HPLC-DAD法测定康复新液中10种抑菌剂含量

目的:建立同时测定康复新液中10种抑菌剂的高效液相色谱分析方法。方法:采用Thermo Acclaim TM 120(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%冰醋酸-0.02 mol·L^(-1)乙酸铵溶液和甲醇,梯度洗脱,流速为1 mL·min^(-1),扫描波长为200~700 nm。结果:在相应的浓度范围内,10种抑菌剂质量浓度与峰面积的线性关系良好,r≥0.9998;精密度试验良好,RSD在0.33%~0.38%;重复性试验与稳定性试验的RSD<0.5%,加标回收范围为97.4%~101.1%,RSD在0.4%~1.8%之间。按拟定方法测试样品苯甲酸含量在0.15%~0.34%范围,山梨酸含量在0~0.48%范围,羟苯乙酯含量在0~0.02%范围、羟苯丙酯含量再0~0.02%范围。结论:该方法灵敏快速、专属性强、准确度高,可用于康复新液中抑菌剂的含量测定。

HPLC-DAD法测定草鱼肉质中的维生素B_(1)和维生素B_(12)的含量

本文建立了高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)同时分离检测草鱼肉质中维生素B_(1)和维生素B_(12)的方法。草鱼样品经过酸消化和酶提取后释放出样品中蛋白结合和磷酸化的维生素B_(1)和维生素B_(12),再经固相萃取净化,结合HPLC-DAD对两种目标物进行检测。考察了高效液相色谱条件中流动相组成对分离效果的影响及固相萃取条件中样品溶液pH和洗脱剂对样品回收率的影响。采用HLB固相萃取柱对草鱼样品进行净化,甲醇/水(v/v=1/1)混合液洗脱维生素B_(1)和维生素B_(12)。色谱流动相分别为85%甲醇和50 mmol/L磷酸二氢钠(pH 3.00,含5 mmol/L己烷磺酸),进行梯度洗脱,柱温为40℃,检测波长为255 nm,进样体积为20µL,维生素B_(1)和B_(12)可在15 min内分离。在最佳分离检测条件下,维生素B_(1)和B_(12)的检出限(S/N=3)为0.21~0.36µg/mL,加标回收率为83.9%~95.1%。本文建立的方法可对草鱼肉质中维生素B_(1)和维生素B_(12)含量进行准确定量。

UPLC-DAD同时测定降血压类保健食品中20种非法添加化学药物

采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-DAD)建立同时测定辅助降血压类保健食品中20种非法添加化学药物的方法。采用Luna UPLC C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),以质量分数为0.2%的磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱。流速为0.21 mL/min,柱温为35℃,DAD扫描,检测波长为220 nm,各剂型样品经甲醇提取,通过保留时间和紫外吸收光谱定性,峰面积外标法定量。结果表明:20种药物成分能完全分离,在4~80μg/mL内线性关系良好,回收率为92.3%~104.1%,相对标准偏差(RSD)为1.3%~2.9%。1批阳性样品检出奈比洛尔、乐卡地平、拉西地平,并通过UPLC-MS/MS得到确证。建立的方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,能够达到快速检测降压类保健食品中非法添加化学成分的目的。

HPLC-DAD测定饲用酸化剂苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质

为了建立高效液相色谱法测定饲用酸化剂苯甲酸中邻苯二甲酸、2-羟基苯甲酸、3-羟基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、2-甲基苯甲酸、3-甲基苯甲酸和4-甲基苯甲酸共7种邻苯二甲酸类杂质的方法。本试验将酸化剂样品溶于甲醇和初始流动相的混合溶液中,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm)分离7种邻苯二甲酸类杂质,以水-乙腈-甲基磺酸(85-15-0.1)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为1.2 mL/min,采用二极管阵列检测器(DAD),采集波长范围为210~400 nm,记录扫描光谱图和235 nm波长处的色谱图。用外标法定量邻苯二甲酸类杂质的含量。结果显示,7种邻苯二甲酸类杂质的浓度在0.10~40.00μg/mL范围内的线性良好,平均加标回收率在98.5%~102.7%范围内,相对标准偏差(RSD,n=5)介于0.3%~1.5%,检测限和定量限均为4 mg/kg。本试验建立的酸化剂苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)检测方法快速且准确,可用于苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质的定性和定量检测。

