RP-HPLC method for the simultaneous determination of daidzein,genistein and formonetin in Solanum Lyratum Thunb

A rapid method for the simultaneous determination of daidzein,genistein and formonetin in solanum Lyratum Thunb by high performance liquid chromatography(HPLC)was developed.Separation was achieved on a Diamonsil C18 column(250 mm×4.6 mm,5 μm)with isocratic elution,using a mobile phase of methanol-tetrahydrofuran-water(44∶3∶53,v/v).The wavelength was set at 260 nm and column was maintained at 35 ℃.The linear ranges of daidzein,genistein and formonetin were 1.0-40.0,0.1-4.0 and 0.1-4.0 μg/mL,respectively.The average recoveries were between 98.4% and 101.3%.This method could be used for the quality control of Solanum lyratum Thunb due to its simplification,reliability,rapidity and excellent precision.

植物雌激素大豆苷原(daidzein)对结肠癌LoVo细胞生长的影响

目的 了解植物雌激素大豆苷原 (daidzein)对结肠癌细胞生长的影响。方法 取对数生长期的人结肠癌细胞株LoVo细胞 ,以不同浓度的大豆苷原处理细胞 2 ,3,4和 6d ,然后应用MTT法测定细胞的生长率。结果 大豆苷原在高浓度 10 0 μmol/L时在体外对LoVo有明显的抑制作用 (P <0 .0 1) ,而在低浓度 <5 μmol/L时对LoVo细胞又具有促增殖作用。

不同产地淡豆豉多指标成分含量测定的质量和安全性评价

目的对自制和不同产地来源的12个淡豆豉样品进行性状、显色鉴别和多指标成分含量测定,为完善淡豆豉药材质量和安全性评价提供参考。方法根据2020年版《中国药典》淡豆豉项下的性状、显色鉴别方法对淡豆豉进行鉴别,用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)和超高效液相色谱-串联质谱法(Ultra Performance Liquid Chromatography Mass Spectrometry,UPLC-MS/MS)测定各样品中大豆苷元、染料木素、γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(GLu)和黄曲霉毒素(AFTs)含量。结果12个淡豆豉样品性状均符合药典标准,显色鉴别中9个样品显紫红色反应,3个不符合药典规定。不同产地淡豆豉的大豆苷元、染料木素、GABA和GLu含量差异较大,大豆苷元、染料木素总量依次是安徽3(SSP6)>江西3(SSP3)>自制淡豆豉(SSP0),分别为1.992、1.713 mg/g和1.673 mg/g;GABA含量依次为自制淡豆豉(SSP0)>安徽3(SSP6)>四川(SSP10),分别为7.940、5.336 mg/g和2.145 mg/g,另有4个样品的大豆苷元、染料木素总量不符合药典规定,且它们的GABA含量很低;有6个样品检测出AFTs,其中2个样品超出药典限量标准,分别为安徽1(SSP4)和安徽3(SSP6),SSP4的AFB1、AFB2含量最高分别为6.48,0.63μg/kg。结论各产地淡豆豉品质良莠不齐,存在一定安全隐患。新引入的活性成分GABA和AFTs含量测定可作为淡豆豉质量优劣和安全性评价的指标。

大豆异黄酮及其衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

目的 合成大豆异黄酮及其衍生物 ,对其抑制肿瘤的活性进行初步评价。方法 以多元酚和取代苯乙酸衍生物为主要原料经多步合成制备了大豆异黄酮及其衍生物 ,对所得化合物用蓝染法测定了在 5 0 μg·mL-1时体外抗肝癌H2 2 瘤株活性。结果 合成了 13个脱氧安息香和 14个异黄酮化合物 ,其中 5个 (1f～ 4f ,1h)为新化合物。结论 未发现有显著的抗肿瘤活性 ,其中化合物 1d和 1g样品在 2 4h ,10 0 μg·mL-1时蓝染率分别为 5 %和 10 %。对目的物抑制肿瘤转移评价方法的研究正在进行中。

