不同产地龙脑樟枝叶化学成分分析及体外抑菌研究

龙脑樟为目前国内提取天然冰片效益最高的植物,为助力其道地产区的确定,本研究根据龙脑樟的习性,拟选取国内8个产地的龙脑樟枝叶为材料,采用水蒸汽蒸馏法分别提取天然冰片;通过气质联用法(GC-MS)测定其中化学成分的相对含量;通过纸片法测定其对大肠杆菌、伤寒沙门氏菌以及肠炎沙门氏菌的抑菌圈直径;运用96微量孔板测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:各个产地龙脑樟枝叶提取的天然冰片中化合物含量具有差异性,其中以右旋龙脑、樟脑、d-柠檬烯、α-葎草烯、4-萜烯醇、桉叶油醇、莰烯以及d-α-蒎烯等为共有成分,且以右旋龙脑含量最高,樟脑次之,各产地中以湖北远安的右旋龙脑含量最高(82.47%),以广东乳源的右旋龙脑含量最低(41.63%);各个产地提取的天然冰片对3个供试菌种均有一定抑菌作用,且抑菌圈直径范围为14.60~27.95 mm;最低抑菌浓度(MIC)范围为250~1250μg/mL;最低杀菌浓度(MBC)范围为0~1000μg/mL,总体以湖北远安和江西吉水的综合抑菌效果最佳,广东乳源最差。由此可见,右旋龙脑含量最高的产地抑菌效果最佳,反之抑菌效果欠佳,因此,龙脑樟枝叶提取物的抑菌活性与其主要成分含量有一定相关性,本研究为龙脑樟枝叶提取物的品质评价及天然冰片的资源开发提供依据。

基于转录组学探讨右旋龙脑对顺铂耐药非小细胞肺癌的增敏作用及机制

目的采用转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)技术挖掘右旋龙脑联合顺铂对顺铂耐药的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞的作用关键靶点,并验证其机制。方法将顺铂耐药的人大细胞肺癌细胞(H460/CDDP)接种于4周龄雄性BALB/c裸鼠右侧腋下,构建异种移植肿瘤模型,将其分为对照组、溶剂组、顺铂组、联用组(右旋龙脑+顺铂),每组6只,药物干预14 d。末次给药24 h后,取肿瘤组织,转录组测序;实时反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法(IHC)检测细胞周期相关分子表达。结果顺铂组与联用组在基因表达水平存在差异,且明显富集于细胞周期。RT-PCR和IHC结果显示,右旋龙脑联合顺铂组能明显抑制细胞周期蛋白(CCNA2,CCND3)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2,CDK6)的表达量,并促进其上游分子细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂CDKI(P21,P27)的表达(P<0.05,P<0.01)。结论右旋龙脑联合顺铂通过上调P21、P27表达,抑制cyclinA2/D3及CDK2/6表达,诱导细胞周期阻滞,抑制H460/CDDP细胞的恶性增殖,进而达到抗耐药增敏的作用。

基于转录组数据挖掘阴香右旋龙脑生物合成相关基因

右旋龙脑又名天然冰片,是珍贵的传统中药材和高级香料,具有抗菌、消炎、促进药物透过血脑屏障等作用。为阐明右旋龙脑的生物合成途径,收集了2种化学型的阴香,利用Illumina Novaseq测序平台进行转录组测序,使用Trinity软件对Clean reads进行组装,共获得40449条Unigene,N 50长度为1679 bp,Q 30质量值均在92%以上,说明测序质量较好,可用于后续分析。分别有23613(58.38%)、21743(53.75%)、16372(40.48%)、15384(38.03%)、17993(44.48%)、19753(48.83%)个基因在NR、eggNOG、Swiss-Prot、KEGG、Pfam、GO数据库获得注释。KEGG富集分析表明,柠檬烯和蒎烯降解、二苯醚类、二芳庚烷类和姜辣素生物合成被富集,类黄酮生物合成、苯基丙烷生物合成、二萜生物合成等次生代谢物质的合成通路也被富集。GO分析发现,生物学过程类别主要集中在生物过程、转录,DNA模板化;细胞组分类别主要涉及细胞核、细胞质、质膜等细胞组分;分子功能类别主要集中在分子功能、蛋白质结合和序列特异性DNA结合。鉴定出参与右旋龙脑生物合成相关酶基因38个,包括35个参与萜类骨架生物合成有关的酶基因,3个单萜合酶基因,其中MEP途径可能编码5种酶的7个基因和MVA途径可能编码4种酶的7个基因表达量上调。此外与单萜生物合成相关的5个转录因子(bHLH家族2个、MYB家族1个、bZIP家族1个)显著上调。

