细胞色素P4502E1稳定转染Flp-In^(TM)CHO细胞模型的建立

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)的Flp-In^(TM)CHO细胞系,并进行药物相互作用筛选。方法利用Lipofectamine■2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2E1重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒-并转染Flp-In^(TM)CHO细胞,采用潮霉素B(500 mg/L)进行稳定性筛选、聚合酶链式反应(PCR)检测细胞中是否成功插入能够表达CYP2E1酶的目的基因、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中CYP2E1 mRNA和蛋白表达,采用对乙酰氨基酚(APAP)检测CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO空质粒组比较,PCR结果显示Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞分别在2000 bp、200 bp左右有CYP2E1酶目的基因的明显条带;qRT-PCR和Western blot结果显示,Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞的CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.001);APAP检测结果显示CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性也显著增强。结论成功构建了稳定表达CYP2E1的Flp-In^(TM)CHO细胞模型,且表达的CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性增强。

CYP2E1基因多态性与客家人群胃癌易感性的研究

目的：通过研究细胞色素P4502E1（CYP2E1）基因多态性位点rs2031920与客家人群胃癌遗传易感性的相关性，探讨遗传和环境因素在胃癌发病中的作用。方法采取病例-对照研究，选择经胃镜和病理检查确诊的梅州地区客家人群51例胃癌患者（胃癌组）和52例正常对照（对照组），对CYP2E1 rs2031920（C-1053T）位点进行基因型及等位基因检测，分析其在两组间的分布特征。结果CYP2E1 rs2031920位点在梅州地区客家人群中存在 CC、CT、TT 多态性，各基因型在胃癌组的分布频率为62．75％（32／51）、33．33％（17／51）、3．92％（2／51），在对照组的分布频率为59．62％（31／52）、34．61％（18／52）、5．77％（3／52），两组之间的差异无统计学意义（χ2＝0．235，P ＝0．889）。CYP2E1基因rs2031920位点的等位基因 C、T 在胃癌组和对照组构成比分别为79．41％（81／102）、20．59％（21／102）和76．92％（80／104）、23．08％（24／104），差异无统计学意义（χ2＝0．186，P ＝0．666）。经性别、年龄分层分析结果显示也无统计学意义（χ2＝4．412，P ＝0．129；χ2＝0．898，P ＝0．473）。结论 CYP2E1的基因多态性位点 rs2031920与客家人群胃癌的易感性不相关。

The Physiological Mechanism of Improved Formaldehyde Resistance in Petunia hybrida Harboring a Mammalian cyp2e1 Gene

Cytochrome P450 CYP2E1 is mainly present in hepatocytes in the livers of mammals,where it plays an important role in the metabolism of xenobiotic organic substances. Previous studies showed that transgenic petunia(Petunia hybrid) plants harboring a mammalian cyp2e1 gene(designated cyp2e1-transgenic petunia) exhibited increased resistance to formaldehyde stress. In this study,we used cyp2e1-transgenic petunia plants to analyze physiological indexes related to formaldehyde stress responses. The results indicated that under formaldehyde stress,the malondialdehyde content in cyp2e1-transgenic petunia plants was lower than in β-glucuronidase gene(gus)-transgenic and wild-type petunia plants. The activities of both superoxide dismutase and peroxidase in the cyp2e1-transgenic plants were higher than in gus-transgenic and wild-type plants. The alcohol dehydrogenase activity was slightly increased and more glutathione was consumed. Additionally,under formaldehyde stress,the levels of plant hormones including indole-3-acetic acid,zeatin and abscisic acid in cyp2e1-transgenic petunia plants displayed decreasing trends,whereas the level of gibberellic acid displayed an increasing trend. In contrast,the indole-3-acetic acid,zeatin and abscisic acid levels in gus-transgenic and wild-type petunia plants displayed increasing trends,whereas the gibberellic acid level displayed a decreasing trend. At 72 h after incubation of 0.5 g of cyp2e1-transgenic petunia plants in 40 mL of treatment solution containing formaldehyde at 50 mg·L^(-1),the formaldehyde content remaining in the treatment solution was close to zero while approximately half of original formaldehyde remained in the treatment solutions containing gus-transgenic and wild-type petunia plants.

吸烟患者细胞色素P450酶2E1的表达与七氟醚阻断肾上腺素能反应最低肺泡气浓度的相关性研究

目的 通过检测吸烟患者细胞色素P450酶2E1（cytochrome P450 family 2 subfamily E member 1， CYP2E1）含量变化，分析其与七氟醚阻断肾上腺素能反应的最低肺泡气浓度 （minimum alveolar concentration to block the adrenergic response， MACBAR）值的相关性，探讨吸烟对七氟醚MACBAR值的影响及机制。 方法 选择ASA分级Ⅰ、Ⅱ级，年龄30~50岁，择期拟在全身麻醉下行腹腔镜胆囊切除术的患者90例。通过询问患者本人及其家属评估两组患者吸烟情况，同时结合血清可替宁含量，将其分为吸烟组（A组，49例）和非吸烟组（B组，41例）。采用快诱导气管内插管静吸复合麻醉，两组患者七氟醚目标呼气末浓度平衡时间＞20 min，使用气腹刺激，观察MAP和HR变化，采用单次刺激法测定七氟醚MACBAR。手术前1 d抽取患者晨起静脉血5 ml，离心收集血清，检测可替宁和CYP2E1含量。 结果 A组、B组诱导前HR和MAP组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；组内HR和MAP基础值（气腹针穿刺前3 min、1 min的平均值）比诱导前明显下降（P〈0.05）；气腹后HR和MAP明显上升，其中MAP在 A组升高幅度大于B组（P〈0.05），HR组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。A组七氟醚MACBAR、CYP2E1和可替宁水平均高于B组（P〈0.05）。A组CYP2E1含量与MACBAR有相关性，且呈正相关（r=0.51，P〈0.05）。 结论 吸烟患者CYP2E1含量与七氟醚MACBAR值有一定相关性，提示吸烟者血清中CYP2E1可能对七氟醚MACBAR值有影响。