血清AFP、AFP-L3、GP73及DCP在慢性乙肝和肝癌诊治中的价值分析

目的探讨血清甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)、高尔基体73(GP73)及异常凝血酶原(DCP)在慢性乙肝及肝癌诊治中的临床价值。方法回顾性选取2022年1月至2023年3月在浙江大学医学院附属金华医院就诊的肝癌患者78例(肝癌组)、慢性乙肝患者90例(慢性乙肝组)为研究对象,另择同期在本院健康体检者70名作为正常对照组。采集研究对象清晨空腹静脉血检测血清AFP、AFP-L3、GP73及DCP。比较3组研究对象血清AFP、AFP-L3、GP73及DCP阳性率和水平;分析以上指标血清水平对肝癌的诊断效能;比较肝癌组患者手术前后以上指标的血清水平。结果3组研究对象血清AFP、AFP-L3、GP73及DCP阳性率与水平比较差异均有统计学意义(均P<0.05),且血清GP73、DCP水平肝癌组>慢性乙肝组>正常对照组(均P<0.05)。AFP、AFP-L3、GP73与DCP诊断肝癌的AUC分别为0.745、0.916、0.753和0.785。其中AFPL3的AUC最大,最佳截断值为9.35%,灵敏度为0.859,诊断效能较高;AFP的最佳截断值为9.37 ng/mL,特异度最高为0.900,但其灵敏度较低为0.564。肝癌组患者手术后血清AFP、AFP-L3、GP73及DCP水平均较手术前降低(均P<0.05)。结论血清AFP、AFP-L3、GP73及DCP对慢性乙肝及肝癌有一定的辅助诊断价值,可能是肝癌患者术后预后的潜在预测指标。

小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定

为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。

小反刍兽疫病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立

为建立一种能准确、灵敏地检测小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)抗体的ELISA方法,通过诱导BL21(DE3)-pET-30a-PPRV N表达菌种获得PPRV N蛋白,将纯化的PPRV N蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株能够高效表达、稳定分泌和具有较好竞争效果的抗PPRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1G2)。以纯化的PPRV N蛋白为包被抗原,HRP标记的1G2单克隆抗体(1G2-HRP)作为竞争抗体,建立了小反刍兽疫病毒竞争ELISA(competitive ELISA,cELISA)抗体检测方法。经优化反应条件确定最佳抗原包被浓度为1.0μg/mL,待检血清最佳稀释条件为4倍稀释,1G2-HRP酶标抗体最佳工作浓度为250 ng/mL;当阻断率(PI值)小于42%,判定为抗体阴性;阻断率大于或等于42%,判定为抗体阳性。该方法最低可检测128倍稀释的PPRV抗体阳性血清,具有较高的敏感性;仅能检测PPRV抗体,与羊源常见病原和pET-30a-BL21(DE3)的抗体阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间变异系数均小于15%,具有良好的重复性。该方法与血清中和试验的阳性符合率为87.80%(95%CI:73.80,95.92),阴性符合率为94.95%(95%CI:88.61,98.34),总符合率为92.86%(95%CI:84.11,97.64),Kappa值为0.83(95%CI:53.10,112.50),具有较高的符合率。表明建立的ELISA方法在我国PPRV的流行病学调查、疫苗免疫效果评估方面具有良好的应用前景。

