蒲公英中总黄酮的提取条件研究——“天然产物化学实验”课程实验设计

天然产物化学实验注重学生综合能力及创新能力的培养。通过实验设计,以蒲公英总黄酮为对象,结合紫外分光光度法探索不同条件对蒲公英总黄酮得率的影响,使学生掌握总黄酮提取和测定机理,从而夯实学生理论知识,提升学生解决天然产物提取复杂问题,强化知识运用能力。整个实验课程内容全面,操作简单,对培养学生科学探究、开拓创新的精神有很大帮助。

蒲公英总黄酮的提取工艺优化及抗氧化活性评价

本文采用乙醇浸提法从蒲公英中提取总黄酮,考察了乙醇浓度、提取温度、提取时间等因素对蒲公英总黄酮提取效果的影响。以总黄酮含量为指标,在单因素实验基础上采用正交实验法对提取工艺进行优化。最佳工艺条件为:乙醇浓度为40%,提取温度为70℃,提取时间为80min,此条件下蒲公英提取物总黄酮含量为0.9170mg·mL^(-1)。通过DPPH清除实验、羟基自由基清除实验,对蒲公英总黄酮提取物进行抗氧化活性评价,其中DPPH自由基清除率IC_(50)值为0.8492mg·mL^(-1),羟基自由基的清除能力IC_(50)值为1.0717mg·mL^(-1)。该结果表明,蒲公英总黄酮提取物具有良好的抗氧化清除自由基能力。

蒲公英与木通提取物对断奶仔兔生长性能、肠道健康和药物转运体基因相对表达量的影响

本试验旨在研究饲粮中添加蒲公英、木通提取物对断奶仔兔生长性能、腹泻情况、肠道形态结构、肠黏膜紧密连接蛋白和肝肠药物转运体蛋白基因表达的影响,探究二者联用对提高中药提取物生物利用度的效果。试验选取120只35日龄断奶仔兔,随机分为4个组,每组设置10个重复,每个重复3只兔。试验包括对照组(基础饲粮)、蒲公英组(基础饲粮添加0.5%蒲公英提取物)、木通组(基础饲粮添加0.5%木通提取物)和蒲公英+木通组(基础饲粮分别添加0.5%蒲公英和木通提取物)。试验时间为28 d。试验结果表明:1)第1周蒲公英组和木通组平均日增重显著高于对照组(P<0.05),料重比显著低于对照组(P<0.05)。2)蒲公英组仔兔空肠绒毛高度显著高于木通组(P<0.05)。3)蒲公英+木通组空肠黏膜总黄酮含量显著高于其它各组(P<0.05)。4)蒲公英+木通组闭合小环蛋白1(Z0-1)基因在回肠的相对表达量显著高于蒲公英组和木通组(P<0.05)。5)木通组空肠多药耐药相关蛋白2(MRP-2)、有机阴离子转运多肽2B1(organic anion transporting polypeptide 2B1,OATP2B1)基因的相对表达量显著低于对照组(P<0.05),蒲公英+木通组空肠OATP2B1基因相对表达水平显著低于对照组(P<0.05);蒲公英组和木通组多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance-associated protein 3,MRP3)基因在回肠的相对表达量显著低于对照组(P<0.05);蒲公英+木通组乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)、MRP3基因在肝的相对表达量显著低于对照组(P<0.05),木通组和蒲公英+木通组OATP2B1基因在肝的相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。综上所述,饲粮中分别添加蒲公英和木通提取物对断奶仔兔的生长性能有所改善,同时添加蒲公英和木通提取物能提高空肠组织总黄酮含量,饲粮中添加蒲公英和木通提取物能调节肝和肠黏膜组织中药物转运体基因表达水平。

蒲公英总黄酮提取工艺优化及其抗氧化活性研究

研究旨在优化蒲公英总黄酮提取工艺,并研究其抗氧化活性。试验通过考察乙醇浓度、提取温度、提取时间对蒲公英总黄酮提取得率的影响,采用正交试验优化蒲公英总黄酮提取工艺。结果显示:蒲公英总黄酮最优提取工艺参数为乙醇浓度60%、提取温度70℃和提取时间45 min。在此条件下,蒲公英总黄酮提取得率为5.62%。蒲公英总黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸二铵盐(ABTS+)自由基具有较强的清除能力,其半数抑制浓度(IC50值)分别为235.6 mg/L和306.8 mg/L。研究表明,正交试验法优化超声波辅助提取工艺方案设计可行,蒲公英总黄酮具有较强的抗氧化性能,是一种优质的天然抗氧化物质。

