dUTP/UDG反应体系在荧光定量PCR中抗污染能力评价

目的 探讨dUTP/UDG反应体系在荧光定量PCR中抗PCR产物污染的能力。方法 用TaqMan荧光定量PCR检测方法进行定量检测。将一系列不同浓度的含dUTP的HBV DNA PCR扩增产物作为污染源 ,分别加至含dUTP/UDG的PCR反应体系和普通荧光定量PCR反应体系中 ,在荧光定量PCR仪上进行定量检测 ,从而得出含dUTP/UDG的PCR反应体系的抗污染能力。结果 1.最佳抗污染实验条件 :UDG酶含量 0 .0 5U ,消化时间 37℃ 5min ,灭活时间 92℃ 1min ;dUTP10 0 %代替dTTP ,四种底物浓度相等。 2 .含 0 .0 5U的UDG抗污染反应体系对每管浓度为 10 3 拷贝 /ml的污染物可完全消化 ,并随UDG含量的增高及消化时间的延长 ,抗污染能力增强。结论 dUTP/UDG反应体系的应用能有效防止PCR产物污染 ,但抗污染能力是有一定限度的 ,尚需加强实验室标准化管理 ,才能真正达到抗污染效果。