大豆黄酮和染料木素对体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响

通过体外细胞培养的方法探讨大豆黄酮(Daidzein,Da)和染料木素(Genistein,Ge)对奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响。试验分空白对照组、10 ng/mL雌二醇(E2)组、不同浓度Da和Ge(1、10、100、1000ng/mL)组,培养72 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。结果表明,10、100 ng/mL Ge组和100、1000 ng/mL Da组同空白对照组比较可显著促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖(P<0.05),但均显著低于E2组(P<0.05)。另取处于对数生长期的乳腺上皮细胞加入不同浓度Da和Ge(1、10、100、1000 ng/mL)继续培养24 h,检测细胞培养液中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。结果表明,100、1000 ng/mL Da组及1001、000 ng/mL Ge组较空白组显著提高了T-SOD活性(P<0.05),显著降低了MDA含量(P<0.05);100、1000 ng/mL Da组及10、100、1000 ng/mL Ge组显著提高了NO含量(P<0.05);1000ng/mL Da组及100、1000 ng/mL Ge组显著提高了GSH-PX活性(P<0.05)。可见,Da和Ge在一定浓度范围内均有促进奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平提高的作用。

淡豆豉炮制前后异黄酮组分含量的比较

采用HPLC法对淡豆豉炮制前后大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素含量进行测定,以探讨淡豆豉炮制前后异黄酮组分含量的变化。结果表明:炮制对淡豆豉中异黄酮组分含量有明显影响,炮制后大豆苷、染料木苷含量降低,大豆苷元、染料木素含量升高。淡豆豉炮制后苷类成分含量降低,苷元类成分含量升高,提示淡豆豉的炮制存在由苷向苷元转化的过程。

大豆异黄酮类成分对去卵巢大鼠脂质代谢的影响

目的 :观察大豆异黄酮中主要成分染料木素 (genistein ,G)、大豆苷元 (daidzein ,D)及其苷对于去卵巢大鼠脂质代谢的影响。方法 :Wistar雌性大鼠 ,双侧摘除卵巢 ,手术后 1周 ,分为假手术组、模型组、雌激素组 ,大豆苷元高、中、低剂量组 ,染料木素高、中、低剂量组和大豆总黄酮提取物 (T)高、中、低剂量组 ,灌胃给药 3个月。每天称进食量 ,每周称一次体重 ;实验结束后 ,取血和肝脏 ,进行血清和肝脏胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、血清低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)的测定。结果 :大豆苷元及大豆总黄酮提取物能明显抑制大鼠体重和进食量的增长 (P <0 0 1) ,抑制腹部脂肪的堆积 (P <0 0 0 1) ,染料木素无明显作用 ;大豆苷元降低血清中TC、LDL C的浓度 (P <0 0 5 ) ,对于血清中甘油三酯TG、HDL C没有明显的作用 ,而染料木素可以降低LDL C(P <0 0 1)且升高HDL C(P <0 0 5 ) ,但对于TC、TG无作用 ;大豆苷元、染料木素及大豆总黄酮均能降低肝脏中TC、TG的浓度 (P <0 0 0 1)。结论 :大豆苷元可以抑制去卵巢大鼠体重增长 ,减少腹部脂肪堆积 ,降低血浆胆固醇的升高。

淡豆豉炮制工艺的优化研究

目的:优化淡豆豉的炮制工艺,明确工艺参数,为淡豆豉的规范化生产和质量控制提供依据。方法:采用单因素试验,以淡豆豉中大豆苷元、染料木素和异黄酮的含量为指标,考察桑叶和青蒿用量比例、药汁拌入大豆时的相对密度、蒸煮时间、发酵温度、发酵时间、再闷时间和略蒸时间;采用正交试验,以总黄酮含量为指标,考察桑叶和青蒿煎煮时间、煎煮次数、加水量,从而规范淡豆豉的炮制工艺。结果:最佳炮制工艺为取桑叶90g、青蒿100g,加入约生药量18倍水煎煮3次,每次1h,药液相对密度为1.10～1.12g/cm3,拌入1kg大豆中,蒸煮1.5h,发酵温度为(30±2)℃,发酵6～8d。结论:优化的炮制工艺适合淡豆豉的炮制加工。