利用UPLC-DAD-HRMS分析低温压榨鲜青花椒油贮藏期间的色素变化

旨在为低温压榨鲜青花椒油的工业生产、贮藏和质量控制提供借鉴,利用超高效液相色谱-二极管阵列检测器-高分辨质谱(UPLC-DAD-HRMS)技术对低温压榨鲜青花椒油中色素进行测定,并研究贮藏过程中光、氧、温度对低温压榨鲜青花椒油的色素含量和色泽L^(*)、a^(*)、b^(*)的影响。结果表明:从低温压榨鲜青花椒油中鉴定出32种叶绿素和10种类胡萝卜素;叶绿素中主要含有叶绿素a、C13^(2)-羟基-叶绿素a、叶绿素b和脱镁叶绿素a;类胡萝卜素中主要含有叶黄素和β-胡萝卜素;叶绿素总量为9.44mg/kg,类胡萝卜素总量为4.95mg/kg。贮藏过程中影响低温压榨鲜青花椒油中色素降解最主要的因素是光,其次是温度,氧气几乎没有影响。另外,a^(*)可以作为衡量低温压榨鲜青花椒油色素含量及色泽控制的指标。

HPLC-DAD法测定铁筷子中香草酸和阿魏酸的含量

本研究旨在建立高效液相色谱法(HPLC)-二极管阵列检测器(DAD)测定铁筷子药材中香草酸和阿魏酸的含量。采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(4.6mm×25.0 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水(B),梯度洗脱,流速1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长(0~15 min,280 nm,香草酸;15~70 min,327 nm,阿魏酸);进样量10μL。香草酸、阿魏酸的分离度均>1.5,分离效果好,分别在22.72~727.00μg/mL、9.69~310.00μg/mL范围内呈良好线性关系,r> 0.999;平均回收率(RSD)分别为101.08%(3.09%)、98.98%(3.11%),铁筷子样品S1中阿魏酸和香草酸的含量最高,S1中香草酸含量为(0.77±1.42) mg/g,阿魏酸含量为(0.36±1.32)mg/g。本研究建立的HPLC-DAD波长切换法灵敏、准确,重复性好,可用于铁筷子药材中香草酸和阿魏酸含量的测定。

基于UPLC-DAD-CAD双检测器串联的DON纯度测量方法对比研究

通过串联二极管阵列检测器(DAD)和电雾式检测器(CAD),建立了脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)纯度分析的液相色谱方法,优化的色谱条件为6%甲醇等度洗脱20 min。2种检测器测得的杂质种类和含量存在明显不同,其中DAD识别到杂质17个,以杂质15含量最高(0.847%),杂质17次之(0.0812%),其次为杂质2、5和8(大于0.01%);CAD识别到杂质9个,以杂质17含量最高(0.4060%),杂质15次之(0.3499%),其次为杂质10、11和12(大于0.1%)。DAD方法测得纯度为98.92%,显著高于CAD方法的结果(98.61,p<0.001);且相对标准偏差(0.00670%)也较CAD方法低(0.0461%)。DAD方法的纯度不确定度为0.463%,主要由杂质响应差异引入;CAD方法为0.0503%,主要由测量重复性引入。研究结果或可为DON纯度分析提供技术支撑。

