铁皮石斛中石斛多糖与石斛碱的纤维素酶法提取研究

本文利用纤维素酶法联合提取铁皮石斛中的多糖与生物碱,通过单因素实验研究酶用量、酶解时间、酶解温度和酶解pH对石斛多糖与生物碱收率的影响。实验结果表明,在本实验范围内,最佳提取工艺为:纤维素酶用量为原料的0.6%(质量分数),酶解时间为1.5h,酶解温度为50℃,酶解pH值等于5.0。在此工艺下,石斛碱的收率达19%,石斛多糖收率达0.35%。本工艺操作简便,成本较低,值得进一步深入研究。

铁皮石斛的裂解气相色谱指纹图谱及其系统聚类分析

采用裂解气相色谱/质谱法(Py-GC/MS)测定了10种不同产地的铁皮石斛并结合系统聚类分析法比较了这些铁皮石斛的指纹图谱,采用释放气体分析法考察了裂解温度对指纹图谱的影响。结果表明,0.4mg样品在450℃下可瞬间裂解,10种样品的指纹图谱具有相似性,且重现性好;采用系统聚类分析能区别不同产地的样品。本法快速、简便、准确,不失为药材质量控制的良好方法。

铁皮石斛的SCAR标记研究

目的:建立快速准确的铁皮石斛DNA分子鉴定方法。方法:采用RAPD方法对11种石斛进行多态性分析,获得铁皮石斛特异的RAPD分子标记片段;经克隆、测序,重新设计一对特异性引物转化成稳定的SCAR标记。结果:获得了1条稳定扩增的铁皮石斛特异的片段DS-302,序列测定结果表明,全长302 bp,通过BLAST搜索、同源性比较,结果表明该段序列与已知数据库中的所有序列无显著同源性。根据该序列设计1对特异引物,对11种石斛进行扩增,可在铁皮石斛中扩增获得约300 bp的片段,而石斛属其他种未出现该条带。结论:DS-302成功转化为SCAR分子标记,可对铁皮石斛进行快速有效的鉴定。

不同培养基对铁皮石斛组培快繁的影响（英文）

【目的】探讨铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根的适宜培养基,为铁皮石斛组织快繁技术提供依据。【方法】以铁皮石斛种子为外植体进行培养,研究6-BA(0-3.0mg/L)、NAA(0.1-0.3mg/L)、香蕉泥(15%～25%)和马铃薯泥(15%～25%)对铁皮石斛种子萌发、芽增殖和生根壮苗的影响。【结果】适宜种子萌发的较好培养基为MS+20%马铃薯泥,芽增殖最适培养基为MS+2.0mg/L6-BA,增殖率达282.7%;最适生根培养基为MS+15%香蕉泥,生根率达100%。【结论】经马铃薯泥、香蕉泥培养的铁皮石斛组培苗,生长健壮,能为生产提供大量的种苗,因而此类培养基可用于大规模生产铁皮石斛组培苗。

福建铁皮石斛人工繁育技术研究

以福建铁皮石斛种子为材料,开展种子萌芽、壮苗生根适宜培养基配方试验研究,并对组培苗的移栽基质进行筛选。结果表明:以MS+蔗糖30g.L-1+琼脂7g.L-1为培养基,种子萌芽快,萌芽率高;1/4MS+蔗糖40g.L-1+马铃薯提取液100mg.L-1+琼脂7g.L-1是壮苗生根的最佳培养基;木屑∶泥炭(1∶2)的基质,组培苗移栽成活率、平均新芽数及大于3cm平均新芽数等3项指标最好。

铁皮石斛药材HPLC指纹图谱研究

目的建立铁皮石斛药材的RP-HPLC指纹图谱。方法采用梯度洗脱的方法,以KromasilKR100-5C18(250mm×4.6mm,5μm)为分析用色谱柱,以乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相建立了铁皮石斛药材的指纹图谱,并进行了相似度的计算。结果该方法可使铁皮石斛中各成分得到较好的分离,并根据检测结果确定了15个共有指纹峰。结论该指纹图谱检测方法简便、重现性好,可作为铁皮石斛药材质量控制的重要方法。