CAR、FAR、LDH、D-二聚体对间质性肺病合并病毒感染严重程度的预测价值

目的 评估C-反应蛋白/白蛋白比值(CAR)、纤维蛋白原/白蛋白比值(FAR)、乳酸脱氢酶(LDH)、D-二聚体对间质性肺病(ILD)合并病毒感染严重程度的预测价值。方法 选取2019年6月-2022年12月在承德医学院附属医院临床诊断为间质性肺病(ILD),病毒血清学IgM抗体阳性的49例患者为病例组并随机选取病毒血清学IgM阴性54例患者作为对照组,收集并分析它们的临床资料,实验室检查结果。结果 49例患者中最常见的单一病毒感染是乙型流感病毒,混合感染是甲型流感病毒+腺病毒+呼吸道合胞病毒;感染患者年龄较对照组大(P<0.05),咳嗽、咳痰、呼吸困难的比率较对照组高(P<0.05);感染患者CAR、FAR、LDH、D-二聚体、血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、纤维蛋白原(FIB)、纤维蛋白原降解产物(FDP)高于对照组(P<0.05),治疗好转率、氧合指数、白蛋白(ALB)较对照组低(P<0.05);CAR、FAR、LDH、D-二聚体与炎症因子ESR、CRP呈正相关(P<0.05);与氧合指数呈负相关(P<0.05),ROC曲线显示联合四项指标有较高的曲线下面积(AUC=0.791),联合指标的AUC大于CAR(Z=2.323,P=0.020)、FAR(Z=2.062,P=0.039),但与D-二聚体(Z=1.876,P=0.061)、LDH(Z=1.182,P=0.237)差异无统计学意义。结论 感染患者CAR、FAR、LDH、D-二聚体明显升高,炎症反应剧烈,治疗效果不佳。

血清DCP、AFP、AFP-L3和HSP90α在原发性肝细胞癌诊断中的应用价值

目的:探讨血清异常凝血酶原(DCP)、甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)、热休克蛋白90α(HSP90α)检测在原发性肝细胞癌(HCC)诊断中的临床应用价值,为临床提供参考。方法:选取2021年10月—2022年6月安徽医科大学附属巢湖医院收治的64例原发性肝癌(PHC)患者作为研究对象,将其中50例HCC患者与同期就诊的30例失代偿期肝硬化患者、30例乙型病毒性肝炎患者及30例健康人群分为HCC组、肝硬化组、肝炎组及健康对照组,检测并比较分析所有研究对象血清DCP、AFP、AFP-L3、HSP90α水平。结果:HCC组血清AFP、AFP-L3、DCP、HSP90α水平及GALAD评分均较其他三组高,差异有统计学意义(H=39.885、28.618、57.601、46.252、85.734,P<0.05)。绘制ROC曲线,AFP、AFP-L3、DCP、HSP90α及GALAD评分的受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为0.804、0.680、0.883、0.838及0.936。GALAD评分联合HSP90α诊断的AUC最高,为0.940。AFP、DCP与HSP90α三者联合可将诊断敏感度提高至84.0%。HBV组AFP、DCP水平及GALAD评分均高于非HBV组,差异有统计学意义(Z=-2.251、-1.668、-2.288,P<0.05),两组AUC值最高者均为GALAD,分别为0.951、0.903。结论:HCC相关肿瘤标志物单项检测敏感性较低,联合检测可明显提高诊断敏感性和准确性,增加HCC筛查阳性率。

双抗体阻断ELISA检测小反刍兽疫病毒抗体的方法建立

小反刍兽疫病毒(PPRV)的N蛋白是血液中此病毒抗体的主要靶蛋白,本研究克隆并表达N蛋白,将纯化后的N蛋白免疫新西兰大白兔来制备多克隆抗体,采用饱和硫酸铵沉淀法收集多克隆抗体,再用辣根过氧化物酶标记此抗体。用纯化的N蛋白包被96孔板,酶结合物多克隆抗体作为检测抗体,建立了检测小反刍兽疫病毒双抗体阻断ELISA方法,经过反复优化,N蛋白的最佳包被浓度为3.0μg/m L,酶结合物抗体的最佳稀释比例为1∶800,利用本研究确定的方法对200份血清样本进行检测,符合率为95%(169/200),本研究确定的方法可用于检测血清中PPRV的抗体水平,为今后小反刍兽疫的防控和疫苗效果的检测提供基础。

小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立

本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法。以H蛋白4个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法,然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价。结果显示,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10^(-6)μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶100;血清及酶标二抗孵育时间均为10 min,检测方法的临界值为S/P=9.77%,批内及批间变异系数均小于10%;与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应;用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测247份田间血清,两者相对符合率为94.33%,但化学发光法敏感性更高。研究结果表明,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定,可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测。