大豆异黄酮对大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径的影响

本实验研究了大豆异黄酮对SHZ-88大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径的影响。实验设3组:空白对照组、50μg/ml大豆黄酮及15μg/ml染料木素组。采用放射免疫测定法(RIA)检测了胞内cAMP的浓度、腺苷酸环化酶(adenylatecyclase,AC)和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)的活性,用(γ-32P)ATP掺入法测定cAMP依赖性PKA的活性,半定量RT-PCR法分析cAMP反应元件结合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)mRNA表达的变化。结果表明:在处理后5min,大豆黄酮组和染料木素组细胞的cAMP浓度分别比对照组升高了9.5%和11.0%(P<0.05);10min时,分别比对照组升高31.0%和40.3%(P<0.01)。3组细胞的AC活性在处理时间内没有明显变化。但在处理后5min,大豆黄酮组和染料木素组细胞的PDE活性分别降至对照组的71.8%和71.6%(P<0.05)。处理后20min,大豆黄酮组和染料木素组细胞PKA活性分别上升到对照组的125.8%和122.3%(P<0.05);到40min时仍维持在高水平。大豆黄酮组和染料木素组细胞CREBmRNA的表达量在处理后3h分别比对照组增加31.6%和51.1%(P<0.05);6h后开始下降。这些结果提示,大豆异黄酮能够激活大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径;而且是通过抑制磷酸二酯酶的活性,导致胞内cAMP浓度升高而实现的。

大豆异黄酮生理功能的研究进展

大豆异黄酮因具有明显的生物学活性已越来越引起社会和学术界的普遍关注,是近年来科学家研究的热点。研究表明,大豆异黄酮与人类健康密切相关,具有许多生理功能,如抗肿瘤作用、对血管的防护作用、抗氧化活性、类似女性雌激素作用以及抗激素作用等。文中阐述了大豆异黄酮生理功能的研究进展。

HPLC测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的含量

目的:建立测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A含量的高效液相色谱方法。方法:KromasilC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈0.1H3PO4(40∶60),流速:1.0mL·min-1,检测波长:254nm,柱温:25℃。结果:大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的线性范围分别为0.0662～0.6620μg,0.0978～0.9780μg,0.0866～0.8660μg和0.0992～0.9920μg。该方法回收率大豆苷元为98.9(RSD=0.46),染料木素为98.8(RSD=1.21),芒柄花素为98.8(RSD=0.71),鹰嘴豆芽素A为97.5(RSD=1.33)。结论:该法简便、快速、准确。

去甲基化法制备黄豆苷元和染料木黄酮及抗氧化性分析

以KBr-H_3PO_4或KI-H_3PO_4为反应介质,对芒柄花黄素和鸡豆黄素进行去甲基化反应转化成黄豆苷元和染料木黄酮,并对产物的抗氧化性进行分析。结果表明:以KBr-H_3PO_4为反应介质,制备黄豆苷元最佳条件为反应时间5 h、反应温度120℃、料液比1∶45(g/mL)、最佳饱和度75%,产率为89.42%;制备染料木黄酮最佳条件为反应时间5 h、反应温度120℃、料液比1∶45(g/mL)、最佳饱和度100%,产率为85.98%;以KI-H3PO4为反应介质,制备黄豆苷元最佳条件为反应时间4 h、反应温度100℃、料液比1∶15(g/mL)、最佳饱和度75%,产率可达87.03%;制备染料木黄酮最佳条件分别为反应时间5 h、反应温度100℃和料液比1∶45(g/mL)、最佳饱和度75%,产率可达88.51%。与已有合成方法相比,本实验方法具有反应过程简单、反应条件温和、反应时间较短、产率较高等优点。所制备黄豆苷元和染料木黄酮具有一定的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和羟自由基清除能力,以及较强的抗亚油酸氧化能力,表现出较好的抗氧化性。

大豆苷元和染料木素的提取、分离及定性、定量方法

建立了大豆苷元和染料木素的提取、分离以及定性、定量的方法.首先用正己烷对豆粕脱脂,脱脂豆粕再用70%的乙醇提取,浓缩乙醇提取液至无醇,然后用与水相相同体积的乙酸乙酯萃取3次,合并并浓缩乙酸乙酯相.用GF254层析板,并以甲苯-氯仿-丙酮(V:V:V=4:1.8:1.8)为展开剂对乙酸乙酯相进行薄层层析,然后对Rf=0.50和Rf=0.63的荧光斑进行高效液相色谱分析,并与大豆苷元和染料木素标准品的HPLC色谱图对比,证实Rf=0.50的物质为大豆苷元,Rf=0.63的物质为染料木素,用紫外-可见分光光度法进行定量.在本实验条件下,大豆苷元和染料木素提取率相对标准偏差分别为1.40%和0.87%,含量测定值的相对偏差分别为3.69%和3.52%,表明本实验建立的大豆苷元和染料木素的提取分离方法稳定有效,定量方法准确可靠.

