鹿筋胶原蛋白提取工艺优化研究

以梅花鹿鹿筋为试材,采用单因素试验和正交试验优化鹿筋胶原蛋白的提取工艺,经过试验获得最佳工艺条件为A_(1)B_(2)C_(2)D_(2),即醋酸浓度为0.5 mol/L,料液比为1∶40 g/mL,浸泡时间为30 h,胃蛋白酶与底物比例为1∶700,在此工艺条件下,鹿筋胶原蛋白回收率可达59%。

鹿筋胶原蛋白提取条件优化

为对鹿筋胶原蛋白提取条件进行优化,该试验采用单因素分析及正交试验筛选出鹿筋胶原蛋白提取条件,以及提取产物对体外培养MC3T3成骨细胞的增殖作用。结果表明:最佳提取条件为醋酸体积分数5%,浸泡时间48 h,煎煮时间1.5 h,胃蛋白酶用量1∶1000,酶解时间6 h,鹿筋胶原蛋白回收率58.56%,蛋白质含量48.4%。优化后的条件下提取的鹿筋胶原蛋白对MC3T3细胞具有显著的增殖作用,其增殖作用呈量效关系,当浓度为8 mg/mL时,增殖作用最为显著。因此,鹿筋胶原蛋白提取条件优化后,回收率增加;鹿筋胶原蛋白对体外培养的成骨细胞具有明显的增殖作用,为其产品的开发提供理论依据。

鹿筋胶原蛋白多肽透皮吸收试验研究

研究2种酶解法制备得到的鹿筋胶原蛋白多肽对体外皮肤吸收的影响。采用单酶法和双酶法制备得到2种鹿筋胶原蛋白多肽DSCP-1和DSCP-2,以离体小鼠的皮肤为透皮屏障,应用透皮吸收仪,分别于不同时间取样,测定透皮液中蛋白质的透皮率和分子量分布。结果表明,鹿筋胶原蛋白多肽经透皮试验后,透皮液中分子质量主要分布在5~26 k Da之间,约占80%以上;DSCP-1的透皮率为3.83%,DSCP-2的透皮率为6.15%。2种酶解方法制备得到的胶原蛋白多肽均可透过皮肤,双酶法制备得到的鹿筋胶原蛋白多肽更易于透过皮肤。

鹿筋胶原蛋白多肽对骨细胞的作用

目的研究鹿筋胶原蛋白中氨基酸组成及其对骨细胞的作用。方法以双酶法制备的鹿筋胶原蛋白多肽为研究对象,利用柱前衍生化的方法测定其氨基酸的相对含量;采用MTT法检测其对C518软骨细胞和MC3T3-E1成骨细胞的增殖作用。结果在鹿筋胶原蛋白中,甘氨酸相对含量最高,为31.81%,羟脯氨酸的相对含量为6.99%,符合胶原蛋白组成的特点。与对照组比较,鹿筋胶原蛋白多肽对C518细胞、MC3T3-E1细胞均具有显著的增殖作用,其增殖作用呈量效关系,当浓度为200μg/m L时,增殖作用最为显著。结论鹿筋胶原蛋白多肽对骨细胞具有明显的增殖作用,为其产品的开发提供理论依据。

响应面法优化鹿筋胶原蛋白酶解工艺及其氨基酸含量

对鹿筋进行深入加工、开发、利用,采用响应面法优化鹿筋胶原蛋白酶解工艺。以酶解温度、酶解时间、pH为自变量,鹿筋胶原蛋白水解度为因变量,进行单因素试验,采用Box-Behnken法进行响应面试验设计,确定鹿筋胶原蛋白的最佳酶解工艺。通过氨基酸分析,初步研究鹿筋胶原蛋白的特征性质。结果表明,最佳酶解工艺为pH 9.4,酶解时间5 h,酶解温度53℃(初始底物浓度3%、酶底比1%)。在此条件下,水解度为31.07%。氨基酸分析结果表明,鹿筋胶原蛋白的氨基酸组成中,甘氨酸含量最高,约占氨基酸总含量的30.25%,同时脯氨酸和羟脯氨酸含量也较高,分别占氨基酸总含量的8.24%和6.05%,符合胶原蛋白特征性质。