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意大利蜜蜂幼虫防御素Defensin-2在吡虫啉胁迫下的表达分析
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作者 王远晨 王悦弟 +2 位作者 陈兰春 秦启倩 李治 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期1603-1614,共12页
防御素在昆虫免疫抵抗农药危害中具有重要作用,但蜜蜂防御素Defensin在幼虫抵御吡虫啉毒性中的作用鲜有报道。生物信息学鉴定意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica防御素Defensin-2,分析其在吡虫啉暴露下蜜蜂幼虫中的表达模式,探讨其在... 防御素在昆虫免疫抵抗农药危害中具有重要作用,但蜜蜂防御素Defensin在幼虫抵御吡虫啉毒性中的作用鲜有报道。生物信息学鉴定意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica防御素Defensin-2,分析其在吡虫啉暴露下蜜蜂幼虫中的表达模式,探讨其在幼虫抵御吡虫啉中的作用。生物信息学方法分析Defensin-2的氨基酸序列特征、功能域、高级结构、互作靶标、系统进化聚类关系;RT-qPCR分析幼虫口服暴露吡虫啉后Defensin-2基因的表达特征。结果显示,Defensin-2蛋白由104个氨基酸残基组成,相对分子质量为11.9 kDa,等电点PI为8.54,具有信号肽和跨膜结构域。多重序列比对显示Defensin-2属于防御素样超家族。系统进化分析表明,Defensin-2聚类于蜜蜂家族;RT-qPCR分析表明,在半致死浓度吡虫啉暴露下,Defensin-2基因在24 h时显著上调表达后在72 h时下调表达,但在环境浓度吡虫啉暴露后72 h,Defensin-2表达量呈显著上调。Defensin-2可能在意大利蜜蜂幼虫抵御吡虫啉毒性中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 吡虫啉 意大利蜜蜂幼虫 defensin-2 生物信息学
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CGD-1, a defensin-related peptide derived from marine Chinese medicine Ostreae concha, inhibits the Gram-negative bacteria by membrane attack
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作者 Wei-Tao Wang Qing-Zhou Meng +7 位作者 Long-Fen Li Wei-Yi Meng Xin Yin Pei-Pei Zhao Meng-Meng Wang Jing-Li Ren Xue-Kui Xia Chun-Lei Li 《TMR Pharmacology Research》 2023年第2期38-45,共8页
There is an increasing interest in discovering new antibacterial agents derived from nature to enhance the treatment of various bacterial infections.Defensins and their derived peptide fragments exhibit significant an... There is an increasing interest in discovering new antibacterial agents derived from nature to enhance the treatment of various bacterial infections.Defensins and their derived peptide fragments exhibit significant antibacterial activity without any cytotoxic effects,making them attractive features for potential novel antibacterial therapeutics.Crassostrea gigas,a traditional seafood that has been used worldwide for centuries,has its shells applied in Chinese medicine as Ostreae concha.In this study,bioinformatics analysis was used to obtain a novel antibacterial peptide,CGD-1,derived from marine Chinese medicine Ostreae concha.The physicochemical characterization and circular dichroism analysis results demonstrated that CGD-1 