阴香叶片精油中右旋龙脑含量近红外预测模型构建研究

为建立阴香Cinnamomum burmannii叶片中精油右旋龙脑含量的近红外光谱预测模型,使用波通(PERTEN)公司的DA7250近红外光谱分析仪,在950~1650 nm的光谱范围内,分析了76个阴香叶片样本的光谱数据,经过光谱预处理,并比较选择最佳预处理方法、最佳光谱波段范围和最佳主成分数,采用偏最小二乘法(PLS)建立阴香叶片精油中右旋龙脑含量近红外光谱模型。结果表明:采用一阶导数-标准正态变量转换法(FD-SNV)对光谱进行预处理且当最佳主成分数为16时,得到最优模型,其校正集均方根误差(RMSEC)为7.4071,校正集相关系数(R_(C))为0.9314,交互验证集均方根误差(RMSEV)为13.4822,交互验证集相关系数(R_(V))为0.7759。说明预测值与测量值具有显著的相关性,该预测模型具有一定的准确性,可以用于阴香叶片精油中右旋龙脑含量进行快速预测。

龙脑樟鲜叶挥发油成分及其抗菌活性的研究

目的:研究龙脑樟鲜叶中挥发油的化学成分和抗菌活性。方法:采用水蒸汽蒸馏法提取龙脑樟叶中挥发油;通过气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析挥发油化学成分;采用K-B纸片琼脂扩散法和微量肉汤稀释法分别测其对细菌、酵母菌和霉菌的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC值),以评估挥发油的抑菌性能。结果:GC-MS结果表明该挥发油有27种组成成分,占整个挥发油的98.14%,其中以右旋龙脑(81.58%)、樟脑油(2.96%)和α-蒎烯(2.03%)为主要成分;该挥发油及其主要成分右旋龙脑对实验所选的细菌、酵母菌和霉菌三类微生物均表现出一定的抗菌效果。其中,挥发油对所测菌的抑菌直径范围为(9.21±0.6)～(22.12±1.30)mm,而右旋龙脑组分对所测菌的抑菌直径范围为(7.32±0.5)～(20.42±1.40)mm;对应两种物质对所测菌的最低抑菌浓度(MIC值)范围分别为(31.25～125)μg/mL和(62.5～125)μg/mL。结论:该研究为龙脑樟叶的综合利用及天然右旋龙脑药用资源的研究开发提供参考依据。

江西吉安龙脑樟资源开发与利用前景

龙脑樟是江西省吉安市20世纪80年代发现并发展起来的一个特有的樟树新化学类型,到目前为止,在吉安市青原山区及临近各县已经栽培了360hm2。着重介绍了龙脑樟树的繁育、天然d-龙脑的提取及其应用等问题。龙脑樟作为一种珍贵的药材和香料原料,具有广阔的开发利用前景。

梅片树中高纯度右旋龙脑制备及其性质表征

通过水蒸气蒸馏法从梅片树叶中提取挥发油,冷冻、离心得粗右旋龙脑,用石油醚、120号汽油和无水乙醇分别进行重结晶,得到高纯度右旋龙脑晶体,并对晶体的成分、旋光性、形态和热性能进行了表征。结果表明,梅片树树叶挥发油中右旋龙脑含量为68.10%;重结晶后纯度达98%以上,质谱图分析结果和标准品基本一致,旋光度也相近;石油醚和120号汽油重结晶晶体呈规则六边形大片状,边界清晰,无水乙醇重结晶晶体形状不规则,呈分散或团聚的小颗粒状,但两者的热分析结果基本相同,说明重结晶晶体形貌不影响其热性能。右旋龙脑晶体非等温结晶过程中,莫志深方程能很好地描述右旋龙脑的非等温结晶动力学。本实验结果可为梅片树的综合利用及高纯度天然右旋龙脑新资源的研究开发提供参考。

