幼鼠48只,随机分为4组:空白组(CMC-Na)、多苷组(9 mg.kg-1.d-1)单独ig,六味组(六味地黄丸1 g.kg-1.d-1+GTW 9 mg.kg-1.d-1),黄酮组(菟丝子黄酮0.1 g.kg-1.d-1+GTW 9mg.kg-1.d-1)混合ig,持续给药12周后,处死大鼠留取血清和睾丸组织,采用放免法检测血清睾酮浓度;采用RT-PCR和Western blot检测睾丸组织中p450scc在基因和蛋白水平的表达。结果:GTW组与空白组相比可以明显降低血清睾酮(P<0.01);六味组与多苷组相比可以明显提高血清睾酮(P<0.05);在蛋白水平GTW与空白组相比可以明显降低睾丸组织P450scc(P<0.05);在基因水平GTW组与其他组比较无显著性差异。结论:GTW对幼年大鼠生殖系统有一定损伤作用;六味地黄丸可以通过提高雄鼠血清睾酮水平而达到保护生殖损伤的作用。

普萘洛尔侧链氧化与S-美芬妥英羟化酶活性间无相关(英文)

目的:了解健康志愿者S-美芬妥英(S-Mep)羟化酶(CYP2C19)与体内普萘洛尔(Pro)侧链氧化能力间的相关性.方法:14名健康的S-Mep强氧化代谢者分批分别口服单剂量消旋Mep 100 mg和消旋Pro 80 mg,分别用气相色谱和液相色谱方法定量分析人尿中S-和R-Mep、4＇-羟基美芬妥英(4＇-OH-M)、萘氧乳酸和人血浆中Pro的浓度.结果:0-8小时尿排泄的S/R比值和4＇-OH-M的1g D％均与Pro侧链氧化的部分代谢清除率不相关(r_s分别为-0.0484和-0.1077).结论:人的CYP2C19不是催化Pro侧链氧化代谢的主要的P-450酶.

κ-硒化角叉菜胶对大鼠红细胞膜流动性与封闭度的影响(英文)

通过测定大鼠红细胞膜荧光偏振度P和N A DH-细胞色素c氧化还原酶的变化,研究kappa-硒化卡拉胶对红细胞膜流动性和封闭度的影响。结果表明,kappa-硒化卡拉胶140mg·kg^(-1)·d^(-1)×30 d可显著降低大鼠红细胞膜荧光偏振度,即可显著提高细胞膜流动性(P<0.05),ig 140及70 mg·kg^(-1)·g^(-1)×30d可显著提高大鼠红细胞膜封闭度(P<0.05)。

基于转录组测序解析草地贪夜蛾对溴氰虫酰胺的解毒代谢分子机制

为阐明草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda对溴氰虫酰胺的解毒代谢分子机制,通过LC50的溴氰虫酰胺诱导草地贪夜蛾3龄幼虫后,利用酶活测定和转录组测序鉴定解毒代谢相关基因,并采用实时荧光定量PCR技术对细胞色素P450单加氧酶(cytochrome P450 monooxygenase,P450)基因进行验证分析。结果表明,经LC50的溴氰虫酰胺处理后,草地贪夜蛾3龄幼虫体内3种解毒代谢酶活性较对照均有所升高,但仅P450活性较对照显著升高,而谷胱甘肽S-转移酶和羧酸酯酶与对照无显著差异。经LC50的溴氰虫酰胺处理后草地贪夜蛾3龄幼虫转录组中共筛选到1408个差异表达基因,其中上调表达的基因有935个,下调表达的基因有473个。药物代谢-细胞色素P450通路、药物代谢-其他酶通路及细胞色素P450对异生物质的代谢通路中有超过20个基因存在差异表达。在草地贪夜蛾转录组中筛选鉴定到121个P450基因,其中,属于CYP2、CYP3、CYP4以及Mito家簇的基因分别有9、45、58和9个,而经LC50的溴氰虫酰胺诱导后有8个P450基因上调表达,实时荧光定量PCR验证结果显示其中有6个P450基因CYP321A8、CYP6B2、CYP6B7、CYP6B5、CYP4C1及CYP4D1表达量显著上调,这些都属于与害虫抗药性相关的CYP3和CYP4家簇基因。表明P450基因CYP321A8、CYP6B2、CYP6B7、CYP6B5、CYP4C1及CYP4D1可能在草地贪夜蛾对溴氰虫酰胺的解毒代谢中发挥着重要作用。