多重PCR用于缺失型α-地中海贫血的基因检测

为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α 地中海贫血中的临床应用 ,观察缺失型α 地中海贫血的基因分布频率 ,采用单管多重DNA扩增的方法 (M PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α 地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病的 14 5例患者进行基因检测。扩增产物经 1.2 %琼脂糖凝胶电泳 ,出现 1.3及1.8kb条带者 ,提示为 SEA/αα ;1.6及 1.8kb条带者为 α4.2 /αα ;1.8及 2 .0kb条带者为 α3 .7/αα ;1.3及 1.6或 2 .0kb条带 ,提示为缺失型HbH病 ( SEA/ α4.2 或 SEA/ α3 .7)。结果表明 ,14 5例受检者中发现 10 0例 SEA/αα(6 8.9% ) ,15例 α3 .7/αα(10 .3% ) ,8例 α4.2 /αα(5 .5 2 % ) ,2例 α3 .7/ α4.2 (1.38% ) , α3 .7及 α4.2 纯合子各 1例 (0 .6 9% ) ;14例 SEA/ α3 .7(9 6 5 % ) ,2例 SEA/ α4.2 (1.38% ) ;另有 2例患者产前诊断证实为Bart水肿胎儿。结论 :运用多重PCR技术可以准确、简便、快速地检测我国南方地区常见的 α3 .7、 α4.2 、 SEA3种缺失型α 地中海贫血 ,这一技术对α 地中海贫血的大人群筛查及携带者的检出是一种较为理想的方法。

应用10对引物多重PCR方法检测DMD基因缺失

目的建立适合于Duchenne型进行性肌营养不良(DMD)临床基因诊断的10对引物多重PCR方法 ,并探讨其临床应用价值。方法抽提55例DMD患者及正常对照者外周血DNA,选取肌营养不良蛋白基因的10对外显子引物,应用多重PCR反应方法 ,同时扩增10个特异性片段,扩增产物行聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果 55例DMD患者中,28例(50.9%)存在外显子缺失,27例(49.1%)未检测到缺失;25例缺失片段集中于第45～53外显子,3例缺失片段集中于第12～19外显子。第50外显子缺失频率最高;其次为外显子45、47、51、52,再次之为外显子12、53。结论 DMD基因缺失片段主要分布于第45～53、12～19外显子2个缺失热点区域。该方法具有临床应用价值,是检测DMD基因缺失的首选方法 。

人类UGT2B17基因缺失的多重PCR分型方法

目的建立一种快速有效的人类UGT2B17基因缺失型的PCR分型方法。方法针对人类基因组UGT2B17基因缺失型和外显子序列设计引物,采用多重PCR法进行分型。结果成功建立了一种多重PCR基因分型方法,并以普通PCR法和测序法验证。对安徽皖南地区健康人群UGT2B17基因分布进行了初步分析。结论所建立的多重PCR方法为一种有效便捷的UGT2B17基因缺失分型方法。

应用多重PCR检测DMD/BMD患者的基因缺失

目的:了解Duchenne型肌营养不良(DMD)/Becker型肌营养不良(BMD)患者基因缺失的分布规律,并探讨检测技术。方法:应用18对引物多重聚合酶链反应(mPCR)分两组对40例DMD/BMD患者和5例健康者进行Dys-trophin基因缺失检测分析。结果:27例(67.5%)存在外显子缺失,13例(32.5%)未检测到缺失;16例缺失片段集中于44～52号外显子,6例集中于2～20号外显子,5例在以上两个区域均有缺失;45、48、51号外显子缺失频率最高。结论:基因缺失为主要突变类型,缺失片段主要分布于44～52、2～20号外显子两个缺失热区;mPCR具有临床应用价值。

男性不育患者Y染色体微缺失的多重PCR筛查

【目的】建立一套Y染色体微缺失的多重PCR筛查方法 ,对因无精症或少精症欲行单精子卵细胞浆注射 (ICSI)治疗的男性不育患者进行Y染色体微缺失的常规筛查。【方法】建立两套稳定和可靠的五重PCR筛查方法 ,对在本中心进行ICSI治疗的 2 6例无精症患者和 6 1例少精症患者进行Y染色体微缺失的检测。【结果】在 2 6例无精症患者中发现 1例有Y染色体AZFc/DAZ的缺失 ,在 6 1例少精症患者中发现 4例Y染色体AZFc/DAZ的缺失。【结论】本研究Y染色体微缺失的多重PCR筛查方法是易行和可靠的。