assembled into anα-helical structure in a simulated membrane environment,and it displayed antibacterial action against Gram-negative bacteria.The minimal inhibitory concentrations against both Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 and Escherichia coli ATCC25922 were 25μM.CGD-1 was able to efficiently permeate the cell membrane.Changes in bacterial cell morphology were evaluated using a field emission scanning electron microscope.The results suggested that CGD-1 exerted its antibacterial activity through permeabilizing and disrupting the bacterial cell membrane.Therefore,CGD-1 may have potential applications in fighting against pathogenic bacteria such as P.aeruginosa and E.coli. 展开更多
关键词 defensin antibacterial activity HEMOLYMPH Crassostrea gigas Ostreae concha
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血清HBD-3、DCR3对复杂性肾结石患者经皮肾镜碎石术后尿路感染的预测价值
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作者 魏峰 周广军 +2 位作者 李双辉 王艳艳 季智杰 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2024年第4期342-346,共5页
目的分析血清β-防御素-3(HBD-3)、诱骗受体3(DCR3)对复杂性肾结石患者经皮肾镜碎石术后尿路感染的预测价值。方法选取2020年1月—2022年12月河北省沧州中西医结合医院收治的112例复杂性肾结石患者为研究对象进行回顾性研究,所有患者均... 目的分析血清β-防御素-3(HBD-3)、诱骗受体3(DCR3)对复杂性肾结石患者经皮肾镜碎石术后尿路感染的预测价值。方法选取2020年1月—2022年12月河北省沧州中西医结合医院收治的112例复杂性肾结石患者为研究对象进行回顾性研究,所有患者均行经皮肾镜碎石术(PCNL),根据术后感染情况将患者分为非尿路感染组52例、尿路感染组60例。比较两组一般资料及HBD-3、DCR3水平。受试者工作特征(ROC)曲线分析C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、HBD-3、DCR3水平对术后尿路感染的预测价值。结果与非尿路感染组比较,尿路感染组的HBD-3[(0.77±0.08)ng/mL vs.(1.36±0.25)ng/mL,P=0.001]、DCR3[(4.68±0.53)ng/mL vs.(13.21±0.28)ng/mL,P=0.001]水平较高。多因素logistics回归分析显示,泌尿道手术史、术前尿路感染、手术时间、导尿管留置时间、结石负荷、抗菌药物种类、合并肾功能障碍、术中通道类型CRP、PCT、HBD-3、DCR3为患者术后尿路感染的影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,CRP、PCT、CRP联合PCT准确度分别为70.54%、72.32%、78.57%;HBD-3、DCR3、HBD-3联合DCR3准确度分别为69.64%、75.89%、86.61%。结论复杂性肾结石患者术后尿路感染与多种因素相关,且术后尿路感染患者HBD-3、DCR3表达水平较高,联合检测对术后尿路感染具有较高的预测价值。 展开更多
关键词 复杂性肾结石 经皮肾镜碎石术 β-防御素-3 诱骗受体3 尿路感染 C反应蛋白 降钙素原
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犬β防御素CBD122原核表达及其抗病毒活性研究
4
作者 任艳蓉 李传峰 +3 位作者 孟春春 朱杰 赵建军 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期135-143,共9页