短期人工瘤胃发酵法研究不同水平大豆黄酮和染料木素对奶牛瘤胃液的影响

采用短期人工瘤胃发酵法研究大豆黄酮(Da)和染料木素(Ge)对产气量和人工瘤胃发酵参数的影响,旨在确定二者在奶牛日粮中的适宜添加水平。采集3头早饲前奶牛瘤胃液分成11组进行体外发酵试验,其中以基础饲料为对照组,以添加不同水平大豆黄酮和染料木素组(分别为20、40、60、80和100mg/kg)为试验组,每组设5个重复。分别在发酵的2、4、8、12、24、36和48h读取产气量,在发酵48h试验停止后,取各组发酵液制备分析样品,用于测定pH、氨态氮(NH3-N)、总挥发性脂肪酸(TVFA)、微生物蛋白(MCP)及原虫数。结果表明,在体外发酵条件下,大豆黄酮和染料木素的添加没有对人工瘤胃液中的pH、丙酸浓度、丁酸浓度、乙酸/丙酸值及原虫数产生规律性影响(P>0.05);二者在高水平条件下(大豆黄酮100mg/kg,染料木素80～100mg/kg)可显著提高NH3-N浓度,降低乙酸、TVFA的浓度及MCP产量。结果表明20～40mg/kg大豆黄酮及20mg/kg染料木素有促进瘤胃发酵的作用,而100mg/kg大豆黄酮及80～100mg/kg染料木素有显著抑制产气的作用(P<0.05)。

豆浆热处理过程中3种大豆异黄酮苷原的热降解比较

将大豆加工成豆浆并分别用95、121和140℃处理不同时间,以高效液相色谱(HPLC)法检测其中的3种大豆异黄酮苷原,染料木黄酮(genistein)、黄豆苷原(daidzein)和大豆黄素(glycitein)的含量变化,与原粒大豆、生豆浆进行比较。结果发现,染料木黄酮、黄豆苷原和大豆黄素的热稳定性存在较大差异,在95℃下,染料木黄酮在60min的处理时间内稳定,而黄豆苷原和大豆黄素的T(loss0.5)值(损失50%含量的时间)分别为1442s和453s,表明95℃下3种大豆异黄酮的热稳定性表现为:染料木黄酮>黄豆苷原>大豆黄素。而在121℃和140℃的处理条件下,3种大豆异黄酮苷原均随着处理时间的延长而出现不同的热降解,黄豆苷原、大豆黄素和染料木黄酮在121℃的T(loss0.5)值分别为26.36、37.88和1015s,而在140℃下,黄豆苷原、大豆黄素和染料木黄酮的T(loss0.5)值则分别缩短为6.94、8.47和369s,结果表明在121℃和140℃下,3种大豆异黄酮的热稳定性表现为:染料木黄酮>大豆黄素>黄豆苷原。

染料木素和大豆苷元对去卵巢大鼠胆固醇代谢的影响

目的 观察大豆异黄酮的两种主要苷元染料木素(Gen)和大豆苷元 (Dai)对去卵巢大鼠胆固醇代谢的影响。方法 Wistar大鼠 70只 ,随机分成正常组、模型组、雌激素组、大剂量G组、小剂量G组、大剂量D组、小剂量D组 ,每组 10只。除正常组外 ,其余各组均切除双侧卵巢。术后 1wk开始给药 ,给药 6wk后处死动物 ,测定血清总胆固醇(sTC)、血清低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、血清高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)、肝组织中胆固醇 (hTC)含量。结果 切除卵巢 7wk后大鼠sTC ,LDL C ,hTC均增高。雌激素可降低去卵巢大鼠sTC、LDL C和hTC ,对HDL C作用不明显 ;染料木素可降低sTC、hTC、升高HDL C ,但对LDL C作用不明显 ;大豆苷元可降低sTC、hTC、LDL C ,但对HDL C作用不明显。结论 染料木素和大豆苷元均可降低去卵巢大鼠sTC和hTC水平 ,但作用途径不同 ;

