皮肤鳞癌中DBPA mRNA的表达及其与表皮分化的关系

目的:DNA结合蛋白(DBPA)又称为ZO-1相关核苷酸结合蛋白(ZONAB),有很重要的转录活性,ZONAB可与ZO-1相结合,并通过抑制G1-S期的转化来调节上皮的增殖。本文研究DBPA在皮肤鳞癌中的作用机制及其与角质形成细胞异常分化的关系。方法:用原位杂交的方法检测正常皮肤组织、未受累组织及鳞癌皮损中DBPA mRNA的表达变化。结果:DBPA mRNA强表达于正常组织表皮颗粒层,弱表达于棘层上部;在未受累组织中强表达于颗粒层及棘层上部;在鳞癌中,DBPA可表达于绝大多数的肿瘤细胞。正常组织和未受累组织中DBPA的表达均与鳞癌皮损中的表达有显著差异性(P<0.01)。结论:DBPA可能参与鳞癌的角质形成细胞的分化和增殖。

缺失dbpA导致大肠杆菌DNA复制起始延迟

探讨核糖体成熟因子dbpA对大肠杆菌DNA复制起始的影响。观察ΔdbpA基因缺失突变体的DNA复制式样、细胞倍增时间、细胞体积等表型变化,并使用温度敏感性试验和蛋白定量实验探究dbpA的作用机理。结果发现与野生型BW25113相比,ΔdbpA突变体出现DNA复制的起始延迟,细胞倍增时间延长,细胞体积减小等表型变化,且在LB培养基比在ABTGcasa培养基中的变化更明显。温度敏感性实验显示DbpA与DnaA、DnaB或DnaC蛋白没有相互作用。蛋白定量实验显示ΔdbpA的细胞内总蛋白和DnaA蛋白含量都减少,且在LB培养基比ABTGcasa培养基中的减少程度更大。因此缺失dbpA导致大肠杆菌DNA复制起始延迟,原因可能是dbpA通过影响细菌内核糖体的组装或翻译过程影响蛋白质的合成,使细胞内总蛋白和DnaA蛋白的含量减少。这为明确dbpA的功能提供参考。

卵巢癌组织中dbpA的表达及其对卵巢癌细胞增殖的影响

目的:探讨dbp A蛋白在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:通过荧光定量和蛋白质免疫印迹方法检测临床卵巢癌组织和正常癌旁组织中dbp A的表达量;设计合成针对dbp A基因的双链小干扰RNA转染人卵巢癌细胞系SKOV3和A2780细胞,用荧光定量和蛋白质免疫印迹方法检测细胞中dbp A的表达量,MTT法和克隆形成试验检测细胞的增殖能力和克隆形成能力,流式细胞术检测各组细胞周期和细胞凋亡的变化。结果:dbp A在卵巢癌组织、SKOV3和A2780细胞中表达较癌旁正常卵巢组织显著升高。沉默dbp A后,SKOV3和A2780细胞中dbp A蛋白表达量显著降低,SKOV3和A2780细胞增殖能力和克隆形成能力显著下降(P<0.05),G0/G1期细胞百分比显著增加(P<0.01),S期细胞百分比明显减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。结论:dbp A在卵巢癌组织和卵巢癌细胞SKOV3和A2780中过表达,沉默dbp A基因后可抑制SKOV3和A2780细胞的增殖能力和克隆形成能力。

伯氏疏螺旋体表面蛋白DbpA和DbpB研究进展

莱姆病(LD)是一种以蜱为传播媒介的螺旋体感染性疾病,是由伯氏疏螺旋体(BB)所致的自然疫源性疾病。伯氏疏螺旋体表面有多种具有致病性和免疫原性的蛋白,其中,表面蛋白DbpA和DbpB是与动物结缔组织的糖胺聚糖GAGs结合的主要蛋白,它们影响着病原体在组织定植、播散,同时也是螺旋体的重要毒力因子,深入研究表面蛋白DbpA和DbpB将对莱姆病的发病机制研究、临床诊断及防治具有重要意义。