蒲公英总黄酮提取及其抗氧化活性研究

研究了料液比例、超声处理时间、乙醇浓度和提取温度对蒲公英总黄酮提取率的影响。结果表明,蒲公英总黄酮最佳提取条件为:料液之比1∶50(m∶V)、提取超声的时间40min、乙醇的浓度60%、超声的提取温度60℃,该条件下蒲公英中总黄酮的实际提取率为9.37%。进行了总黄酮抗氧化性的研究,结果表明蒲公英总黄酮对DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基、羟基自由基和超氧阴离子清除率与黄酮浓度呈正比关系,抗氧化实验表明蒲公英总黄酮具有良好的抗氧化性。

蒲公英不同干燥条件下总黄酮含量及抗氧化活性研究

为探讨不同干燥条件下蒲公英总黄酮含量及抗氧化活性,为蒲公英综合开发利用提供参考,本文以总黄酮含量及抗氧化活性为指标,研究不同干燥条件(真空干燥、热风干燥、阴干、晒干)对蒲公英黄酮类化合物的影响。结果表明:不同干燥条件下蒲公英总黄酮类物质含量差异显著(P<0.05);自由基清除能力与总黄酮含量成正相关;阴干条件下蒲公英总黄酮含量及抗氧化活性优于其他处理条件,其次为晒干及40℃真空干燥处理;95℃热风干燥处理下总黄酮含量及抗氧化活性最低。得出以下结论:在生产实际中应重视蒲公英干燥方式,采摘后以阴干或晒干的方式加工蒲公英;超声提取总黄酮类化合物时优先考虑超声温度的影响。

蒲公英总黄酮对烟草烟雾致慢性阻塞性肺疾病的抗氧化保护作用及机制

目的探讨蒲公英总黄酮对烟草烟雾(CS)致慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠的影响,并阐明其相关作用机制。方法首先,基于DPPH和ABTS方法检测蒲公英茎叶总黄酮提取物和根总黄酮提取物的体外抗氧化能力。其次,将60只雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为空白对照(Con)组、CS组、CS-根总黄酮低剂量(Root-LD)组、CS-茎叶总黄酮低剂量(Leaf-LD)组、CS-根总黄酮高剂量(Root-HD)组和CS-茎叶总黄酮高剂量(Leaf-HD)组,COPD模型制备采用被动吸烟法,每次4根香烟,每天累积烟熏时长为1 h,持续造模12周。治疗组小鼠在每天烟熏前2 h予以灌胃给药治疗,Root-LD组剂量为2.25 g/kg,Root-HD组为4.50 g/kg,Leaf-LD组为2.25 g/kg,Leaf-HD组为4.50 g/kg。最后,基于小鼠肺功能仪检测各组的肺功能相关指标,包括气道阻力(Raw)、动态肺顺应性(Cdyn)及第0.1秒用力呼气容积(FEV0.1)等指标;基于肺组织的HE染色结果比较各组小鼠肺部的病理变化;使用试剂盒检测各组肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的水平;使用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)信号通路相关基因和蛋白的表达。结果蒲公英茎叶总黄酮和根总黄酮均具有良好的抗氧化能力,DPPH方法的EC50值分别为54.88μg/mL、123.50μg/mL,ABTS方法的EC50值分别为229.41μg/mL、559.07μg/mL。蒲公英总黄酮治疗后可以显著恢复COPD小鼠的体质量(P<0.05);蒲公英的茎叶总黄酮提取物能显著改善COPD小鼠的Cdyn、FEV0.1及Raw等肺功能指标(P<0.05),且茎叶总黄酮提取物的效果要优于根部总黄酮提取物;HE染色结果表明CS诱导的COPD小鼠肺部病理变化符合临床慢性气道炎症的病理表现,并且蒲公英总黄酮能显著抑制CS诱导的COPD小鼠模型的炎症反应;蒲公英总黄酮可以上调抗氧化基因Nrf2和SOD1的mRNA水平;免疫组织化学结果表明蒲公英总黄酮可以调节Nrf2信号通路的相关蛋白表达水平。结论蒲公英总黄酮对CS所致COPD具有保护作用,其潜在的机制与Nrf2抗氧化信号通路相关。

蒲公英中总黄酮的含量测定

目的:探讨一种较为简便的方法对不同产地蒲公英中总黄酮含量进行测定,为蒲公英质量控制提供依据。方法:以芦丁为指标性成分,采用超声提取—比色法。结果:不同产地蒲公英中的总黄酮含量不同,平均加样回收率为101.8%,RSD=0.68%。结论:此方法简便、快速、准确,便于对蒲公英药材进行质量评价。