缺失型DMD／BMD患者PCR快速检测的可行性与意义

应用对应于Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因缺失热区的二对ＰＣＲ引物和一对内对照无关引物，在同一反应体系中扩增，检测６６例ＤＭＤ／ＢＭＤ患者。发现其中２５例存在１７号或４９号外显子缺失，与同时采用ｃＤＮＡ探针杂交检测出的３５例基因缺失相比．检出率达７１．４％。说明该扩增系统能够作为快速筛查缺失型ＤＭＤ／ＢＭＤ患者的有效手段。这对指导合理选用探针，尤其在产前诊断方面，具有重要意义。

多重PCR法检测苏南地区Dystrophin基因缺失

目的研究应用多重PCR法检测Dystrophin基因缺失．并了解苏南地区Dys仃ophin基因缺失的特点。方法应用多重PCR法检测29例假肥大型肌营养不良症患者基因缺失．分析苏南地区Dystrophin基因缺失的分布。结果29例患者共检出15例存在Dystrophin基因缺失．苏南地区Dystrophin基因缺失检出率为51．72％；48号为最常见缺失外显子。结论多重PCR法检测假肥大型肌营养不良症患者基因缺失可靠，可用于临床检测；苏南地区Dystrophir谌因缺失分布特点与国内其他地区差别不大。‘

用mPCR检测江西籍三种常见的缺失型α-Thal基因

目的用单管多重聚合酶链技术(mPCR)检测江西省缺失型-áThal基因。方法用单管多重聚合酶链反应(mPCR)技术检测-SEA、-á3.7和-á4.2缺失型-áThal基因。结果用mPCR技术可检测-SEA、-á3.7和-á4.2。12例江西籍-áThal检出-á3.74例(33.3%)、-á4.22例(16.6%)、-SEA1例(8.3%).三种突变占12例缺失型-áThal基因57.9%。末定型6例。结论mPCR是一种简单、省时、经济、准确的检测3种常见-áThal缺失基因的方法。

多重聚合酶链反应检测DMD基因的初步分析

目的 在更广泛的区域内寻找DMD基因的缺失范围。方法 用 2 5对引物以多重PCR技术对 17例DMD或BMD患者进行DMD基因检测。结果 8例患者 (47.1% )被检出DMD基因片段性缺失 ,其中 7例患者的缺失部位集中在 44～ 5 1号外显子 ,另 1例患者的缺失部位处于DMD基因的 5′端。结论 我国DMD或BMD患者DMD基因的缺失热点主要位于该基因的中央部位 。

孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血的检测

本研究旨在建立一种孕早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见缺失型α-地中海贫血突变的单管多重PCR技术,用于α-地中海贫血的产前诊断。选择50例妊娠14-20周的贫血孕妇,采用gap-PCR方案设计4组PCR引物单管多重PCR体系,快速地检测孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血。结果表明:在50例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中检出5例α-地中海贫血,其中3例为东南亚型缺失--SEA,2例为右侧缺失-α3.7。结论:采用单管多重PCR检测技术能快速准确地检测出3种最常见缺失型α-地中海贫血,对于防止α-地中海贫血患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有重要意义。

DMD/BMD基因缺失的检测及其临床分析

目的:了解Duchenne/Becker型肌营养不良症(DMD/BMD)致病基因缺失的分布及其与临床病情的关系。方法:应用9对引物多重聚合酶链反应(mPCR)技术对42例DMD/BMD患者进行致病基因检测。结果:21例患者(50.0%)被检出外显子缺失,缺失片段长度各异,其中16例(76.2%)累及中央缺失热区,5例(23.8%)位于5端缺失热区,尤以48号外显子缺失频率最高。结论:多重PCR技术是检测DMD/BMD致病基因缺失的有效方法,该病病情轻重可能与外显子缺失的数量和长度不呈平行关系,而是与缺失类型有关,并受到个体差异的影响。