茶粕的营养价值、功能特性及其在动物生产中的应用

茶粕是油茶果实榨油后的残留物,其粗蛋白质和碳水化合物含量高,且含有不饱和脂肪酸、茶皂素、单宁、生物碱及少量黄酮、多糖等活性成分,具有较好的营养价值和功能特性。因加工工艺不同,茶粕一般可制成粉状、颗粒状和饼状,经提皂加工后粗蛋白质含量增加,粗纤维含量降低,可作为蛋白质饲料替代部分豆粕使用。本文综述了茶粕的营养价值和功能特性、茶皂素的提取工艺以及茶粕在畜禽和水产动物生产中的应用,以期为非常规饲料的开发利用提供理论指导。

植物开花调控中蛋白质相分离机制在从头驯化中的应用价值

全球气候变化和人口快速增长严重威胁世界粮食安全,现有作物难以满足人类未来的粮食需求,亟需高产优质且环境适应性强的作物品种。利用野生种质资源进行快速从头驯化,获得可应用于育种的新种质是应对粮食安全问题的新策略。开花时间性状是决定作物种植区域和最终产量的重要因素,在作物驯化中常常受到选择。目前在从头驯化中,通常直接利用控制作物开花的主效基因来改造开花性状,基因数量非常有限且功能较为单一。植物成花转变受到环境和内源性信号的复杂调控,本文提出利用调控开花基因表达的重要蛋白质的可逆行为变化——蛋白质相分离定向改造蛋白功能,从而精准控制开花相关基因的表达,可能为从头驯化中开花性状的分子设计提供新的选择。

IFITM3对小反刍兽疫病毒在山羊子宫内膜上皮细胞中增殖的调控效应

干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)在调控病毒感染过程中发挥重要作用,而其在小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)感染中是否发挥作用尚不明确。本研究旨在探究IFITM3对PPRV感染的影响。通过Western blot技术检测PPRV感染对山羊子宫内膜上皮细胞(endometrial epithelial cells,EECs)中IFITM3表达的影响,进一步通过基因过表达及敲降技术探究IFITM3对PPRV复制的影响。结果表明,PPRV感染山羊EECs后,PPRV N蛋白表达水平持续升高,而IFITM3的表达水平较未感染对照组呈先上升后下降趋势。在感染后2 h,IFITM3的表达极显著上调(P<0.001);感染后3~4 h,IFITM3的表达水平最大(P<0.0001);感染后24 h,IFITM3表达水平下降且与对照组差异不显著。抑制IFITM3表达与对照组相比,PPRV感染后0~6 h,细胞内PPRV的N蛋白水平下降,感染6 h时下降尤为明显(P<0.01);感染后12~24 h,细胞内PPRV的N蛋白水平变化不明显。过表达IFITM3与对照组相比,感染后6 h,细胞内PPRV的N蛋白水平极显著上升(P<0.001);感染后12~24 h,细胞内PPRV的N蛋白水平较对照组不显著。以上结果表明,PPRV感染山羊EECs早期,通过上调IFITM3表达水平促进PPRV在宿主细胞的复制水平。

厄贝沙坦氢氯噻嗪联合金匮肾气丸治疗高血压慢性心力衰竭患者的临床效果及对NLRP3/NF-κB通路的影响

【目的】探讨厄贝沙坦氢氯噻嗪联合金匮肾气丸治疗高血压慢性心力衰竭(CHF)患者的临床效果及对核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族3(NLRP3)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响。【方法】选择2019年5月至2022年5月本院收治的106例高血压CHF患者,根据随机数字表法将其分为观察组(厄贝沙坦氢氯噻嗪联合金匮肾气丸治疗)和对照组(厄贝沙坦氢氯噻嗪治疗),每组53例。比较两组疗效、中医证候积分、血压水平、心功能[B型脑钠肽(BNP)、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室收缩末内径(LVESD)]、NLRP3/NF-κB通路指标[NLRP3、NF-κB、白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]及安全性。【结果】观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后胸闷心悸、难以平卧、下肢水肿、心悸目眩、头晕耳鸣、少气懒言、倦怠乏力中医证候积分低于对照组(P<0.05);观察组治疗后收缩压、舒张压低于对照组(P<0.05);观察组治疗后BNP、LVEDD、LVESD低于对照组,LVEF高于对照组(P<0.05);观察组治疗后NLRP3、NF-κB、IL-1β、IL-18、TNF-α低于对照组(P<0.05);观察组不良反应发生率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】厄贝沙坦氢氯噻嗪联合金匮肾气丸治疗高血压CHF,能有效改善患者临床症状和体征,降低血压水平,提高心功能,抑制NLRP3/NF-κB通路激活,安全可靠。