荧光法测定蒲公英中总黄酮的含量

根据黄酮类化合物能与铝离子形成稳定的荧光络合物,建立一种测定蒲公英中总黄酮的新方法。用60%乙醇加热回流提取蒲公英有效成分,以芦丁为标样,选择激发波长419 nm,发射波长506 nm,采用荧光法测定蒲公英中总黄酮含量,并进行加标回收试验。结果表明,该方法检出限低,回收率在90%~104%之间,线性回归方程为y=179.69x+145.13,相关系数R^2为0.995 1。

中药蒲公英花体外抗氧化活性部位研究

目的研究中药蒲公英花各萃取相体外抗氧化作用,初步探索其与黄酮含量之间的关系。方法采用Na NO_2-Al Cl_3-Na OH法测定蒲公英花各个萃取相中总黄酮含量,采用紫外可见分光光度法测定其对DPPH·、HO·和O_2^-·的清除作用。结果蒲公英花不同极性萃取相有不同程度的抗氧化作用,其效果顺序为:乙酸乙酯相>正丁醇相>水相>石油醚相。结论蒲公英花各萃取相体外抗氧化使用与黄酮含量呈正相关作用。

麦冬中总黄酮提取及抗氧化性的研究

以麦冬为原料,利用超声波提取麦冬中总黄酮。试验结果表明:麦冬中总黄酮的最佳提取工艺条件为超声功率200W、超声时间25min、料液比1∶40、乙醇浓度50%,此时提取率最高,为4.06%,麦冬中总黄酮的抗氧化性优于VE的抗氧化性,但弱于VC的抗氧化抗性,说明麦冬中总黄酮有一定的抗氧化作用,在调整运动机体代谢能力方面能够起到积极的作用,为开发麦冬黄酮的运动性抗疲劳保健食品打下基础。

蒲公英总黄酮复合酶酶法提取工艺及抗氧化活性研究

在考察加酶量、pH值、料液比、乙醇浓度、酶解温度和酶解时间对蒲公英总黄酮得率影响的基础上,进行四因素三水平响应面试验,优化得到蒲公英总黄酮复合酶酶法的最佳提取条件为料液比122(g/mL)、pH 4.5、乙醇浓度52%、酶解温度51℃,该条件下蒲公英总黄酮的得率为15.09mg/g。体外功能性试验显示,蒲公英总黄酮提取液的抗氧化活性及对自由基的清除能力均较强。

双水相超声萃取-分光光度法测定蒲公英中总黄酮

向50.0mg蒲公英粉中加入正丙醇2.00mL及磷酸二氢钠2.5g,于50℃进行双水相超声萃取30min。经过滤并静止分层后,黄酮进入正丙醇相中,使其与水相分离后,将正丙醇相蒸干,所得残渣用乙醇(1+1)溶液溶解定容至50mL,在510nm波长处测量其吸光度。黄酮的质量浓度在8.0mg·L^(-1)以内与其对应的吸光度呈线性关系。方法用于蒲公英中总黄酮的测定,测得萃取率达4.12%。

蒲公英总黄酮对大口黑鲈生长性能、体组成及血液生化指标的影响

为研究饲料中蒲公英总黄酮对大口黑鲈(Micropterus Salmoides)生长性能、体组成及血液生化指标的影响,配制等能(18.39 MJ/kg)、等氮(47.09%)且不同蒲公英总黄酮水平(0、0.01%、0.02%、0.03%和0.04%)的5组(T1、T2、T3、T4、T5)试验饲料。用该5种饲料分别饱食投喂初始体重为(14.69±0.11)g的大口黑鲈,每种饲料3个重复,每重复30尾,投喂周期60 d。结果显示:对照组(T1)与各试验组间的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、蛋白质效率(PER)、饲料系数(FCR)、水分(Moisture)、粗蛋白(CP)、粗灰分(Ash)、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)含量均无显著差异(P>0.05)。而各试验组的存活率(SR)均显著高于T1(P<0.05);T3、T4和T5的粗脂肪(EE)含量显著低于T1(P<0.05);各试验组的总蛋白(TP)和球蛋白(GLB)均显著高于T1(P<0.05);T3、T4和T5的葡萄糖(GLU)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)含量及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性均显著低于T1(P<0.05)。由此可见,饲料中添加蒲公英总黄酮能够提高大口黑鲈的存活率(SR),改善鱼体组成及血液生化指标,添加量为0.02%时效果最佳。

超声波复合酶法提取蒲公英根总黄酮工艺研究

以蒲公英根为原料,采用单因素和正交试验优化超声波复合酶法提取蒲公英根总黄酮工艺。结果表明:最佳工艺参数为超声功率90 W、超声温度50℃、料液比1∶60(g/mL)、pH 4.5、乙醇浓度75%时,此条件下黄酮得率最高,为18.24 mg/g。影响超声波复合酶法提取蒲公英根总黄酮工艺的因素由强到弱为超声功率>超声温度>料液比>pH>乙醇浓度。