GSDME在DADS诱导白血病K562细胞焦亡中的作用研究

目的:研究DADS(Diallyl disulfide, DADS)诱导K562细胞焦亡(pyroptosis)及其分子机制。方法:Western Blot检测Kasumi、K562、THP-1、HL-60、NB4细胞的Gasdermin家族蛋白E(Gasdermin E, GSDME)、Gasdermin家族蛋白D(Gasdermin D,GSDMD);甲基特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)法检测K562及NB4细胞GSDME基因启动子检测区甲基化情况;CCK-8检测DADS对K562细胞增殖活力的影响;Western Blot、LDH释放实验检测DADS处理K562细胞后GSDME、GSDME-N、IL-1β、Cleaved IL-1β蛋白表达水平及乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase, LDH)释放量变化;慢病毒转染技术构建GSDME敲低的稳转K562细胞株;Western Blot检测下调GSDME对DADS处理K562细胞GSDME-N端蛋白表达水平的影响。结果:Kasumi、K562、THP-1、HL-60、NB4中GSDME、GSDMD的蛋白表达水平存在差异;NB4细胞的GSDME基因启动子检测区甲基化扩增出阳性条带,而非甲基化扩增为阴性;K562细胞GSDME基因启动子检测区甲基化未能扩增出阳性条带,而非甲基化扩增为阳性;DADS处理后K562细胞的LDH释放量、GSDME-N、Cleaved-IL-1β蛋白均显著升高(P<0.01);与NC组相比,敲低组的K562细胞中mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);DADS处理后,NC组的GSDME-N蛋白水平明显上升(P<0.001),QD组GSDME-N蛋白的水平无显著差异(P>0.05);与NC-DADS组相比,经过DADS处理的QD组GSDME-N蛋白水平明显下降(P<0.001)。结论:DADS诱导K562细胞发生细胞焦亡,其分子机制可能与GSDME介导的焦亡通路有关。

不同品种苦荞UPLC-DAD-CAD指纹图谱和有效成分含量比较

建立13个不同品种苦荞麦的超高效液相-二极管阵列检测器-电雾式检测器(UPLC-DAD-CAD)指纹图谱,并测定4种主要成分含量,为科学评价和控制其质量提供可靠依据。采用ThermoFisher AccucoreTMC18色谱柱(3.0 mm×100mm,2.6μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱;检测波长为285nm;CAD检测器雾化温度为50℃,采集频率和过滤常数分别为10 Hz和5 s;采用夹角余弦法进行相似度评价,建立了苦荞麦UPLC-DAD-CAD特征指纹图谱共有模式。标定了20个电雾式检测共有峰与7个紫外检测共有峰,在CAD检测器中各品种间相似度均大于0.999,DAD检测器中各品种间相似度均大于0.948;同时指认了芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山奈酚4种主要成分,并以芦丁的峰面积为标准,计算了13个品种苦荞麦中山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山奈酚3种待测成分的响应比例值,结果信号响应均以CAD检测器较优。分析比较了4种成分在不同品种苦荞麦中的含量差异,结果表明生长在四川盆地的川荞1号、川荞2号、西荞1号和西荞2号4种黄酮含量相对较低,与其他大部分品种苦荞麦相比,皆存在统计学差异,而生长在海拔高光照强的云贵高原和川西高原的迪苦、黔荞和米荞4种黄酮含量相对较高。本研究首次使用UPLC-DAD-CAD方法建立了不同品种苦荞麦的指纹图谱并对其有效成分含量进行了测定,为苦荞麦的质量控制和资源评价奠定了基础。

HPLC-DAD法测定苗药银丹心泰滴丸中原儿茶醛

目的:建立测定银丹心泰滴丸中原儿茶醛含量的方法。方法:采用HPLC-DAD法,色谱柱:Eclipse Plus C18(5μm, 250 mm×?4.6 mm),Agilent;流动相:0.1%磷酸溶液-甲醇(体积比85∶15);流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:278 nm;进样量:10μL。结果:原儿茶醛质量浓度在8.2995~41.4973μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为101.1%(RSD:1.5%,n=6)。结论:该定量方法准确可靠,重现性好,可用于银丹心泰滴丸的质量控制。

基于HPLC-DAD数据库快速筛查降血脂类产品中非法添加的10种化学药物

目的建立一种能同时检测10种有降血脂作用化学药物的HPLC-DAD分析方法,建立各物质保留时间和紫外吸收光谱的二维定性数据库,并将此数据库用于降血脂药物非法添加的快速筛查。方法采用迪马Platisil ODS色谱柱;以0.5%甲酸为流动相A,以乙腈为流动性B,进行梯度洗脱。采集HPLC-DAD检测结果中的对照品的保留时间紫外吸收光谱信息,建立10种常见降血脂化学药物的二维定性数据库。结果本实验基于HPLC-DAD方法新建立了一个快速筛查降血脂类产品中非法添加的数据库,通过对市场抽检样品和模拟阳性样品的检测,结果准确可靠。结论本实验建立的HPLC-DAD数据库可快速筛查产品中是否添加了降血脂类化学药物,具有操作简便、快速的特点,为基层监督检验机构提供了一个可靠的方法学参考。