防御素为抗菌肽家族成员,且具有良好的抗菌抗病毒功能。由于抗生素的大量使用其作用已大大降低,而防御素具有良好的抗病毒应用前景,因此本研究将犬β防御素CBD122利用大肠杆菌表达重组蛋白rCBD122,经纯化后在体外细胞上进行抗重组水泡... 防御素为抗菌肽家族成员,且具有良好的抗菌抗病毒功能。由于抗生素的大量使用其作用已大大降低,而防御素具有良好的抗病毒应用前景,因此本研究将犬β防御素CBD122利用大肠杆菌表达重组蛋白rCBD122,经纯化后在体外细胞上进行抗重组水泡性口炎病毒(recombinant Vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein,rVSV-GFP)和犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)活性测定,从而评价重组蛋白抗病毒效果。研究结果显示,37℃诱导5 h,IPTG浓度为0.5 mmol/L时rCBD122表达量较高,且大量表达于菌体破碎后菌液上清液,纯化后表达量为0.22 mg/mL。rCBD122抗rVSV-GFP和CDV感染活性测定结果显示,rCBD122抗VSV-GFP病毒效价为1.17×10^(4)IU/mL;rCBD122抗CDV感染效价为2.34×10^(4)IU/mL。rCBD122可在24 h特异性抑制CDV野毒株SD(14)7在易感细胞上的复制水平(P<0.01),与病毒感染组相比,病毒RNA载量下降16.31倍。因此,本研究应用大肠杆菌表达系统成功表达了重组蛋白rCBD122,且其具有较好的抗病毒活性,为后续防御素作用机制研究以及新型抗病毒治疗药物研发奠定了基础。 展开更多
关键词 犬防御素 原核表达 大肠杆菌 抗病毒 活性
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家蝇幼虫抗菌肽Defensins基因的克隆与序列分析 被引量:10
5
作者 许琴英 金小宝 +1 位作者 徐建华 朱家勇 《热带医学杂志》 CAS 2004年第5期513-517,共5页
目的克隆家蝇幼虫的抗菌肽defensins基因并对其进行序列分析。方法提取家蝇幼虫总RNA,根据家蝇成虫defensins基因cDNA序列设计一对引物,RT-PCR扩增目的基因片段,T-A克隆后测序,应用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果RT-PCR扩增... 目的克隆家蝇幼虫的抗菌肽defensins基因并对其进行序列分析。方法提取家蝇幼虫总RNA,根据家蝇成虫defensins基因cDNA序列设计一对引物,RT-PCR扩增目的基因片段,T-A克隆后测序,应用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果RT-PCR扩增出一条约310bp的目的片段,序列分析表明,其与家蝇成虫防御素基因同源性高达97%,核酸序列变异主要发生在信号肽区域。结论成功克隆及分析了家蝇幼虫防御素基因全长编码区cDNA序列,为其下一步的重组表达和生物活性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 家蝇幼虫 defensins基因 序列分析 克隆
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家蝇抗菌肽Defensin基因同向串联表达载体的构建和鉴定 被引量:9
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作者 王婷婷 金小宝 +1 位作者 朱家勇 刘雷山 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第2期3-5,共3页
目的:构建家蝇抗菌肽Defensin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法:PCR法扩增家蝇抗菌肽Defensin基因成熟肽片断,目的片断的上游5′端带有EcoRⅠ和NheⅠ位点,下游5′端带有NotⅠ和XbaⅠ位点,目的片断首先克隆... 目的:构建家蝇抗菌肽Defensin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法:PCR法扩增家蝇抗菌肽Defensin基因成熟肽片断,目的片断的上游5′端带有EcoRⅠ和NheⅠ位点,下游5′端带有NotⅠ和XbaⅠ位点,目的片断首先克隆入pMD18-T载体,利用pMD18-T载体的NdeⅠ位点和目的片断上的一对同尾酶(NheⅠ和XbaⅠ),多次酶切连接,串联成多拷贝的Defensin成熟肽基因,再用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,最后克隆入甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K。结果:PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明多拷贝基因重组质粒构建成功。结论:该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因,为进一步进行高效表达打下基础。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 defensin基因 同向串联 多拷贝
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白纹伊蚊和埃及伊蚊defensin A基因克隆及序列分析 被引量:6
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作者 刘先凯 赵彤言 +2 位作者 朱礼华 董言德 陆宝麟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2002年第4期216-221,共6页