DNA结合蛋白DbpA影响DNA聚合酶性能的研究

DNA聚合酶是催化DNA合成的酶,在体内和体外都具有重要的作用.在体内DNA聚合酶参与DNA的复制、损伤修复等,在体外DNA聚合酶是现代分子生物学重要的工具酶.Pfu DNA聚合酶因具有高保真性而被广泛使用,但延伸速度慢,提高其延伸速度将使其应用更加广泛.DbpA是古生菌Sulfolobus solfataricus细胞内含量丰富的非特异性双链DNA结合蛋白,分子质量8ku.本研究通过引物重叠延伸的方法得到密码子优化的DbpA基因,并构建得到Pfu-DbpA基因.结果表明:融合有DbpA蛋白的Pfu DNA聚合酶(Pfu-DbpA DNA聚合酶)自身的热稳定性不受影响,而延伸速度得到了提高;同时具有更高的耐盐性,说明具有更高的持续合成能力,并且能够适应更广泛的缓冲液体系.应用Pfu-DbpA DNA聚合酶扩增λDNA不同长度的片段,结果显示其比Pfu DNA聚合酶具有更好的应用效果.

饮用水消毒副产物的去除途径及进展

饮用水使用氯消毒产生的副产物对人类健康带来了极大危害。介绍饮用水消毒副产物的形成原因及影响因素,并从选择优质水源、降低消毒副产物的前体物质、替换传统的消毒剂、去除已生成的消毒副产物4个方面论述了饮用水中消毒副产物的各种去除途径及进展。

DNA结合蛋白A在银屑病皮损中的表达

目的研究DNA结合蛋白A(DBPA)在银屑病皮损中的表达及其与表皮角质形成细胞分化的关系。方法采用免疫组化和原位杂交的方法检测正常皮肤组织、未受累组织和银屑病皮损中DBPA蛋白和mRNA的表达变化。结果 DBPA蛋白和mRNA强表达于正常组织表皮颗粒层,弱表达于棘层上部;在未受累组织中强表达于颗粒层及棘层上部;在银屑病皮损中,DBPA表达于除基底层的表皮全层。结论 DBPA可能参与银屑病角质形成细胞的分化和增生。

紫外分光光度法测定N,N-二乙基二叔丁基亚磷酰胺酯的含量

采用N,N-二乙基二叔丁基亚磷酰胺酯(DBPA)与HI的裂介反应,用紫外光谱法测定样品DBPA的含量。RSD为0.52%线性范围0-0.498 mg/mL,回收率为98%-102%。

基于芯片技术探讨结直肠癌中沉默DNA结合蛋白A的基因表达谱分析

目的基于基因芯片技术探讨短发夹RNA沉默人结直肠癌细胞DNA结合蛋白A(dbpA)表达后利用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析发现与dbpA相关的结直肠癌发生、发展的信号通路。方法选取结直肠癌SW620细胞中表达差异的基因进行深度检测和分析,采用基因芯片技术挖掘差异基因,并运用定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)对芯片结果进行验证,综合分析工具进行GO功能富集分析及KEGG信号通路分析。结果dbpA敲低后基因芯片检测差异表达基因有578条,其中181个基因上调,397个基因下调,显著上调基因有CFL2、C12orf39、EREG、SESN2、CXCL3、CXCL1、VLDVR、DDIT4、INHBE等60个基因,显著下调基因在PRDM10、PCDH19、SRSF8、FGFBP1、TFF2、MTDH、TCF7、EHHADH、WDR77、CEACAM6等60个基因。dbpA敲除后SW620细胞中与肿瘤形成有关的通路主要与“生物过程”有关,包括丝裂原活化蛋白激酶信号通路、癌症途径、NOD样受体信号通路、趋化因子信号通路、粘着斑、基底细胞癌、Wnt信号通路等。基因网络图分析显示有10个基因表达水平下降(FASLG、PDGFA、FGF18、MAP3K7、FGF3、CSDA、NF1、RAP1A、HSPA1A、LAMTOR3等),4个基因表达水平上升(DUSP5、PRAS2、CDC42、DUSP2等),dbpA与MAPK信号通路相关性最大。选择KMAPK信号通路中的5个相关基因即RAPIA、TAK1(MAP3K7)、DUSP5、CDC42、ZAK进行Western blot验证表明,DUSP5表达水平明显上调(P<0.05),RAP1A、TAK1、ZAK表达水平下降,RAP1A、TAK1表达水平下降明显(P<0.05)。dbpA可能通过MAPK通路调节结直肠癌细胞的发生。结论dbpA参与调控的靶基因和信号通路可能为MAPK相关通路,还需要进一步在多细胞和动物实验中研究揭示dbpA下调通路之间的关系及CDC42在结直肠癌发展中的作用。