铁皮石斛试管培养物多糖含量测定

目的比较铁皮石斛试管培养物与原药材的多糖含量。方法用比色法测定石斛多糖的含量。结果铁皮石斛原药材含多糖量最高,其次是原球茎和试管苗。结论铁皮石斛原球茎多糖含量比试管苗多糖含量高。

液-质联用法测定铁皮石斛和西洋参及制剂中多菌灵残留

用高效液相色谱-质谱联用法定量检测铁皮石斛、西洋参药材及其制剂中的多菌灵残留。在酸性条件下以甲醇提取中药材和制剂中的残留多菌灵，分析色谱柱为Diamonsil C18（4．6mmi．d.×250mm，5μm），以4％四氢呋喃水溶液-甲醇梯度洗脱，采用选择离子监测模式，以m／z192为检测定量离子。多菌灵出峰时间在27min左右，线性范围为0．22—33ng，相关系数0．9993；方法检出限为0．015mg／L；定量限为0.022ms／L；平均回收率在95．6％以上。该方法灵敏、准确、可靠，定量范围宽，耐用性强，可作为中药中多菌灵残留的可靠检测方法。

铁皮石斛离体培养体细胞胚发生的组织细胞学研究

【目的】探索离体条件下铁皮石斛体细胞胚发生过程,为铁皮石斛的快速繁殖生产和种质资源保存提供技术依据。【方法】取继代培养30 d的铁皮石斛类原球茎作接种材料,以N6为基本培养基,加入植物激素,并以真菌提取物作诱导子,对类原球茎和愈伤组织进行诱导培养。【结果】显微观察结果表明铁皮石斛体细胞胚的形成可由愈伤组织的表皮细胞或内部细胞产生。【结论】铁皮石斛通过类原球茎和愈伤组织的诱导培养能获得大量的丛芽。

铁皮石斛根茎中菲类化学成分分析

目的:研究铁皮石斛根茎的菲类化学成分。方法:运用各种柱色谱方法进行化学成分的分离纯化,并根据其理化性质、波谱解析、对照品比较以及文献报道对比鉴定化合物结构。结果:从其乙醇提取物中经反复纯化得到6个化合物,分别鉴定为2,3,4,7-四甲氧基菲(Ⅰ)、1,5-二羧基-1,2,3,4-四甲氧基菲(Ⅱ)、2,5-二羟基-3,4-二甲氧基菲(Ⅲ)、2,7-二羧基-3,4,8-三甲氧基菲(Ⅳ)、2,5-二羧基-3,4-二甲氧基菲(Ⅴ)、3,5-二羧基-2,4-二甲氧基菲(Ⅵ)。结论:其中化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ为首次从石斛属植物中分离得到。

铁皮石斛原球茎增殖培养基配方的优化

[目的]获得铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.)原球茎组织培养的最佳培养基配方。[方法]用正交试验筛选出6-BA、NAA、KT最佳的浓度配比,并考察各因素对铁皮石斛原球茎增殖率的影响。[结果]铁皮石斛原球茎增殖的最佳培养基配方为1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L KT。[结论]该研究为工业化生产铁皮石斛原球茎及其有效成分,推进铁皮石斛工厂化育苗奠定了基础。

添加剂对铁皮石斛组织培养和快速繁殖的影响

1/2MS培养基添加活性炭、植物激素及香蕉汁、苹果汁、土豆汁等对铁皮石斛DendrobiumcanducumWall exLindl 快速繁殖的影响研究 ,结果表明 :适量的活性炭和 1 0mg/LNAA比较适合铁皮石斛原球茎的增殖 ;1/2MS及添加 0 5mg/LNAA和 0 5 %活性炭比较适于原球茎的分化 ;添加 0 5 %活性炭和香蕉汁、苹果汁能促进试管苗根的生成和生长。

