三七止血成分dencichine

三七〔Panax nologinseng (Burk.) F. H. Chen〕为我国传统的名贵中药。近年来,几本学者小菅卓夫等对三七进行分离止血活性成分的研究,并分得止血活性最强的单体,命名为dencichine。又参照Betty的方法合成了该化合物,两者的理化性质及生物试验结果完全一致。本文重点叙述denciehine和它的光学异构体的止血、增加血小板数和神经毒等作用。我所已于1984年合成了三七止血有效成分dencichine。

Enantioseparation of Dencichine and D-Isomer on L-Cysteine Derivative Phase by Ligand-exchange Chromatography

The enantioseparation of dencichine and its D-isomer was achieved on a novel chiral stationary phase via coating N-（2-hydroxyl-3-octoxyl） propyl-S-benzyl-（L）-cysteine on YWG-C18 phase by ligand exchange chromatography.

A Sensitive HPLC-MS/MS Analysis of Dencichine in Rat Plasma and Its Application to Pharmacokinetics

In order to quantitate dencichine in biological samples, a selective and sensitive method for the determination of dencichine in rat plasma based on high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) was developed and validated. (l)-2-amino-3-(carboxymethylthio)propionic acid was used as the internal standard (I.S.). After a protein precipitation extraction with acetonitrile, dencichine and the I.S. were chromatographed on an Xterra MS-C18 column. The mobile phase was consisted of 20mmol/L ammonium acetate solution-acetonitrile (35:65, V/V) at a flow rate of 0.2 mL/min. The detection was performed on a triple quadrupole mass via electrospray ionization (ESI) source in the positive mode. The intra- and inter-day precision (relative standard deviation, R.S.D.) values of dencichine were below 6.7%. The extraction recoveries were up 85%. The lower limit of quantification was 20 ng/ml, which was sensitive enough to detect the analyte. The HPLC-MS/MS method was successfully applied to the pharmacokinetic study after an intravenous administration of dencichine in Sprague-Dawley (SD) rat.

“拔鸡腿”对三七入药部位氨基酸和三七素含量的表征效应

【目的】探明三七地上茎顶部茎段鸡腿状增粗(俗称“拔鸡腿”)对三七传统入药部位氨基酸和三七素含量的影响,为三七优质高产提供理论依据。【方法】采用茚三酮法和高效液相色谱法分别测定三七“非拔鸡腿”和“拔鸡腿”植株主根、侧根、根状茎和地下部器官的总游离氨基酸含量(TFAC)和三七素含量(DC);在此基础上采用方差分析法研究“拔鸡腿”对三七传统入药部位氨基酸和三七素含量的表征效应。【结果】与“非拔鸡腿”相比,2年生“拔鸡腿”主根的TFAC不显著偏低18.92%,根状茎和地下部器官的TFAC分别显著偏低31.06%和16.26%,侧根显著偏高14.26%;主根、侧根和地下部器官的DC分别极显著偏低33.87%、26.55%和17.97%,根状茎极显著偏高9.37%;3年生“拔鸡腿”主根的TFAC显著偏高13.90%,侧根、根状茎和地下部器官分别不显著偏低1.13%、14.32%和1.45%,主根和根状茎分别显著偏低9.96%和8.61%,侧根显著偏高18.14%,地下部器官不显著偏高0.37%;从2年生至3年生,“非拔鸡腿”和“拔鸡腿”侧根、根状茎和地下部器官的TFAC均下降,且后者较前者分别下降673.98%、-31.21%和-44.82%,二者主根的DC均上升,且后者较前者增加5.74倍。【结论】“拔鸡腿”表征着2年生侧根和3年生主根的TFAC较高,2年生根状茎和3年生侧根、地下部器官的DC较高,2年生至3年生时主根TFAC、主根、侧根和地下部器官的DC呈上升趋势;但2年生、3年生其余入药部位的TFAC和DC偏低,且2年生至3年生时各部位的TFAC和DC呈下降趋势。

三七素类似物的合成及促凝活性研究

目的 研究在三七素分子上以显酸性的四氮唑基团进行电子等排替换对其促凝活性的影响。方法 以N2-Fmoc-L-2, 3-二氨基丙氨酸为原料,分别与2H-1, 2, 3-三氮唑-2-乙酸,1H-1, 2, 4-三氮唑-1-乙酸,1H-四氮唑-5-乙酸反应,合成3种三七素类似物,并通过质谱(MS)、核磁共振氢谱(1H NMR)及核磁共振碳谱(13C NMR)对其结构进行确证。结果 3种三七类似物分别为2-({[(9H-芴-9-基甲基)氧基]羰基}氨基)-3-{[2-(1, 2, 3-三氮唑-2-基)乙酰基]氨基}丙酸(Ⅰ),2-({[(9H-芴-9-基甲基)氧基]羰基}氨基)-3-{[2-(1, 2, 4-三氮唑-1-基)乙酰基]氨基}丙酸(Ⅱ)及2-({[(9H-芴-9-基甲基)氧基]羰基}氨基)-3-{[2-(3H-1, 2, 3, 4-四氮唑-5-基)乙酰基]氨基}丙酸(Ⅲ)。凝血4项检查与血浆复钙时间检测表明,Ⅲ的促凝血活性优于Ⅰ、Ⅱ。结论 在三七素分子上以显酸性的四氮唑基团进行电子等排替换,对其促凝活性有一定的增强作用。