应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensinA基因 ,并与文献报道的defensinA的5个型的cDNA序列进行同源性比较 ,发现此两序列中存在内元 ;从埃及伊蚊体内扩增的片段为蚊虫defen sinAl的前体AaDefAl;从白纹伊蚊体内扩增的... 应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensinA基因 ,并与文献报道的defensinA的5个型的cDNA序列进行同源性比较 ,发现此两序列中存在内元 ;从埃及伊蚊体内扩增的片段为蚊虫defen sinAl的前体AaDefAl;从白纹伊蚊体内扩增的片段为defensinA的 1个新型 ,命名为DefA6。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 埃及伊蚊 defensin A 基因克隆 序列分析 昆虫防御素 CDNA序列
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家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的增殖、凋亡和周期的影响 被引量:4
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作者 程璟侠 焦莉萍 +3 位作者 赵瑞君 原发家 杜斌 王文建 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2014年第2期97-103,共7页
采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法,分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响,用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响,并采用流式细胞术检测defensin对... 采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法,分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响,用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响,并采用流式细胞术检测defensin对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示,家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的生长有抑制作用,对人正常心肌细胞H9C2无抑制作用。通过显微镜观察HepG2细胞凋亡的形态变化,MTT检测发现defensin对肿瘤细胞的增殖抑制率呈剂量反应关系和时间反应关系。defensin能诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,并且影响人肝癌细胞HepG2的细胞周期。家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用及凋亡作用,对正常人心肌细胞H9C2基本无抑制作用。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 defensin 增殖 凋亡
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家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中的表达及活性鉴定 被引量:3
9
作者 金小宝 王婷婷 +4 位作者 朱家勇 李小波 马艳 褚夫江 卢雪梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期194-197,共4页
拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性。采用限制性内切酶SacⅠ将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至... 拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性。采用限制性内切酶SacⅠ将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至摇瓶,28℃条件下0.5%甲醇诱导表达,连续诱导培养4 d后,上清液进行Tricine-SDS-PAGE检测表达效果,并采用琼脂糖孔穴扩散法检测表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的抑制作用。结果显示,家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中得到了成功表达,表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的生长有抑制作用。说明酵母系统适合抗菌肽的表达。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 defensin 毕赤酵母 表达
