ERK阻滞剂PD98059对去分化软骨细胞逆分化的影响

目的探讨胞外调节蛋白激酶(ERK)阻制剂PD98059促使去分化软骨细胞逆分化的作用,为解决软骨组织工程种子细胞来源问题提供依据。方法将猪耳廓软骨细胞体外扩增至第5代,实验组加入PD98059(20mmol/L)含10%胎牛血清的F12培养液培养,每3天换液1次,未加PD98059培养为对照组。培养7天后,观察细胞阻断后单层与三维培养细胞表型变化,RT-PCR法检测两组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖(Aggrecan)和Sox9基因表达。将经过三维环境培养的细胞植入裸鼠皮下后于第6周、8周组织学检测软骨组织形成情况。结果实验组老化软骨细胞形态与阳性对照组相比无明显变化。Ⅱ型胶原、Aggrecan、Sox9 mRNA均表达阳性。特殊染色显示裸鼠体内6周、8周均有软骨组织形成,Ⅱ型胶原免疫组织化学检测示6周、8周基质中Ⅱ型胶原表达均为阳性,对照组则未见阳性表达。结论 PD98059可部分逆转软骨细胞老化,可作为一种解决软骨组织工程种子细胞问题的新方法。