高纯度天然右旋龙脑的制备研究

以樟树[Cinnamomumglanduliferum(Wall)Nees]枝叶为原料经水蒸气蒸馏、升华得到70%～80%粗d 龙脑。为制备高纯度天然d 龙脑,进行了不同溶剂、不同溶剂量、结晶次数和结晶时间对d 龙脑纯度影响的研究。并用GC、GC/MS分析鉴定所制备的天然d 龙脑,用扫描电子显微镜观察d 龙脑结晶过程中晶体的结构变化。结果表明,汽油是结晶d 龙脑最好的溶剂,当物料比为1∶1.7～2.0、结晶时间4d以上时,天然d 龙脑的纯度可达99%以上。精制天然d 龙脑产品的分析数据为:外观白色片状结晶,右旋龙脑含量>99%,旋光度[α]20D>+37°,熔点205～209℃,重金属<5×10-6,砷(As)<2×10-6。

梅片树叶挥发油和天然右旋龙脑的抑菌性能研究

目的:研究梅片树叶挥发油、天然右旋龙脑的体外抗菌性能。方法:采用K-B纸片琼脂扩散法测定梅片树叶挥发油、天然右旋龙脑和合成龙脑对细菌、植物病原真菌和动物源真菌的抑菌圈大小,并采用琼脂稀释法测定其最小抑菌浓度(MIC值)。结果:梅片树叶挥发油、天然右旋龙脑和合成龙脑有不同程度的抑菌作用,天然右旋龙脑和合成龙脑抑菌作用相似,梅片树叶挥发油的抑菌效果比较明显。结论:梅片树叶挥发油和天然右旋龙脑均有一定的抑菌活性,具有广阔的开发利用前景。

手性毛细管柱气相色谱法测定冰硼散中冰片的含量

目的建立手性毛细管柱气相色谱法同时测定冰硼散中异龙脑、左旋龙脑、右旋龙脑的含量。方法采用气相色谱法、手性毛细管柱;柱温为120℃;进样口温度200℃;检测器温度220℃。结果右旋龙脑在0.01～0.39mg.mL-1与峰面积线性关系良好,r=0.999 9;左旋龙脑在0.01～0.38mg.mL-1与峰面积线性关系良好,r=1.000 0;异龙脑在0.01～0.40mg.mL-1与峰面积线性关系良好,r=1.000 0。结论该方法快速,准确,精密度高,可测定以各种"冰片"投料生产的冰硼散中冰片的含量。

碱金属/THF体系不对称还原樟脑制备右旋龙脑

利用樟脑还原中间产物的分子热力学稳定性差异,在碱金属/THF(四氢呋喃)体系中进行樟脑的不对称还原研究,考察碱金属用量、溶剂用量、反应时间和反应温度对反应的影响.结果表明,最优反应条件为碱金属与樟脑的量比为2.8,溶剂用量与樟脑的量比为22.5,反应时间为3 h,反应温度为25℃.在此条件下,反应所得樟脑转化率为93%,右旋龙脑产率为72%.

超声强化水蒸气蒸馏法提取天然右旋龙脑

利用实验室自主研制的超声强化水蒸气蒸馏装置从梅片树叶中提取天然右旋龙脑,气相色谱法测定右旋龙脑的含量。结果表明:超声波能有效强化水蒸气蒸馏效果,其最佳工艺参数是:超声电功率400W,超声作用时间1h,投料比为0.2kg/L。在此条件下,挥发油得率可达到1.18%,右旋龙脑的纯度达到60.6%。

天然脑粉不对称还原制右旋龙脑

利用樟脑还原中间产物的分子热力学稳定性的差异,在还原体系还原剂S/无水乙醇中进行樟脑的不对称还原,考察还原剂用量、溶剂用量和反应温度对反应的影响.结果表明,最佳反应条件为还原剂S与樟脑量的比为2.8,溶剂用量为15.5,反应时间为40 min,利用这种方法还原樟脑,主产物为右旋龙脑,副产物为异龙脑,两者的比例几乎固定不变.研究还表明,在该体系中还原樟脑,反应温度易于控制,反应条件比较温和,反应产物收率较高,反应所得樟脑最高转化率为78%,右旋龙脑最高产率为66%.