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家蝇防御素defensin cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达 被引量:9
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作者 金丰良 许小霞 +2 位作者 赵士炜 古德祥 张文庆 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期86-89,共4页
提取家蝇总RNA,RT-PCR扩增编码家蝇防御素defensin的cDNA,克隆并测定了其序列,将该cDNA序列与酵母表达载体pPICZαA重组,构建酵母分泌型表达载体pPICZα-de,电激法转化毕赤酵母(Pichia pasto-ris)受体菌GS115。经表型筛选和PCR鉴定证明... 提取家蝇总RNA,RT-PCR扩增编码家蝇防御素defensin的cDNA,克隆并测定了其序列,将该cDNA序列与酵母表达载体pPICZαA重组,构建酵母分泌型表达载体pPICZα-de,电激法转化毕赤酵母(Pichia pasto-ris)受体菌GS115。经表型筛选和PCR鉴定证明目的片段已稳定整合到酵母染色体基因组中。在含不同浓度的Zeoc in平板上筛选到高拷贝整合的转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达,用Tric ine-SDS-PAGE确定了表达产物的正确性,琼脂孔穴平板扩散法、比浊法测定了表达产物的活性,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有一定的杀菌活性。 展开更多
关键词 家蝇 防御素 毕赤酵母 诱导表达 活性测定
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公羊附睾不同区段β防御素124表达与精液品质的关系分析
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作者 张俊梅 石攀峰 +3 位作者 雷铭凯 任有蛇 李碧波 张春香 《家畜生态学报》 北大核心 2024年第10期50-57,共8页
为了探究公羊睾丸和附睾不同区段β防御素124(beta-defensins 124,BD124)的表达特征与精液品质之间的关系,该研究选取20只健康杜泊羊×湖羊杂交种公羊,采集新鲜精液测定精子运动学参数,根据精子活力(sperm motility,SM)将公羊分为... 为了探究公羊睾丸和附睾不同区段β防御素124(beta-defensins 124,BD124)的表达特征与精液品质之间的关系,该研究选取20只健康杜泊羊×湖羊杂交种公羊,采集新鲜精液测定精子运动学参数,根据精子活力(sperm motility,SM)将公羊分为高品质组(SM≥60%)和低品质组(SM≤15%),每组各选取3只采集睾丸和附睾不同区段组织,通过免疫组织化学法和Western blot检测BD124定位及表达。结果表明:(1)BD124在附睾头(epididymis head,EH1~EH2)平均光密度值和相对灰度值极显著高于附睾体(epididymis body,EB1~EB3)和附睾尾(epididymis tail,ET1~ET2)(P<0.01),高品质组输出小管(efferent ducts,ED)、EH2、EB1、EB3和ET2区段BD124平均光密度值和相对灰度值均极显著高于低品质组(P<0.01);(2)高品质组精子活率(sperm viability,SV)、A级精子比例(percentage of spermatozoa of the A class,A percent)、平均路径速度(average path velocity,VAP)、直线速度(straight line velocity,VSL)、曲线速度(curvilinear velocity,VCL)和平均侧摆幅值(amplitude of lateral head displacement,ALH)均极显著高于低品质组(P<0.01);(3)相关性分析显示EB1、ET2区段BD124相对灰度值和平均光密度值与SV呈极显著正相关(P<0.01),EB1、ET2区段BD124相对灰度值和平均光密度值与D级精子比例呈极显著负相关(P<0.01),ED、EH2、EB1、EB3、ET2区段BD124的相对灰度值和平均光密度值与A级精子比例、VAP、VSL、VCL、ALH呈极显著正相关(P<0.01)。由此可知,EB1和ET2区段BD124表达与公羊精液品质呈明显正相关关系。 展开更多
关键词 BD124 睾丸 附睾 精液品质 公绵羊
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猪β-防御素-2在黄曲霉毒素B1致小鼠肠道炎症损伤中的作用
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作者 张曼 王坤丽 +4 位作者 王艳慧 李庆豪 李明 边思琦 皇甫和平 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期36-43,共8页
旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)... 旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)、pBD-2组(0.03 mg/kg pBD-2灌胃)和AFB1+pBD-2组(0.3 mg/kg AFB1灌胃28 d后再用0.03 mg/kg pBD-2灌胃28 d),试验持续56 d,通过观察小鼠肠道结构的变化以及采用qPCR和免疫荧光的方法检测炎症相关因子的表达水平。结果:与对照组相比,AFB1组小鼠的平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)均呈现显著下降趋势(P<0.05),料重比(F/G)降低,但差异不显著(P>0.05),而小鼠饲喂pBD-2以后ADG和ADFI均较AFB1组显著增加(P<0.05);HE染色结果显示,AFB1导致小鼠空肠黏膜显著损伤,并伴有严重的肠壁变薄,肠绒毛萎缩、稀疏,肠绒毛高度与隐窝深度之比、相对肠绒毛数量及肠壁厚度均显著降低(P<0.05),而使用pBD-2处理小鼠损伤模型,肠道结构可见显著恢复(P<0.05);qPCR和免疫荧光染色结果表明,AFB1处理小鼠可显著上调白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对白细胞介素-8(IL-8)的表达水平出现了下调趋势,而用pBD-2处理小鼠损伤模型后可显著下调炎症因子的表达水平,说明pBD-2对AFB1造成的肠黏膜炎症具有缓解作用。本研究结果为AFB1中毒的防控及pBD-2在畜牧生产中的应用提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪β-防御素-2 黄曲霉毒素B1 肠道炎症 小鼠
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白纹伊蚊和埃及伊蚊防御素(defensin)成熟肽基因克隆及结构推测 被引量:5
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作者 刘先凯 赵彤言 +2 位作者 朱礼华 董言德 陆宝麟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2003年第1期30-34,共5页
应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensin成熟肽基因并对其分子生物学特性进行分析 ,发现埃及伊蚊 (BoraBora株、海口株 )、白纹伊蚊 (成都株、宜兴株、广州株 )推导的氨基酸序列与埃及伊蚊defensinA相同 ;通过Chou Fas... 应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensin成熟肽基因并对其分子生物学特性进行分析 ,发现埃及伊蚊 (BoraBora株、海口株 )、白纹伊蚊 (成都株、宜兴株、广州株 )推导的氨基酸序列与埃及伊蚊defensinA相同 ;通过Chou Fasman预测法对defensinA成熟肽的二级结构进行预测 ,可以看出在defensin成熟肽氨基酸序列的 15~ 2 3位有一个α 螺旋 ,35~ 39位有一个 β 折叠 ,32~ 34位有一个转角 ; 展开更多
关键词 白纹伊蚊 埃及伊蚊 防御素 成熟肽基因 蚊虫 昆虫防御素 克隆 二级结构 三级结构
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牛中性粒细胞β防御素5对肺炎克雷伯菌感染小鼠的预防作用
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作者 朱树馨 黄璟昇 +6 位作者 申心怡 康伟超 张远嘉 邓志杰 黄康萍 何家康 梁正敏 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期35-40,共6页
为探究牛中性粒细胞β防御素5(bovine neutrophilβ-defensins 5,BNBD5,B5)对肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)感染小鼠的保护作用,将40只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组,B5处理组,KP感染组和B5预处理后感染KP组,每组10只。HE... 为探究牛中性粒细胞β防御素5(bovine neutrophilβ-defensins 5,BNBD5,B5)对肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)感染小鼠的保护作用,将40只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组,B5处理组,KP感染组和B5预处理后感染KP组,每组10只。HE染色观察肺组织病理变化,ELISA检测肺脏TNF-α和IL-1β水平,涂板法检测肺脏和脾脏的细菌载量,流式细胞术检测肺脏巨噬细胞和中性粒细胞。结果表明,鼻内给予B5未引起肺脏病理损伤,未诱导肺脏产生过量TNF-α和IL-1β。B5能减轻KP引起的肺组织病理损伤,显著减少肺脏和脾脏中的细菌载量;增加肺组织中的巨噬细胞和中性粒细胞,明显上调肺组织TNF-α水平。表明鼻内给予B5能保护KP感染小鼠。 展开更多
关键词 牛中性粒细胞β防御素5 肺炎克雷伯菌 感染 先天免疫细胞 小鼠