高效液相色谱法测定食品中大豆异黄酮

目的 建立高效液相色谱法测定食品中大豆异黄酮 (包括染料木黄酮和大豆苷元 )的含量 ,探讨样品的提取方法及测定影响因素。方法 样品经 0 .5 0 mol/ L盐酸回流和乙醇提取大豆异黄酮后 ,采用甲醇 - 0 .0 1mol/ L乙酸铵溶液 (p H4 .5 ) (6 0 +40 )作为流动相分离待测物质 ,等度洗脱 ,采用紫外检测器于 2 5 4 nm波长下测定。结果染料木黄酮的检出限为 0 .0 4μg/ m l,大豆苷元为 0 .0 5μg/ ml;样品的加标回收率为 91.4 %～ 113.1% ,日内和日间相对标准偏差分别为 1.1%～ 2 .8%和 2 .9%～ 5 .1%。结论 本法简便、快速 ,易于推广普及 。

染料木素和大豆苷元对去卵巢大鼠甘油三酯代谢的作用

目的 观察染料木素和大豆苷元对去卵巢大鼠甘油三酯代谢的影响。方法 Wistar大鼠 70只 ,随机分成正常组、模型组、雌激素组、大剂量染料木素 (Genistein ,G)组、小剂量 (Genistein ,G)组、大剂量大豆苷元 (Daidzein ,D)组、小剂量 (Daidzein ,D)组 ,每组 10只。除正常组外 ,其余各组均切除双侧卵巢。术后 1wk开始给药染料木素和大豆苷元 ,6wk后处死动物 ,测定血清甘油三酯 (sTG)浓度、肝脏组织甘油三酯 (hTG)含量、肝脏组织磷脂含量和磷脂指数 ,并固定肝脏组织、HE染色 ,进行病理学观察。结果 大鼠切除卵巢6wk后hTG含量明显增加 ,HE染色发现肝脏细胞中分布大小不一的脂滴 ;肝脏磷脂指数降低。雌激素和大豆苷元均可逆转以上变化 ,但雌激素升高sTG浓度并且对肝细胞造成空泡样变损伤 ;染料木素对各项指标均无明显作用。结论 大豆异黄酮中影响去卵巢大鼠甘油三酯代谢的有效成分为大豆苷元 ,其可以有效抑制去卵巢大鼠肝脏组织中脂肪的堆积。

大豆二羟异黄酮及三羟异黄酮的高效液相色谱分析

1mol/L盐酸水解大豆及豆制品 ,乙腈提取 ,高效液相色谱分析二羟、三羟异黄酮的含量。以甲醇 -2mmol/L乙酸铵(体积比55∶45,乙酸铵溶液用乙酸调 pH至4.380)为流动相 ,HypersilBDSC18 色谱分析柱 ,柱温25℃ ,260nm紫外检测波长进行分析。二羟、三羟异黄酮在1～500μmol/L的范围内 ,与峰面积有很好的线性关系 (r=0.9999)。它们的检出限为5ng(S/N=3) ,平均回收率94.46 %以上 ,6次进样的相对标准差 (RSD)小于4 %。该法灵敏、重复性好、结果准确、分析迅速。检测大豆及豆制品中异黄酮的含量 ,得到满意的结果。

固定化β-葡萄糖苷酶双相体系中水解大豆异黄酮

采用共价交联的方法将β-葡萄糖苷酶固定到球形壳聚糖上,并对固定化酶的性质进行表征,得出固定化酶的最佳反应条件:pH=5,温度40℃。据此用乙酸乙酯和pH=5缓冲溶液的双相体系,在40℃条件下水解大豆异黄酮。与游离酶相比,固定化酶在此双相体系中起到了稳定酶的作用;与单相体系相比,双相体系中产物的产率显著提高,反应速率也更快,且能有效去除粗品大豆异黄酮的异味。对于30%左右级别的大豆异黄酮,水解的两个主要水解产物(大豆苷元和染料木素)的产率都能达到70%。