反相离子对色谱法测定复方丹参制剂中三七素的含量

建立反相离子对色谱法测定复方丹参制剂中三七素的含量,确定流动相组成为0.03%四丁基氢氧化铵的水溶液-3.5 mmol·L^(-1)磷酸二氢钠的甲醇溶液,比例为95∶5(磷酸调节pH值为3.4)时,三七素在2.01~269.11 mg·L^(-1)范围内呈良好的线性关系。复方丹参制剂中三七素与其他干扰项分离效果较好,该方法简便、快速、准确,显示可用于复方丹参制剂中三七素的含量测定。

三七素合成及其结构分析

以L(+)-天门冬酰胺为原料,经(Boc)2O保护、霍夫曼降解、取代和水解反应,得到三七素,总纯度可达99.8%。反应过程,可通过TLC显色技术进行监控。三七素的化学结构为β-ODAP,其异构体α-ODAP同时存在。采用2,4-二硝基氟苯进行柱前衍生,分析HPLC图谱后发现,β-ODAP和α-ODAP在水存在条件下加热时,两者会相互转化,并最终达到β-ODAP和α-ODAP的比例为60∶40的平衡状态。自然界三七素中β-ODAP和α-ODAP也同时存在,与化学合成的三七素具有相同的化学本质。

微波-超声辅助三七素提取工艺的优化及其抗炎活性研究

以三七(Panaxnotoginseng)植株为研究对象,分别对其根、茎、叶、花、整株中的三七素质量分数进行分析。通过微波-超声辅助提取工艺提取三七植株中三七素,用响应面优化对工艺进行优化,利用HPLC检测三七素质量分数。结果表明,三七花中的三七素质量分数最高,其次是叶,整株与根的质量分数接近,茎中质量分数最低。最佳提取工艺条件是:超声时间为25 min、微波温度为80℃、料液比(g/mL)为1∶31、超声功率为180 W、微波时间为10 min,该工艺条件下提取的三七素质量分数为30.77 mg/g,将溶液浓缩冻干得到三七素冻干粉质量分数达到46.59 mg/g。用MTT测定提取物对细胞活力的影响以及经LPS刺激后RAW264.7细胞NO释放量。结果显示,三七素提取物在10~200μg/mL质量浓度范围内可显著抑制NO的释放,具有良好的抗炎活性。

人参属植物止血成分比较分析

应用日立—835型氨基酸自动分析仪测定了人参属3种植物——人参三七、人参与西洋参中止血成分——三七素的含量。其中含量以三七最高,人参次之,西洋参最低。

柱前衍生化高效液相色谱法测定三七及其制剂中三七素含量

目的：建立三七药材及其制剂中三七素含量测定的方法。方法：以硼砂缓冲液（pH9．18）为提取溶剂，回流提取药材及制剂中的三七素；以氯甲酸芴甲酯（FMOC）作为衍生化试剂，对三七素提取液进行柱前衍生化，采用RP-HPLC，ODS柱分离，并通过紫外检测的方法进行测定。结果：在本实验条件下，三七素的线性范围为1．76-352mg·L^-1，最低检测限为60μg·L^-1。衍生化产物稳定，过量的衍生化试剂无干扰。平均加样回收率为95．3％，RSD为1．7％。结论：该方法操作简单，快速，灵敏度高，可用于三七药材及制剂中三七素的分析测定和三七素的药物代谢研究。

田七素在加工红参中的变化及其转化机理

试验研究了田七素在红参加工炮制中的变化及其转化机理。以甲醇为溶剂,采用渗淋法进行提取;正丁醇萃取,Sephadex-LH-20凝胶柱分离,经UVI、R1、H-NMR1、3C-NMR和MS/FD鉴定,应用氨基酸自动分析仪对其含量进行测定。结果表明:田七素在鲜人参和生晒参中的含量为0.51%、0.50%,加工成红参后含量降低为0.26%,其机理在于田七素受热发生脱羧降解反应,生成1-醛基-二氨基丙酸,并生成CO2和H2O,从而降低人参的毒性。这一结果揭示了人参加工炮制减毒作用的另外一个机理。

三七中三七素的分离纯化与结构分析

以三七(Panaxnotoginseng)为材料,经醇提、水提,得到三七素粗提物,用乙醇沉淀、正丁醇萃取去除皂苷类成分,经阳离子交换树脂柱层析,得到三七素.三七素经初步纯化含量从4.43%提高到13.98%.经过离子交换树脂柱分离后含量提高到96.46%.通过重结晶得到的无色板状晶体三七素的结构经过红外光谱,核磁共振光谱及质谱加以鉴定。

