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Genome-wide identification and analysis of cytokinin dehydrogenase/oxidase(CKX) family genes in Brassica oleracea L.reveals their involvement in response to Plasmodiophora brassicae infections 被引量:3
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作者 Mingzhao Zhu Yong Wang +6 位作者 Shujin Lu Limei Yang Mu Zhuang Yangyong Zhang Honghao Lv Zhiyuan Fang Xilin Hou 《Horticultural Plant Journal》 SCIE CSCD 2022年第1期68-80,共13页
Cytokinins are a class of phytohormones that promote cell division and differentiation and are thought to affect plant immunity to multiple pathogens.However,a comprehensive analysis of cytokinin dehydrogenase/oxidase... Cytokinins are a class of phytohormones that promote cell division and differentiation and are thought to affect plant immunity to multiple pathogens.However,a comprehensive analysis of cytokinin dehydrogenase/oxidase(CKX)family genes in cabbage has not been reported.In this study,a total of 36 CKX genes were identified using a genome-wide search method.Phylogenetic analysis classified these genes into three groups.They were distributed unevenly across nine chromosomes in B.oleracea,and 15 of them did not contain any introns.The results of colinearity analysis showed that 36 CKX gene in Arabidopsis was present in several copies in the Brassica oleracea genome.An analysis of cisacting elements indicated that all genes possessed at least one stress or hormone responsive cis-acting element.A heatmap of CKX gene expression showed the patterns of expression of these genes in various tissues and organs.Three genes(Bol028363,Bol031036 and Bol018140)were relatively highly expressed in all of the investigated tissues under normal conditions,showing the expression profile of housekeeping genes.Generally,the expression patterns of CKX genes in Jingfeng 1 and Xiangan 336 were quite different under the same treatment.Notably,three genes(Bol020547,Bol028392 and Bol045724)were significantly down-regulated and up-regulated in the susceptible and resistant material,respectively,after inoculation,which may indicate their crucial roles in resistance to clubroot disease.The results provide insights for better understanding the roles of CKX genes in the B.oleracea–P.brassicae interaction. 展开更多
关键词 Brassica oleracea GENOME-WIDE cytokinin dehydrogenase/oxidase(CKX)genes CLUBROOT
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利用pHDE-Cas9构建巨桉CTX基因家族CRISPR载体 被引量:2
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作者 李莉梅 张婷婷 +5 位作者 欧阳乐军 陈自银 陈凯钊 刘雅丽 尹爱国 布良灏 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期411-417,共7页
【目的】利用高效基因编辑系统(p HDE-Cas9)构建巨桉细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(CTX)基因家族规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)载体,为开展巨桉CTX基因家族功能验证研究打下基础。【方法】设计巨桉CTX基因靶位点和引物,扩增p CBC质粒上... 【目的】利用高效基因编辑系统(p HDE-Cas9)构建巨桉细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(CTX)基因家族规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)载体,为开展巨桉CTX基因家族功能验证研究打下基础。【方法】设计巨桉CTX基因靶位点和引物,扩增p CBC质粒上的目的片段,BsaⅠ酶切p HDE载体并与目的片段连接形成重组质粒,转化DH5α感受态细胞。提取单克隆进行菌液PCR初步验证、重组质粒PCR验证,挑选阳性克隆质粒进行测序分析,构建CTX基因家族CRISPR载体。【结果】重组质粒PCR鉴定及测序结果表明,重组载体序列无突变,与预期序列高度一致。成功构建了巨桉CTX基因家族p HDE-CTXA、p HDE-CTXB和p HDE-CTXC同源表达载体。【结论】利用p HDE-Cas9成功构建了巨桉CTX基因家族CRISPR载体,构建过程快速、高效,为桉树基因组定点编辑打下了基础,也可为其他桉树CRISPR/Cas9表达载体的构建提供借鉴。 展开更多
关键词 巨桉 规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR) 细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(ctx) 载体构建