不同的脱蛋白方法用于螺旋藻多糖提取工艺的研究

对比了两种不同的脱蛋白方法(酶+Sevage法和三氯醋酸法)在螺旋藻多糖提取工艺中的应用。研究结果表明,不同的除蛋白方法不仅影响蛋白质的去除率和多糖的得率,而且所得到的螺旋藻多糖在组分、分子大小及单糖组成上存在较大差异。

适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法

为了探索适用于双向电泳（2-DE）分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇（DTT）/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法。以7cm、pH3-10的线性固相pH梯度（immobilized pH gradient,IPG）胶条作为第一向电泳,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）（12.5%的分离胶）作为第二向电泳,对提取物进行2-DE分离,采用银染显色。结果表明,上述4种方法在2-DE图谱上分别得到140,215,181和616个蛋白质点。其中以改良的Tris-HCl提取法得到的蛋白质点数最多,且背景清晰、图谱上没有明显的横纵条纹。为了进一步验证改良的Tris-HCl提取法的有效性,用18cm、pH3-10的线性IPG胶条和12.5%的分离胶对提取的苹果叶片蛋白质进行2-DE分离,考马斯亮蓝R-250染色,共检测到455个蛋白质点,其相对分子质量主要分布在14000-66000范围内,图谱背景清晰,再次证明应用该方法制备的样品适用于双向电泳分析,可用于苹果叶片的蛋白质组学分析。

大枣多糖脱蛋白方法的研究

以大枣多糖为对象,比较了多糖的多种脱蛋白方法。在实验比较的五种脱蛋白方法中,复合酶法效果最佳,用中心复合实验设计的方法,研究了不同工艺条件组合对多糖脱蛋白效果的影响,并得出脱蛋白效果最佳时的工艺条件为:蛋白酶浓度为5.3%、反应温度为55℃、反应时间为3.3h。

脱脂、脱蛋白处理对板栗粉膨胀势的影响

【目的】比较3个品种群的24个主栽品种板栗粉膨胀势及其脱脂、脱蛋白处理后膨胀势变化的差异,分析板栗粉的主要物质组成与其膨胀特性的关系,为板栗粉加工产品的研制提供理论依据。【方法】采用冷冻干燥法制取板栗全粉,索氏提取法制取脱脂板栗粉,碱液沉淀法制取脱蛋白板栗粉,索氏提取法和碱液沉淀法制取脱脂脱蛋白板栗粉;采用吸水膨胀离心法测定系列板栗粉膨胀势,凯氏定氮法测定蛋白质含量,索氏提取法测定脂肪含量,蒽酮比色法测定淀粉含量。【结果】板栗全粉的膨胀势在不同品种之间以及不同品种群之间均存在差异,其中北方品种群板栗全粉膨胀势最低。脱脂处理对板栗粉膨胀势的影响相对较小。各品种板栗粉脱蛋白处理后膨胀势均显著升高,脱蛋白板栗粉膨胀势以及膨胀势的变化值均在品种间存在差异。脱脂脱蛋白处理使大部分板栗粉膨胀势显著升高,不同品种之间存在差异,且脱脂脱蛋白板栗粉膨胀势按照北方品种群、中间类型品种群和南方品种群的顺序依次降低,其中北方品种群和南方品种群之间差异显著。板栗粉中的淀粉含量、蛋白质含量和脂肪含量在各品种之间存在差异,淀粉含量与板栗粉膨胀势存在显著相关性。【结论】淀粉是影响板栗粉膨胀势的重要因素,板栗粉中的蛋白质和脂类物质的共同作用显著影响板栗粉的膨胀势特性。脱脂、脱蛋白处理使板栗粉膨胀势发生改变,脱脂处理对板栗粉膨胀势影响相对较小,脱蛋白处理使板栗粉膨胀势显著增加,这种变化趋势及变化量与品种密切相关,并在一定程度上具有地域分布特性。