基于UPLC-Q-Exactive和HPLC对蒲公英总黄酮部位成分分析及主成分的含量测定

目的对蒲公英总黄酮部位的有效物质进行分析及部分成分的含量测定。方法采用四级杆-静电场轨道阱超高分辨质谱仪(UPLC-Q-Exactive)在负离子模式下对有效物质进行分析。采用高效液相色谱法(HPLC)对部分成分进行含量的测定。结果蒲公英总黄酮部位共鉴定出14个化合物,其中3个酚酸类,11个黄酮类成分。建立了咖啡酸、绿原酸、槲皮素、木犀草素和山奈酚的回归方程,线性关系均良好(r>0.999 8),并检测了5种成分的含量。结论 UPLC-Q-Exactive技术与HPLC技术可用于蒲公英总黄酮部位的有效物质定性与定量分析,是一种快速、准确、有效、可靠的方法。

蒲公英不同萃取部位黄酮含量分析

目的测定蒲公英及花不同萃取部位总黄酮和黄酮单体的含量,为蒲公英的质量评价提供参考。方法采用紫外分光光度法对蒲公英全草和花的不同萃取部位总黄酮含量进行测定,利用高相液相色谱法同时分析其中木犀草素、槲皮素和芹菜素的含量。结果蒲公英及花都是乙酸乙酯萃取部位总黄酮含量最高,且花乙酸乙酯萃取部位中的黄酮含量(96.44%)明显高于全草乙酸乙酯萃取部位(36.26%)。槲皮素、木犀草素及芹菜素在2.5~50.0μg/ml浓度范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为99.87%、99.68%和99.34%,相对标准偏差值依次为1.82%、1.71%和1.43%。结论本方法简便、准确可靠,可用于蒲公英中总黄酮及黄酮单体槲皮素、木犀草素和芹菜素的测定。

苦菜和蒲公英中总黄酮含量及其抗氧化活性分析

为加强苦菜和蒲公英的进一步开发利用,研究了乙醇浓度、料液比和提取时间对苦菜和蒲公英总黄酮得率以及不同浓度提取物对苦菜和蒲公英抗氧化活性的影响。结果表明:苦菜和蒲公英总黄酮提取的最优化条件为提取液乙醇的浓度为60%,料液比为1∶30,超声提取时间为0.5h,总黄酮得率分别为6.44%和17.56%。苦菜和蒲公英提取物对DPPH自由基清除率随样品提取物浓度的增大而升高,在浓度为9.6mg·mL-1时,苦菜和蒲公英提取物的DPPH自由基清除率都达到最大,分别为76.47%和80.39%。

蒲公英总黄酮制备技术研究进展

蒲公英是一种传统的中药材,也是一种药食两用植物。蒲公英中富含多种功效成分,黄酮类物质是蒲公英中最主要的功效成分之一。在查阅国内外文献基础上,对蒲公英总黄酮的提取工艺、纯化方法和生物发酵等制备技术进行了综述,为蒲公英资源综合利用和蒲公英总黄酮进一步研究提供理论依据和技术支撑。

蒲公英总黄酮改善Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病大鼠记忆功能障碍的观察

目的:探索蒲公英总黄酮对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠记忆功能的影响以及潜在机制。方法:将50只健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和蒲公英总黄酮低、中、高剂量组(100、200、400 mg·kg-1)。采用大鼠右侧海马CA1区注射1μL Aβ_(25-35)建立AD大鼠模型,术后各组进行灌胃治疗21d。治疗结束采用Morris水迷宫法观察大鼠的记忆能力;分离海马组织并制备组织匀浆,采取二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光法检测活性氧(ROS)水平;利用硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;将海马组织制备切片,应用TUNEL染色观察海马神经元凋亡; Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠逃逸潜伏期明显延长,空间探索时间明显缩短,海马组织ROS水平增加,MDA含量明显增高,SOD活性明显下降,海马神经元细胞凋亡增加,Bax和Caspase-3表达上调同时Bcl-2表达降低。与模型组相比,不同浓度的蒲公英总黄酮均能缩短逃逸潜伏期,延长空间探索时间,降低ROS水平和MDA含量,升高SOD活性,减少神经元细胞凋亡,同时上调Bcl-2表达,降低Bax和Caspase-3表达,并且呈现浓度依赖性关系。结论:蒲公英总黄酮能够保护Aβ_(25-35)诱导的大鼠记忆能力损伤,这可能与拮抗氧化应激介导的神经元细胞凋亡有关。