应用MALDI-TOFMS检测5种白血病细胞株DCK和CDA基因部分单核苷酸多态性

目的:检测5种白血病细胞株中脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,DCK)和胞苷脱氨酶(cytidine deaminase,CDA)基因的单核苷酸多态性。方法:培养人红白血病细胞株K562,人慢性粒细胞白血病细胞株Ka,人急性髓系白血病细胞株HL-60、U937,人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取基因组DNA,设计引物,PCR扩增相应目的片段,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOFMS)检测DCK基因A674G(rs111454937)、C1644T(rs72552079),CDA基因A79C(rs2072671)、G208A(rs60369023)的单核苷酸多态性。结果:5种细胞株DCK基因A674G(rs111454937)均为A/A纯合子型,C1644T(rs72552079)均为C/C纯合子型。HL-60、U937、Raji细胞株CDA基因A79C(rs2072671)为A/A纯合子,K562、Ka细胞株为C/A杂合子;5种细胞株CDA基因G208A(rs60369023)均为G/G纯合子型。结论:CDA基因的A79C(rs2072671)SNPs位点基因型在5株血液系统肿瘤细胞株中不尽相同,余所测3个SNPs位点基因型在各细胞株中均相同。

脱氧胞苷激酶Ser-74位点在辐射诱导的乳腺癌细胞死亡中的作用

目的研究脱氧胞苷激酶（dCK）S74位点在辐射诱导乳腺癌细胞MCF-7死亡中的作用。方法采用脂质体转染方法在MCF-7中分别构建dCK—Vector（空载体）、dCK—WT（野生型）、dCK-S74A（非磷酸化型）及dCK-S74E（过磷酸化型）4种细胞模型，均分别予以0，2，4，6和8GyX射线照射。实时定量PCR（QPCR）及Westernblot验证细胞模型，CCK-8法和集落形成实验检测细胞存活率，单丹磺酰尸胺（MDC）检测自噬发生率，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建4种细胞模型；CCK_8结果显示，与0Gy组相比，MCF-7和dCK—Vector经8Gy照射后存活率下降（t=14．469和9．357，P〈0．05），dCK-WT、dCK-S74E和dCK-S74A没有改变（P〉0．05）；与dCK-Vector比较，dCK-wT和dCK．$74E照射后的总死亡率降低（X2=3．857～3．971和3．857—3．859，P〈0．05），dCK-S74A则没有变化（P〉0．05）；与各自0Gy组比较，MCF7、dCK—Vector和dCK-S74A照射后凋亡发生率升高（t=-4．531、-3．688和-7．076，P〈0．05），而dCK—wT和dCK-S74E使照射诱导的凋亡率逆转了66％和68％；dCK—wT和dCK-S74E照射后自噬率分别增加22％和26％（f=-9．051和-8．411，P〈0．01），dCK-S74A、MCF-7和dCK—Vector照射后的自噬率没有明显变化（P〉0．05）。结论riCK-WT和dCK-S74E使电离辐射诱导的凋亡率增加发生逆转，同时使自噬率增加，总死亡率降低，提示dCK在Ser．74的磷酸化与乳腺癌细胞MCF-7的辐射敏感性有关。