多重聚合酶链反应在缺失型ɑ-地中海贫血诊断中的应用

目的:探讨多重聚合酶链式反应(PCR)在缺失型ɑ-地中海贫血患者基因类型快速诊断中的应用价值。方法:对应用多重PCR进行ɑ-地中海贫血检测后确诊为正常的30份样本及缺失型ɑ-地贫的78份样本进行基因类型及血液实验学参数的回顾性比较与统计分析。结果:在78例缺失型ɑ地中海贫血中,8例为左缺失静止型ɑ-地贫(-ɑ3.7/ɑɑ)、3例为右缺失静止型ɑ-地贫(-ɑ4.2/ɑɑ)、60例为东南亚型缺失ɑ-地贫(--sea/ɑɑ)、5例为左缺失血红蛋白(HbH)病(--sea/-ɑ3).7、2例为右缺失血红蛋白(HbH)病(--sea/-ɑ4.2),分别占缺失型ɑ-地贫的10.3%、3.8%、76.9%、6.4%、2.6%。静止型ɑ-地贫血液学参数MCV为(84.0±3.76)fl,红细胞脆性为(68.0±12.7)%;东南亚(标准)型ɑ-地贫MCV为(71.7±5.1)fl,红细胞脆性为(42.3±15.2)%;HBH病MCV为(61.9±5.0)fl,红细胞脆性为(25.0±6.5)%。结论:与传统的血液学参数筛查比较,多重PCR可以准确、简便、快速地检测常见的-ɑ3.7、-ɑ4.2、--sea3种缺失型ɑ-地贫,对静止型ɑ-地贫的检出是一种较为理想的方法。

抑癌基因p16突变与乳腺癌的相关研究

目的研究乳腺癌p16基因的状态。方法采用多重PCR分析法,单链构像多态性分析法(SSCP)对48例乳腺癌标本与相应的癌旁组织中p16基因突变情况进行了检测。结果48例乳腺癌标本中16例p16基因第2外显子缺失,相应的癌旁组织未检出。结论p16基因在乳腺癌中存在高频率缺失,其改变与乳腺癌发生发展有着密切联系。

鼻咽癌组织中P16基因缺失突变的分析

目的探讨p16基因缺失突变在鼻咽癌中的发生情况与临床意义。方法采用多重PCR分析法,对157例鼻咽癌标本及47例治疗后病理阴性组织标本P16基因突变情况进行了检测。结果鼻咽癌组织中P16基因第2外显子的缺失率高于疗后病理阴性组织,统计学上有显著差异性(P<0.000),P16基因第2外显子的缺失与鼻咽癌的临床分期、性别、年龄统计学上无显著差异(χ2值分别为1.726、0.582、0.196,P>0.05),P16基因第2外显子的缺失率不足3年生存组高于超过3年生存组,统计学上有显著差异性(χ2=14.12,P<0.000)。结论P16基因第2外显子缺失可能与鼻咽癌的发生发展预后有关,与临床分期、性别、年龄无关,可作为预后评价指标。

抑癌基因p16突变与鼻咽癌的相关研究

目的研究鼻咽癌p16基因的状态。方法采用多重PCR分析法,单链构像多态性分析法(SS-CP)对48例鼻咽癌标本与相应的癌旁组织中p16基因突变情况进行了检测。结果48例鼻咽癌标本中16例p16基因第2外显子缺失,相应的癌旁组织未检出。结论p16基因在鼻咽癌中存在高频率缺失,其改变与鼻咽癌发生发展有密切关系。

应用多重PCR扩增法快速诊断中国人DMD基因缺失

应用9组寡核苷酸引物多重PCR扩增dystrophin基因相应的9对DNA顺序,对52名中国人DMD患者进行基因缺失的分析,结果显示有27名患者缺失了部分扩增的DNA片段,占受检患者总数的52%,并表明应用这9对扩增DNA片断可以检测出90%左右具有基因缺失的中国人DMD患者,若选择组合应用2组扩增片段b和f,便可检测出75%的基因缺失患者。本文的研究结果为我国开展DMD分子水平的快速诊断和产前诊断提供了有价值的科学资料。