UPLC-DAD法测定人参再造丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种成分含量

目的 建立超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-DAD)法测定人参再造丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种成分的含量。方法 采用Waters CORTECS UPLC C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm);以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min;检测波长为437 nm;柱温40 ℃。结果 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种成分分离度良好,在相应范围内线性关系良好,相关系数(r)均不低于0.999 7,平均回收率分别为92.5%、83.5%、94.3%、98.9%、106.8%,RSD(n=6)分别为2.0%、1.2%、2.6%、2.4%、2.4%。结论 UPLC-DAD法准确可靠、重复性好,可用于人参再造丸的质量控制。

HPLC-DAD波长切换法测定阿司匹林双嘧达莫片的含量及游离水杨酸

目的:建立HPLC-DAD波长切换法测定阿司匹林双嘧达莫片的含量及游离水杨酸的方法。方法:采用Agilent ZORBAX SB C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(20∶5∶5∶70)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长276 nm(阿司匹林)、284 nm(双嘧达莫)和303 nm(水杨酸)。结果:阿司匹林、双嘧达莫和游离水杨酸分别在38.37~383.71、9.60~96.05和1.02~10.21μg·mL^(-1)范围内线性关系良好。平均回收率分别为99.88%(RSD=0.23%)、99.01%(RSD=0.46%)和100.99%(RSD=0.75%)。本法与标准方法含量测定结果无明显差异。含量均匀度A+2.2S在4.7~6.4。结论:建立的含量测定方法,操作简单,更适用于阿司匹林双嘧达莫片的质量控制。

UPLC-DAD法同时测定不同产地黄芩中4种成分的含量

建立超高效液相色谱-二极管阵列检测器法(UPLC-DAD)测定不同产地黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等4个化学成分的含量。采用UPLC-DAD法,采用Endeavorsil C_(18)色谱柱(150.0 mm×2.1 mm,1.8μm),乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,检测波长为280 nm,流速0.3 mL/min^(-1),柱温为30℃。4个化合物分离度良好,呈现较好的线性关系(r>0.9998),平均加样回收率均在98.93%~99.72%,RSD≤2.13%。结果显示4个被测成分在不同产地及批次之间含量差异较大。该方法简单准确,省时高效,可为不同产地黄芩药材质量控制提供一定的科学依据。

HPLC-DAD法分析不同月份和干燥方式下银杏叶色素含量的变化规律

采用HPLC-DAD法研究了不同月份银杏叶色素含量的变化规律,并通过聚类分析和逼近理想值排序(TOPSIS)法评价了不同干燥方式对银杏叶色素含量的影响。研究结果表明:所建立的HPLC-DAD方法简单、准确、灵敏度高、重复性好;4~11月银杏叶色素含量存在明显差异,其中脱植基叶绿素a、脱镁叶绿酸盐a和β-胡萝卜素在4月份达到最高值,分别为(1762±121)、(628±32)和(482±45)μg/g,叶绿素a和b在5月份达到最高值,分别为(8701±571)和(3140±274)μg/g,叶黄素在7月份达到最高值,为(2057±104)μg/g。聚类分析结果表明:12种干燥方式可分为4类,冷冻干燥、40℃减压干燥、40℃常压干燥聚为A类,阴干聚为B类,100℃减压干燥和100℃常压干燥聚为D类,剩下6种干燥方式聚为C类。通过TOPSIS法分析发现:银杏叶干燥方式排名前5的依次为冷冻干燥、40℃减压干燥、40℃常压干燥、阴干和60℃常压干燥。综合考虑,40℃减压干燥是最适合于工业化生产的干燥方法,干燥速度快,且色素得到有效保护。

HPLC-DAD法同时测定银翘解毒丸中7种成分的含量

目的建立HPLC-DAD法同时测定银翘解毒丸中绿原酸、连翘酯苷A、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、牛蒡苷及甘草酸的含量。方法采用色谱柱Agilent 5TC-C_(18)(2)250 mm×4.6 mm;流动相为乙腈:0.3%磷酸,梯度洗脱,流速:1.0 mL·min^(-1);柱温:30℃;进样量为10μL;检测波长:230 nm,340 nm。结果绿原酸、连翘酯苷A、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、牛蒡苷及甘草酸线性范围分别为11.6~231.6、11.2~223.2、1.9~37.1、1.7~31.2、5.1~102.5、12.2~244.4、10.2~203.7μg·mL^(-1),相关系数r均为1.0000;平均加样回收率96.6%~101.8%;RSD%1.12%~2.69%。结论该方法简单可行、稳定性强、灵敏度高,可用于银翘解毒丸的质量控制。

