大肠杆菌内膜因子yhcB对degQS表达的调节作用的研究(英文)

YhcB作为大肠杆菌中存在的一种功能未知的内膜因子,被证实参与细胞骨架以及肽聚糖生物合成。为了对yhcB的其他性状进行研究,以对其未知功能进行推测,该文检测YhcB过量表达时细胞生长曲线,实验样品分为诱导组以及未诱导组,相对于对照组YciB,分析YhcB过量表达对细胞生长率的影响;Western blot分析检测到过量表达的YhcB被蛋白酶降解,通过lacZ-融合载体构建以及β-半乳糖苷酶活性分析,对yhcB基因及其下游存在的degQS基因是否共转录进行研究。结果显示:通过YhcB过量表达延迟细胞生长阻害这一表现型出发,从蛋白质表达水平以及遗传水平两方面证实,yhcB能够调控蛋白酶编码基因degQS的表达水平。

利用degQ基因提高枯草芽孢杆菌纤溶酶表达

从枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)中通过PCR扩增得到degQ基因,将其克隆到含有枯草杆菌纤溶酶基因的蔗糖诱导表达载体pUBS中,并转化至B.subtillisDB403受体菌,得到基因工程菌DB403(pUBSD)。通过发酵表达证实degQ基因能增强枯草杆菌纤溶酶的表达,酶活提高了2.2倍。同时还对不同种类的糖、不同浓度蔗糖、不同诱导时间等发酵条件进行优化和比较研究。

短小芽孢杆菌degQ基因的克隆与鉴定

degQ基因编码一个由46个氨基酸组成的多肽，能增强许多芽孢杆菌胞外酶基因的表达．以pMK4作克隆载体构建短小芽孢杆菌基因文库，并用DNA探针原位杂交法从中钓出degQ基因．对克隆基因的DNA序列进行了分析并证明克隆的短小芽孢杆菌degQ基因具有增强枯草杆菌蛋白酶和果聚糖蔗糖酶基因表达的能力．degQ基因克隆有助于研究芽孢杆菌的正调控机理并可望提高外源基因在芽孢杆菌中表达．

degQ和sfp提高芽孢杆菌泛革素产量及其机理研究

非核糖体合成途径产生的脂肽化合物泛革素（fengycin）在芽孢杆菌防治真菌病害中起着重要作用。本研究克隆了来自解淀粉芽孢杆菌模式菌株FZB42的sfp和来自枯草芽孢杆菌模式菌株168的多效调控因子deg Q,构建了p P43-deg Q、p MK3-sfp和p P43-deg Q-sfp 3个表达载体,分别转入不能产生泛革素的168菌株中,得到3株工程菌株。抑菌试验表明,168-deg Q-sfp活菌及其脂肽化合物提取物均能显著抑制油菜菌核病菌的生长,而168、168-deg Q和168-sfp不具备该活性。质谱检测表明,只有168-deg Q-sfp能产生泛革素。进一步的荧光定量反转录PCR检测结果表明,菌株168-deg Q-sfp的泛革素合成酶基因簇pps ABCDE的表达量是其他菌株的6-16倍,而菌株168-deg Q和168-sfp与菌株168无明显差异。该研究表明deg Q和sfp 2个功能基因共同存在时能提高泛革素合成酶基因簇的表达量,进而提高泛革素的产量。

过量表达DegQ有利于地衣芽胞杆菌表达高温α-淀粉酶

研究了过量表达DegQ对地衣芽胞杆菌表达高温α-淀粉酶的影响。通过PCR从地衣芽胞杆菌基因组中扩增得到degQ基因,将其克隆到pHY-P43载体中,得到重组质粒pHY-P43-degQ。将其分别转化至地衣芽胞杆菌ATCC14580和B0204中,得到重组菌ATCC14580(pHY-P43-degQ)和B0204(pHY-P43-degQ)。通过发酵试验,证实degQ基因的表达能够显著提高高温α-淀粉酶的表达水平。