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糖尿病大鼠肝脏β-defensins表达及血清炎症因子的变化 被引量:7
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作者 蒙广星 袁强 +2 位作者 王毅军 孟化 白飞虎 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第7期591-594,共4页
目的:观察糖尿病大鼠病程中肝脏β-defensins的表达和血清炎症因子的变化,探讨在糖尿病状态时两者之间可能存在的影响.方法:实验大鼠分为普通饲料组、高糖饲料组、糖尿病4wk组和12wk组,采集血液检测血清炎症因子TNF-α,IL-1β及IL-10和... 目的:观察糖尿病大鼠病程中肝脏β-defensins的表达和血清炎症因子的变化,探讨在糖尿病状态时两者之间可能存在的影响.方法:实验大鼠分为普通饲料组、高糖饲料组、糖尿病4wk组和12wk组,采集血液检测血清炎症因子TNF-α,IL-1β及IL-10和血糖、胰岛素、三酰甘油等相关生化指标;收集肝脏标本,RT-PCR及Western Blot方法检测β-defensins的表达.结果:与对照组相比,糖尿病大鼠整个病程中都存在致炎因子TNF-α,IL-1β激活及抗炎因子IL-10的削弱.肝脏中表达β-defensins1(rBD-1)和β-defensins2(rBD-2).rBD-1呈少量表达,糖尿病病程中rBD-2表达呈减少趋势.高血糖或糖基化反应可能干扰rBD-2的组成性表达及炎症因子产生的诱导性表达.结论:糖尿病大鼠病程中存在慢性炎症,高血糖或糖基化反应干扰了炎症刺激重要的小分子抗菌肽β-defensins在肝脏表达的信号通路,使其表达下调. 展开更多
关键词 Β-防御素2 糖尿病 实验性 炎症因子 实时定量PCR 大鼠
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家蝇抗菌肽Defensin基因在COS-7细胞中的瞬时表达 被引量:4
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作者 金小宝 朱家勇 +1 位作者 马艳 刘雷山 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第4期10-11,共2页
目的:研究家蝇抗菌肽Defensin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达情况,并对表达产物的抗菌作用进行初步检测。方法:以Defensin基因为模板设计特异性引物,扩增在C端含6×His标签的Defensin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体p... 目的:研究家蝇抗菌肽Defensin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达情况,并对表达产物的抗菌作用进行初步检测。方法:以Defensin基因为模板设计特异性引物,扩增在C端含6×His标签的Defensin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体pcDNA3.1(+)进行重组,构建重组质粒pcDNA3.1(+)/Defensin-His 6。以阳离子脂质体LipofectamineTM2000为载体,对宿主细胞COS-7进行重组质粒pcDNA3.1(+)/Defensin-His 6和空载体pcDNA3.1(+)的转染,72h后收集细胞培养上清液,表达产物经His-Trap HP亲合层析柱分离纯化和Western blotting鉴定后,进行杀菌活性的初步检测。结果:重组质粒pcDNA3.1(+)/Defensin-His 6组细胞培养上清液的纯化物,行Western blotting得到了分子量大小约为10.0kD的单一目的条带,与预期相符;杀菌活性试验中发现:该纯化物对大肠杆菌E.coliK12D31具有一定的杀菌活性。结论:家蝇抗菌肽Defensin基因在宿主细胞COS-7中得到了正确表达。 展开更多
关键词 天蚕素 真核表达 转染 杀菌活性
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黄芪甲甙对吸烟大鼠气道-defensin 2表达的影响 被引量:5
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作者 孙贝贝 文富强 +5 位作者 王海霞 陈磊 王洵 李继琼 汪涛 徐丹 《西部医学》 2008年第3期482-484,共3页
目的了解熏烟对大鼠肺组织β-防御素2(β-defensin2)表达的影响,黄芪甲甙对β-defensin2表达的调控作用及其可能的机制。方法大鼠接受染毒柜被动吸烟三周,建立熏烟模型。分别给于黄芪甲甙1.2mg/kg·d,2.4mg/kg·d,3.6mg/kg... 目的了解熏烟对大鼠肺组织β-防御素2(β-defensin2)表达的影响,黄芪甲甙对β-defensin2表达的调控作用及其可能的机制。方法大鼠接受染毒柜被动吸烟三周,建立熏烟模型。分别给于黄芪甲甙1.2mg/kg·d,2.4mg/kg·d,3.6mg/kg·d灌胃。提取肺组织和支气管肺泡灌洗液,采用免疫组化、RT-PCR等方法检测β-defensin 2的表达水平。结果吸烟可以使气道上皮β-defensin 2表达升高,使BALF中炎细胞总数,中性粒细胞,巨噬细胞,淋巴细胞数增高。黄芪甲甙可以降低吸烟诱导的β-defensin 2的高表达,减少支气管肺泡灌洗液白细胞及中性粒细胞,淋巴细胞的数量。结论黄芪甲甙下调吸烟诱导的气道上皮β-defensin 2的高表达,减轻气道炎症。 展开更多