HPLC-DAD/ELSD法测定当归-黄芪药对不同配比下主要有效成分的含量

本文旨在建立高效、快速和精度高的方法测定当归-黄芪药对中主要有效成分阿魏酸、黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量,并探讨当归与黄芪按不同比例配伍时二者中主要有效成分的变化趋势。采用加热回流提取法制备当归、黄芪按5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5比例配伍下的供试品溶液。选用SinoChromODS-AP(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈和0.2%冰醋酸溶液为流动相梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,柱温25℃,选择DAD检测器测定阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷,检测波长为260 nm和310 nm,黄芪甲苷的测定选择ELSD检测器。结果表明:所建立的检测方法线性关系良好,三种指标性成分加样回收率RSD%<3.0%,含量测定发现,黄芪甲苷、阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量随着当归、黄芪配比不同而发生变化。故HPLC-DAD/ELSD法检测操作快速、准确、简便、精密度高且重复性好,本研究初步揭示了当归-黄芪药对不同配比时的主要活性成分变化,为进一步探讨当归-黄芪配伍协同增效的药理学作用提供参考。

HPLC-DAD测定止咳平喘类中成药中12种化学药物

目的建立一种灵敏、可靠且能快速筛查止咳平喘类中成药中多种添加化学药物的检测方法。方法采用甲醇超声提取样品中止咳平喘类化学药物,并用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)测定其含量。采用Platisil ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.5%甲酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱,检测波长为250 nm,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃。结果12种化学药物在相应的浓度范围内与其对应峰面积呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999。样品平均回收率为98.6%~100.3%,RSD为1.3%~2.1%。应用该方法对10批次样品进行检测,均未检出阳性成分。结论本方法操作简便、快捷,精密度、稳定性、重复性好,能够达到快速检测止咳平喘类中成药中多种非法添加化学药物的目的。

HPLC-DAD法测定复方麻黄散中非法添加喹烯酮

建立了复方麻黄散中非法添加喹烯酮的HPLC-DAD检查方法。以C18柱为固定相,甲醇-水(60∶40,V∶V)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温30℃,二极管阵列检测器检测,采集波长范围为190~400 nm,提取波长为314 nm。通过液相色谱保留时间、紫外吸收光谱和峰纯度分析对非法添加物进行确认。结果表明,该色谱条件下喹烯酮与其他物质分离良好。喹烯酮在2.0~100.0μg/mL范围内线性关系良好,R2=0.9999。喹烯酮在复方麻黄散中的平均回收率为101.4%,RSD为0.5%;方法的检测限为0.25 g/kg。该方法简便,准确,可靠,可以用于检查复方麻黄散中非法添加喹烯酮。

鸡蛋中阿莫西林残留HPLC-DAD检测方法的建立

为了能够准确地测定鸡蛋中阿莫西林的残留,本试验建立了高效液相色谱-二级管阵列检测器(HPLC-DAD)方法来检测鸡蛋中阿莫西林残留。采用乙腈沉淀蛋白提取鸡蛋液中的阿莫西林,以超纯水饱和的二氯甲烷作为进一步萃取纯化的溶剂,0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=5.5)和乙腈溶液为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为230 nm,样品进样量为20μL,柱温为30℃的色谱条件对鸡蛋中阿莫西林残留进行检测。结果显示,阿莫西林的质量浓度范围为0.05~100.00μg/mL,与峰面积具有良好的线性关系(R 2=0.9998);该方法的重复性、精密度和稳定性均良好,相对标准偏差在2.0%以内;平均加样回收率介于82.89%~89.92%,相对标准偏差介于1.68%~2.71%;阿莫西林检测限为0.025μg/mL,定量限为0.050μg/mL。结果表明,本试验所建立的HPLC-DAD方法操作过程简便、稳定性好、灵敏度高,可适用于鸡蛋中阿莫西林残留的准确检测。