丹参素冰片酯乳剂中丹参素冰片酯和冰片的含量测定

目的建立可行的丹参素冰片酯(DBZ)乳剂中DBZ和冰片的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定丹参素冰片酯,色谱柱采用Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.2%甲酸水(65∶35)为流动相,检测波长为280 nm。采用气相色谱法测定冰片,HP-1毛细管柱(30.0 m×0.32 mm×0.25μm),进样口温度为260℃,检测器温度为260℃。结果丹参素冰片酯与杂质峰分离良好,线性范围为0.01～1.00 g/L(R2=0.999);乳剂样品中丹参素冰片酯的含量为4.75 g/L,冰片与杂质峰分离良好,质量浓度线性范围为0.001～0.050 g/L(R2=0.999),乳剂样品中冰片未检出。结论所采用方法准确、灵敏、专属性好,可用于丹参素冰片酯乳剂中丹参素冰片酯和冰片含量的测定。

梅州香樟挥发油成分及其脂质体凝胶的制备

目的:探究梅州香樟挥发油成分及其脂质体凝胶的制备。方法:采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析梅州香樟挥发油中的成分,通过薄膜分散法制备其脂质体,以羧甲基纤维素钠为基质制备脂质体凝胶。结果:GC-MS结果显示梅州香樟挥发油主要以右旋龙脑(78.56%)、樟脑油(21.07%)为主要成分;该挥发油脂质体凝胶包封率为84.6%(n=3),平均粒径为135.1nm。结论:梅州香樟挥发油中主要成分为右旋龙脑,制得其脂质体凝胶质量良好,该实验为梅州香樟的综合利用及进一步药用开发提供科学的参考依据。

天然脑粉二次还原精制右旋龙脑

根据化学平衡理论，提出了还原剂A／无水乙醇体系二次还原精制龙脑的工艺，并且考察了还原剂A用量和溶剂用量对樟脑二次还原的影响。经二次还原，樟脑转化率及龙脑产率都得到了较大提高。在本文的最佳反应条件下，还原剂A／无水乙醇体系二次还原所得的最高樟脑转化率和龙脑产率分别为93％和81％。二次还原法具有反应时间短，反应条件温和，产物收率和产物纯度高，经济效益高，绿色环保等优点。

常压下氧化镍催化樟脑不对称合成冰片工艺优化研究

根据镍金属加氢反应中活性较高、不对称选择性好的特点,采用氧化镍/无水乙醇体系进行樟脑不对称还原合成右旋冰片。考查了催化剂用量、樟脑用量、反应温度、反应时间及氢氧化钾/溴化钠用量等因素对冰片产率的影响。实验表明,在催化剂用量为5. 2 mmol,樟脑用量为6. 6 mmol,反应温度为50℃,反应时间为5 h,氢氧化钾/溴化钠的加入量摩尔比为12. 8∶1的条件下,合成右旋冰片产率最高。

天然冰片重复升华质量降低的原因分析

通过对冰片的重复升华及投料量的不同,测定其产品主、副成分含量变化以找出产品质量降低的原因。

龙脑樟幼茎愈伤组织的诱导

以龙脑樟Cinnamomum camphora chvar.Borneol组培苗幼茎为材料诱导优良愈伤组织,采用正交设计法,以愈伤组织的出愈时间、诱导率、生长状态、鲜重生长指数和右旋龙脑含量为指标,筛选最适培养基,尤其是培养基中最佳生长调节剂组合,为利用龙脑樟细胞悬浮培养调控右旋龙脑提供理论依据。结果表明,龙脑樟组培苗幼茎诱导愈伤组织的最适培养基为MS+2,4-D 2 mg·L-1+6-BA 0.6 mg·L-1,右旋龙脑的提取产量为2.6698μg·g-1 DW。

GC法测定天然冰片中的d-龙脑和樟脑

采用GC法测定天然冰片中的d-龙脑和樟脑的含量。分析柱为CP-WAX毛细管柱<30 m×0.32 mm×0.5μm>;升温程序为50℃,以5℃/min升温到100℃,保持1 min,再以10℃/min快速升温到180℃,保持5 min,进样流速比5∶1;FID检测器温度为250℃;进样口温度为200℃,载气为高纯氮气,体积流量为2 m L/min;空气体积流量为300 m L/min;氢气体积流量为30 m L/min;进样量为1μL。本方法操作简便、准确,精密度、分离度良好、分析时间短,为天然冰片的测定及其质量控制提供参考。