关键词 Β-防御素 黄芪甙 吸烟 肺部感染
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防御素(Defensin)研究进展 被引量:12
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作者 李洪军 胡宗利 魏泓 《生物工程进展》 CSCD 2001年第3期34-37,共4页
防御素 (Defensin)是近年来发现的广泛存在于动物和植物体内的一类阳离子抗菌活性肽。它们通常都是由 2 8~ 54个氨基酸残基组成 ,分子内富含精氨酸和由半胱氨酸形成的分子内二硫键。它们具有广谱高效的杀菌活性 ,能有效地杀灭革兰氏阳... 防御素 (Defensin)是近年来发现的广泛存在于动物和植物体内的一类阳离子抗菌活性肽。它们通常都是由 2 8~ 54个氨基酸残基组成 ,分子内富含精氨酸和由半胱氨酸形成的分子内二硫键。它们具有广谱高效的杀菌活性 ,能有效地杀灭革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、某些真菌、螺旋体、被膜病毒等微生物 ,因而对它们的研究已成为当前国际学术界中一个引人关注的研究热点。本文将简述有关防御素的分布、分子结构特征、生物学活性、作用机制、分子生物学特征等方面的研究概况及展望。 展开更多
关键词 防御素 结构特征 生物学活性 作用机制 分子生物学特征 抗菌肽
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家蝇幼虫Defensin成熟蛋白序列的克隆及在原核中的表达 被引量:6
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作者 许琴英 朱家勇 《中国热带医学》 CAS 2005年第1期4-6,37,共4页
目的 克隆家蝇幼虫defensin成熟蛋白编码序列并在大肠杆菌中表迭,为进一步的研究该基因的功能奠定基础。 方法 以家蝇幼虫cDNA文库为模板扩增出defensin基因的成熟蛋白全长编码序列,构建重组原核表达载体pGEX/MDEF,转化的克隆(质粒)通... 目的 克隆家蝇幼虫defensin成熟蛋白编码序列并在大肠杆菌中表迭,为进一步的研究该基因的功能奠定基础。 方法 以家蝇幼虫cDNA文库为模板扩增出defensin基因的成熟蛋白全长编码序列,构建重组原核表达载体pGEX/MDEF,转化的克隆(质粒)通过筛选并测序鉴定。重组的pGEX/MDEF在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE鉴定其表达情况和分子质量并用抗鼠GST单抗作western blot杂交进一步鉴定融合蛋白的表达。 结果 以家蝇幼虫cDNA文库扩增出一条长约为140bp的cDNA片段,经测序证实其为defensin基因成熟蛋白的编码序列,它编码含40个氨基酸的蛋白质,预测其分子质量单位为4kD。被成功克隆入pGEX-4T-1载体的家蝇幼虫defensin基因的cD-NA,在重组大肠杆菌BL21(DE3)中诱导可大量生成相对分子质量30KD融合蛋白。 结论 成功构建了家蝇幼虫de-fensin基因原核表达载体,且其成熟蛋白的编码序列在大肠杆菌高效表达。为下一步表达蛋白纯化,以及研究其生物活性提供了材料。 展开更多
关键词 表达 家蝇幼虫 蛋白序列 克隆 原核 扩增 融合蛋白 N基因 成熟 编码序列
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大劣按蚊感染约氏疟原虫defensins基因的克隆及生物信息学分析 被引量:1
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作者 张锡林 王英 +1 位作者 陈继德 宋蓓 《成都医学院学报》 CAS 2011年第2期94-98,共5页
目的为探讨大劣按蚊对约氏疟原虫侵入的免疫反应,克隆大劣按蚊的抗菌肽defensins基因并对基因序列进行生物信息学分析。方法分别提取感染疟原虫的大劣按蚊的蚊胃总RNA,根据冈比亚按蚊defensins基因设计、合成简并引物,进行RT-PCR扩增目... 目的为探讨大劣按蚊对约氏疟原虫侵入的免疫反应,克隆大劣按蚊的抗菌肽defensins基因并对基因序列进行生物信息学分析。方法分别提取感染疟原虫的大劣按蚊的蚊胃总RNA,根据冈比亚按蚊defensins基因设计、合成简并引物,进行RT-PCR扩增目的片段,TA克隆后测序并进行序列分析。结果用简并引物的RT-PCR扩增出约氏疟原虫感染的大劣按蚊的189bp目的片段,序列分析表明与冈比亚按蚊defensins有87%同源性,与白蚊伊蚊defensinsD有88%同源性,为大劣按蚊的defensins基因。结论成功克隆并分析了大劣按蚊抗菌肽defensins基因,为进一步的重组表达和研究按蚊抗菌肽的生物活性奠定基础。 展开更多
关键词 大劣按蚊 defensins基因 克隆 序列分析
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