比较两种转录激活系统对生殖相关基因的表达调控

运用由CRISPR/Cas9技术延伸的两种转录激活系统Cas9-p300和dCas9-VPR分别激活生殖特化相关基因,比较它们针对生殖细胞特化基因的激活效率。实时荧光定量PCR结果表明,这两种激活系统均可激活大部分目的基因的表达。其中, Cas9-p300系统激活BLIMP1基因的效率更高, dCas9-VPR系统激活NANOS2、DAZL、SOX17基因的效率更高,两种系统在激活DDX4、TFAP2C基因时效率无显著性差异。由此,本研究通过比较Cas9-p300和dCas9-VPR转录激活系统调控生殖特化相关基因的表达,揭示了不同的转录激活系统在激活生殖特化相关基因时的不同效率,这将为利用转录激活系统研究生殖细胞分化提供理论基础,也将为研究其他发育系统中细胞命运的转变提供借鉴。

利用CRISPRa技术提高乳酸克鲁维酵母凝乳酶分泌表达

乳酸克鲁维酵母因其可靠的食品安全性被广泛应用于工业酶制剂生产,利用高通量的基因调控技术,如基于CRISPR-dCas9的基因表达激活平台(CRISPR activation,CRISPRa)是进一步促进酶制剂产量提高的最有效方法。本研究将激活因子VPR和LAC9分别与dCas9融合,针对P_(LAC4)启动子上游区域序列设计gRNA,引导dCas9-激活因子融合蛋白对其进行特异性结合,促进RNA聚合酶在该区域的聚集,驱动受P_(LAC4)启动子调控的凝乳酶表达。结果显示,dCas9-VPR与dCas9-LAC9的融合形式可分别将凝乳酶表达量提高1.67倍和1.65倍。本研究为利用乳酸克鲁维酵母进行工业酶制剂生产提供了有效的工具。