人参止血成分的化学研究

本文采用逆流分布和凝胶色谱(Sephadex LH-20和CM-sephedex C-25)从人参根中分离出一种具有止血活性的化合物,经鉴定,该化合物为β-N-草酰基-L-α,β-二氨基丙酸。

三七渗漉提取工艺的研究

目的优选三七的最佳渗漉提取工艺。方法采用正交试验法,以三七总皂苷和三七总氨基酸为考察指标,对影响三七渗漉提取工艺的因素进行研究。结果乙醇浓度、乙醇用量、渗漉速度均对三七提取工艺有显著影响。结论三七的最佳渗漉提取工艺为用12倍量50%乙醇,渗漉速度为1～3mL/(min·kg)。

多孔石墨化碳柱分析强极性化合物三七素

建立了强极性的非蛋白氨基酸三七素在石墨化碳色谱柱上的反相高效液相色谱分析方法。以Thermo Hypercarb石墨化碳柱（100mm×4．6mm，5μm）为分离柱，以0．05mol／L NaH2PO4（H3PO4调pH2．2）为流动相，流速为1mL／min，于柱温80℃、检测波长220nm条件下分离检测。对三七素在石墨化碳柱上的保留及其影响因素的研究结果表明：三七素在石墨化碳柱上的保留机理仍主要是疏水相互作用。将建立的色谱条件用于三七药材中三七素的测定，进样量在0．22～4．4μg范围内线性关系良好（r=0．9999），平均加标回收率为99．5％（n=9），相对标准偏差不高于2．2％，分析速度快（三七素的保留时间不到3min）。

三七素的研究进展

三七素为三七主要的止血活性成分。现对三七素化学结构、提取分离、含量测定、药理作用、毒理作用的研究进展做一综述,期望为进一步研究和开发利用提供参考。

三七素手性拆分方法的研究

使用气相色谱法和高效液相色谱法分离了三七素对映体,并探讨了影响液相色谱法分离效果的因素。结果表明,HPLC法利用手性固定相进行直接拆分,无法实现对映体的完全分离;GC法和HPLC的手性试剂衍生化法均可对三七素对映体进行较好的分离。但GC法由于衍生化过程中副产物的存在,干扰了对映体的准确定量。手性试剂衍生化HPLC法,以邻苯二甲醛、N-酰化-L-半胱氨酸为衍生化试剂,反应得到的三七素对映体的衍生物在ODS柱上分离良好,且方法简单、快速。

复方血栓通胶囊中三七药渣的三七素含量考察

目的:考察复方血栓通胶囊三七药渣中三七素的含量。方法:采用HPLC法进行含量测定,色谱柱:岛津Shim-pack XR-ODS色谱柱(3.0 mm×75 mm,2.2μm);流动相条件:A∶B=75∶25[A为水,B为3.5 mmol·L^(-1)磷酸二氢钠的甲醇-0.03%四甲基氢氧化胺(20∶80,磷酸调p H为3.3)];柱温:40℃;检测波长:220 nm;流速:0.3 ml·min^(-1);进样量:10μl。结果:三七药渣中三七素含量为0.057%~0.219%。结论:三七药渣中仍含有三七素,建议三七药材直接入药。

三七素检测方法研究进展

三七素是中药三七的止血活性成分,也存在于山黧豆等植物中,称山黧豆神经毒素,其化学成分为β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸,属非蛋白游离氨基酸。本文从传统氨基酸分析、气相、液相色谱及其色谱-质谱联用、毛细管区带电泳、流动注射等方面综述了三七素的分析检测方法,并对相关技术进行了评述,为合理选择三七素检测手段提供参考。

三七中三七素及其异构体的高效液相色谱检测

目的：采用2,4-二硝基氟苯为柱前衍生试剂,建立测定三七中三七素（β-ODAP）及其异构体（α-ODAP）的柱前衍生反相高效液相色谱法。方法：采用Luna-C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈∶HAc-Na Ac（17∶83）;检测波长360 nm;柱温40℃;进样量20μL。结果：三七素（β-ODAP）色谱峰的峰面积与其浓度在0.30~50.50μg/m L范围内呈良好的线性关系,回归方程为A1=140.50C1＋72.30,r1=0.9995;三七素异构体（α-ODAP）色谱峰的峰面积与其浓度在0.10~16.15μg/m L范围内呈现良好的线性关系,回归方程为A2=106.60C2＋56.00,r2=0.9992。结论：不同三七样品中均存在可检出的三七素（β-ODAP）及其异构体（α-ODAP）。该方法操作简便、快速、准确,选择性好,可用于植物、药物及食品中三七素及其异构体含量的测定。