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小麦细胞分裂素氧化/脱氢酶基因(TaCKX5)的克隆及其染色体定位 被引量:9
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作者 张磊 张宝石 +3 位作者 周荣华 孔秀英 高丽峰 贾继增 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期636-642,共7页
【目的】克隆小麦的TaCKX基因并对其序列进行生物信息学分析,明确TaCKX基因在小麦基因组中的分布情况,以期为今后深入研究小麦CKX基因以及利用该基因进行小麦重要农艺性状的遗传改良奠定基础。【方法】采用同源克隆结合BAC文库筛选的方... 【目的】克隆小麦的TaCKX基因并对其序列进行生物信息学分析,明确TaCKX基因在小麦基因组中的分布情况,以期为今后深入研究小麦CKX基因以及利用该基因进行小麦重要农艺性状的遗传改良奠定基础。【方法】采用同源克隆结合BAC文库筛选的方法克隆基因,通过小麦缺体-四体对其进行染色体定位。【结果】从普通小麦中国春中分离得到TaCKX5基因的gDNA和cDNA序列。分析表明,TaCKX5基因的开放阅读框为1596bp,编码531个氨基酸,含有CKX基因家族典型的功能位点FAD-binding domain,预测属于分泌蛋白,并具有糖基化位点。使用中国春缺体-四体将TaCKX5定位于小麦第三同源群。系统发育分析表明,CKX基因在植物中较为保守,禾谷类作物中直向同源的CKX基因很可能具有相似的特性与功能。【结论】分离获得了普通小麦TaCKX5基因全长,TaCKX5分布于小麦染色体3A、3B、3D上,与水稻OsCKX5基因直向同源。 展开更多
关键词 小麦 细胞分裂素氧化/脱氢酶 基因克隆 染色体定位
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小麦细胞分裂素氧化/脱氢酶基因(TaCKX2)的克隆及其遗传作图 被引量:6
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作者 张磊 张宝石 +4 位作者 周荣华 高丽峰 赵光耀 宋彦霞 贾继增 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1419-1425,共7页
细胞分裂素几乎参与调控了植物生活周期中所有的生长发育过程,细胞分裂素氧化/脱氢酶(CKX)是降解细胞分裂素的关键酶。本研究采用同源克隆结合文库筛选的方法,分离得到普通小麦的TaCKX2基因(与水稻OsCKX11直向同源),针对基因序列开发出... 细胞分裂素几乎参与调控了植物生活周期中所有的生长发育过程,细胞分裂素氧化/脱氢酶(CKX)是降解细胞分裂素的关键酶。本研究采用同源克隆结合文库筛选的方法,分离得到普通小麦的TaCKX2基因(与水稻OsCKX11直向同源),针对基因序列开发出SSR标记TaCKX2-SSR,使用缺体-四体和RILs群体将TaCKX2定位于7B、7D染色体。分离得到的TaCKX2基因及其作图信息将为今后进行小麦CKX基因的功能研究以及小麦重要农艺性状的遗传改良奠定基础。 展开更多
关键词 小麦 细胞分裂素氧化/脱氢酶 基因克隆 染色体定位 遗传作图
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基于CRISPR/Cas9的拟南芥CKX3基因编辑载体构建及转化研究 被引量:1
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作者 王泽琛 肖荣 +4 位作者 欧阳乐军 李莉梅 梁楚炎 潘璟茵 刘智超 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1015-1022,共8页
细胞分裂素(cytokinin,CK)是参与植物生长发育过程中的关键激素,在植物生长、发育过程起着非常重要作用。细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(cytokinin oxidase/dehydrogenase,CKX)是一种不可逆降解细胞分裂素为腺嘌呤/腺苷的黄素酶,作为细胞分... 细胞分裂素(cytokinin,CK)是参与植物生长发育过程中的关键激素,在植物生长、发育过程起着非常重要作用。细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(cytokinin oxidase/dehydrogenase,CKX)是一种不可逆降解细胞分裂素为腺嘌呤/腺苷的黄素酶,作为细胞分裂素信号中降解分支的关键酶,对于维持植物体内的细胞分裂素平衡有着重要作用,有效的控制了植物内源细胞分裂素的水平。选取拟南芥CKX3为目标基因,通过含有拟南芥种皮重组启动子与荧光筛选标记基因mCherry的CRISPR/Cas9载体,来进行高效的拟南芥CKX3基因编辑载体构建并转化拟南芥。利用倒置荧光显微镜筛选具有红色荧光的T0代种子并种植培养获得T1代植株。提取T1代植株基因组进行PCR鉴定和测序分析,鉴定纯合突变后代的性状表型及激素测定。结果表明,本实验成功构建了编辑载体pHEE401E-mCherry-CKX3,拟南芥转化后代中目标基因成功被高效编辑,CKX3的纯合突变植株表型与野生型差异明显,内源激素含量差异达到显著水平。为研究CKX基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 细胞分裂素 氧化酶 脱氢酶 基因编辑 MCHERRY CRISPR/Cas9
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太子参细胞分裂素氧化/脱氢酶基因PhCKX的克隆及表达分析 被引量:3
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作者 张晨 郑伟 +4 位作者 周涛 李军 龙登凯 龚安慧 江维克 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第19期6242-6249,共8页
本研究采用同源克隆的方法分离得到太子参Ph CKX基因的cDNA序列,并对其序列进行生物信息学分析,分析表明,PhCKX基因的开放阅读框为1 611 bp,编码536个氨基酸,理论等电点为9.02,相对分子质量为61 kD,跨膜分析显示其为膜蛋白,含有CKX基因... 本研究采用同源克隆的方法分离得到太子参Ph CKX基因的cDNA序列,并对其序列进行生物信息学分析,分析表明,PhCKX基因的开放阅读框为1 611 bp,编码536个氨基酸,理论等电点为9.02,相对分子质量为61 kD,跨膜分析显示其为膜蛋白,含有CKX基因家族典型的功能位点FAD结合域和CTK结合域,并具有糖基位点。实时荧光定量PCR分析显示,太子参Ph CKX在块根发育初期表达量最高,随着块根的膨大,表达量逐渐降低。ABA激素处理后,Ph CKX的表达量呈现先上升后下降的趋势,生长中期达到最大;在GA3处理下,PhCKX的表达量则呈现先下降后上升的趋势。我们推测PhCKX的变化可能造成内源CTK含量的变化,ABA和GA3对内源CTK变化的调节作用说明ABA、GA3和CTK之间的激素平衡调节是太子参块根膨大的重要因素。本研究为细胞分裂素对太子参块根膨大及植物对环境刺激响应的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 太子参 细胞分裂素氧化/脱氢酶 基因克隆 表达分析
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