应用单管多重PCR诊断缺失型α-地中海贫血

目的探讨应用单管多重PCR对缺失型α地中海贫血进行诊断,并了解-SEA、-α3.7、-α4.2三种缺失型在广西南宁农村地区人群中的分布情况。方法对466例用血液学参数分析初筛为α地中海贫血患者进行基因诊断。结果初筛为α地中海贫血466例临床标本,基因检测证实326例为α地中海贫血。在326例α地中海贫血患者中,--SEA/αα197例、-α3.7/αα64例、-α4。2/αα50例,占60.43%、19.63%和15.34%。与PCR检测相比,MCV、MCH和HbA2检测的灵敏度分别为86.20%、79.45%、77.61%;检测特异度分别89.29%、66.43%、71.14%。结论与血液学检测方法相比,单管多重PCR检测具有快速、准确的优点,可用于大面积人群和临床样品的缺失型α-地中海贫血的分子流行病学调查及产前诊断。

用SYBR-Q-PCR结合融解曲线分析及mPCR检测江西籍三种常见的缺失型α-Thal基因

目的用自动化、高通量、准确快速技术检测江西省缺失型α-Thal基因。方法用实时荧光定量聚合酶链反应(SYBR-Q-PCR)结合融解曲线(D.C)分析及用单管多重聚合酶链反应(mPCR)技术检测-SEA、-α3.7和-α4.2缺失型α-Thal基因。结果SYBR-Q-PCR结合融解曲线分析较mPCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上,用SYBR-Q-PCR结合D.C、mPCR技术检测出--SEA、-α3.7和-α4.2。19例江西籍α-Thal检出-SEA/-α4.2-SEA/-α3.7-α3.7/-α3.7-α4.2/-α4.2-α3.7/-α4.2。结论SYBR-Q-PCR和mPCR能简单、省时、经济、准确的检测3种常见α-Thal缺失基因的方法。SYBR-Q-PCR结合融解曲线分析技术是一种高敏感、快速、自动化程度高、高通量,并不需要荧光标记探针。

鉴别检测野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒多重荧光定量PCR方法的建立

为建立一种鉴别检测野生型和基因缺失株非洲猪瘟病毒(ASFV)的方法,本研究根据GenBank中登录的ASFV P72、CD2v、MGF360-14L基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测P72、CD2v、MGF360-14L基因的多重荧光定量PCR方法。该方法与伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均无交叉反应,可鉴别野生型和基因缺失株ASFV,特异性强;敏感性试验结果显示,该方法对P72、CD2v和MGF360-14L重组质粒标准品的最低检测限均为100 copies/m L,敏感性高;组内和组间变异系数均小于2%,表明该方法重复性较好。利用ASFV核酸检测试剂盒与本实验室建立的方法分别对35份临床样品进行检测,两种方法的检出率均为68.57%,阳性符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的多重荧光定量PCR方法对ASFV的鉴别检测、病原流行病学调查等研究具有重要意义。

国内外卡介菌的分子遗传学特性

目的比较我国生产用卡介菌上海菌株与国际常用卡介菌亚株(巴斯德1173P2株、法国F6株、丹麦1331株、丹麦2株、日本172株、Connaught)在分子遗传学上的差异。方法应用PCR和多重PCR方法,对国内外不同卡介菌的各缺失区(RD1、RD2、RD8、RD14、RD16、nRD18、RDDenmark/Glaxo)、插入序列IS6110拷贝数及基因座SenX3-Regx3串联重复序列拷贝数进行检测。结果我国生产用卡介菌上海菌株(BCG Chinese)缺失RD1和RD2,不缺失RD8、RD14、RD16、nRD18及RDDen-mark/Glaxo,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有3个串联重复序列,PCR产物为353bp;巴斯德1173P2株缺失RD1、RD2、RD14和nRD18,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列;法国F6株缺失RD1、RD2和nRD18,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列;丹麦1331株缺失RD1、RD2及RDDenmark/Glaxo,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列;丹麦2株与丹麦1331株相似,只是SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列和3个串联重复序列并存的现象;日本172株只缺失RD1,RD16只显示401bp的产物,含有2个IS6110插入序列;Connaught株缺失RD1、RD2、RD8及nRD18,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有1个串联重复序列。结论我国生产用卡介菌上海菌株与国外其他卡介菌亚株在分子遗传学特性上有一定的差异。