壳聚糖絮凝纯化香菇多糖的研究

研究了壳聚糖对香菇多糖提取液的沉降作用,考察了壳聚糖用量、沉降时间、溶液酸度对吸附色素、沉降蛋白质和多糖损失的影响,同时考察了壳聚糖对超滤膜分离初始膜通量的影响。实验结果表明壳聚糖对香菇多糖提取液中色素和蛋白质具有较好的絮凝沉降效果,当壳聚糖的用量为5.0mg/mL,絮凝沉降时间为40min,溶液pH为5.0时,60r/min的转速搅拌条件下,色素含量降低了约28%,蛋白质含量降低了42%左右,而多糖含量只损失8.9%左右,溶液粘度降低了11.8%,采用超滤分离时,经壳聚糖沉降的多糖溶液初始膜通量增加了14%左右。

桑椹与叶片蛋白质双向电泳样品制备方法的比较试验

为建立适合于桑树蛋白质组研究的双向电泳技术体系,以桑品种"大10"的桑椹与叶片为材料,探讨了桑树蛋白质不同提取方法对凝胶电泳效果的影响。结果表明,改良酚提取法与常规的SDS提取法、尿素/硫脲提取法相比,电泳图谱清晰,分离效果良好,能检测到更多的蛋白质组分,适用于桑椹与叶片蛋白质IPG-IEF/SDS-PAGE双向电泳及SDS-PAGE电泳的样品制备。

醇变性大豆蛋白在物理改性条件下的溶出行为和机理

研究了超声波、高速剪切以及加热对醇变性大豆蛋白的溶出速率和溶出蛋白质分子质量分布的影响。常温下的溶出速率随时间延长而降低 ,超声波或高速剪切作用使溶出速率增加 ,其溶出物中的蛋白质主要以分子形式存在。加热至 90℃可以将溶出初速率明显提高 ,但随后很快降低 ;溶出物主要是分子质量较大的蛋白质聚集体。研究表明 ,超声波和高速剪切的增溶机理是增加醇变性大豆蛋白中可溶性蛋白质的扩散速率 ;加热增溶的机理是破坏分子间非共价键从而使不溶性蛋白转化为可溶性蛋白。

人支气管上皮组织癌变各阶段2-DE图谱及差异分析

背景与目的:支气管上皮细胞的癌变是一个多基因参与、多阶段的复杂过程,但癌变机理仍不清楚,应用蛋白质组学技术研究此过程有可能识别癌变相关蛋白质,对揭示肺鳞癌癌变机制具有重要的意义。本研究的目的是优化支气管上皮组织的蛋白质样品制备方法,建立人支气管上皮癌变各阶段组织的2-DE图谱并进行差异分析,为鉴定肺鳞癌癌变相关蛋白质奠定基础。方法:收集、筛选人支气管正常上皮、鳞状上皮化生、不典型增生和上皮浸润癌组织标本。改良的脱氧胆酸-三氯醋酸(deoxycholate-trichloroaeticacid,DOC-TCA)法提纯支气管上皮总蛋白质,应用固相pH梯度双向凝胶电泳分离各阶段组织的总蛋白质,凝胶经银染显色后,用ImageMaster2D软件分析图谱,比较差异表达蛋白质。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱(peptidemassfingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质。结果:应用改良的DOC-TCA法提纯总蛋白质进行双向电泳,获得了分辨率高、重复性好的人支气管上皮组织的双向电泳图谱,支气管正常上皮、鳞状上皮化生、不典型增生和上皮浸润癌组织凝胶的平均蛋白质点数依次为1189.50±39.89、1227.

天麻多糖水提及脱蛋白工艺优化

目的:摸索天麻多糖水提和脱蛋白工艺条件,为天麻多糖提取纯化的工业化提供理论依据。方法:采用正交实验研究了温度、物料比、时间对天麻多糖(GPS)提取工艺的影响;对比了两种不同的脱蛋白方法(Sevag法和酶-Sevag法)在天麻多糖纯化工艺中的应用。结果:水提最佳工艺为物料比1∶40,浸提温度120℃,浸提时间3 h。酶-Sevag法相对于Sevag法除蛋白效果好,且多糖得率高。