铁皮石斛与绞股蓝原生质体融合的初步研究

目的 探索铁皮石斛与绞股蓝原生质体杂交融合 ,为中药材的改良提供新途径。方法 两种原生质体通过PEG法进行成对融合 ,融合子培养在添加 BA2 mg/L 及 NAA1m g/L 改良的 MS液体培养基中。结果 分离得到了高产量、活力强、纯度高的铁皮石斛及绞股蓝叶肉原生质体。结论 融合获得了有活力的杂种细胞 ,培养 3d后 ,杂种细胞开始分裂 ,共进行了

铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的研究

目的研究铁皮石斛Dendrobiumcandidum原球茎液体悬浮培养的可行性以及接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。方法利用完全随机实验设计和正交试验设计研究不同基本培养基、接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。结果无论鲜重还是干重,铁皮石斛原球茎在液体培养基上均极显著好于固体培养基(P<0.001)。不同基本培养基对铁皮石斛原球茎生长影响的研究表明,培养天数为30d时,对于鲜重67-V极显著好于B5(P<0.01),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS显著好于MS(P<0.05);对于干重67-V与B5没有显著性差异(P>0.05),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS极显著好于MS(P<0.01)。接种量和培养液体积对原球茎生长影响的研究表明,接种量影响最大,体积其次,互作最小,若不考虑互作,对于鲜重和干重,最佳处理为接种量6.194g/瓶+培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶;对于干重,若考虑互作,接种量为6.194g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为3.102g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为1.693g/瓶时,应选150mL/瓶或50mL/瓶。结论液体悬浮培养对铁皮石斛原球茎的生长有利,获得了最佳基本培养基、接种量和培养液体积的最佳搭配方案,表明通过液体悬浮培养生产铁皮石斛原球茎具有较好的开发应用前景。

不同培养条件对铁皮石斛原球茎增殖的影响

[目的]为了找到适合原球茎增殖的培养条件,为工厂化育苗提供技术支撑。[方法]以铁皮石斛茎段诱导出的原球茎为实验材料,研究了不同基本培养基、不同碳源、不同浓度的脱落酸(ABA)和培养方式对其增殖的影响。[结果]在5种培养基中,原球茎增殖倍数均呈上升的趋势,其中改良MS的增殖倍数明显高于其他培养基;在低浓度的条件下,随ABA浓度的增加,原球茎的增殖速度加快,当浓度为0.5 mg/L时,增殖最大;蔗糖为碳源时原球茎增殖的效果比葡萄糖、果糖好;固体培养和液体振荡培养时原球茎增殖倍数最高。[结论]在改良MS中加入30 mg/L蔗糖和0.5 mg/L ABA,进行固体培养或液体振荡培养,铁皮石斛原球茎增殖的效果好。

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响

目的研究固体培养条件下2种真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响。方法筛选获得铁皮石斛原球茎的继代培养基及其生长曲线。根据生长曲线,在原球茎生长的不同时期加入真菌诱导子,考察诱导子对原球茎鲜质量和干质量的影响。结果铁皮石斛原球茎继代培养基:1/2MS+20%土豆+3%蔗糖+0.8%琼脂。与对照相比,第11周和第13周加入MF23诱导子使原球茎鲜质量分别提高了16.4%(P<0.01)和23.4%(P<0.01),干质量分别提高了6.7%(P<0.05)和17.9%(P<0.01),继代培养基中加入MF23诱导子使原球茎干质量降低了9.9%(P<0.01)。与对照相比,第11周和第13周加入MF24诱导子使原球茎鲜质量分别提高了17.7%(P<0.01)和12.0%(P<0.05),第11周加入MF24诱导子使原球茎干质量提高了9.2%(P<0.05),继代培养基中加入MF24诱导子使原球茎干质量降低了13.9%(P<0.01)。结论在原球茎培养的早期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有一定抑制作用;在原球茎培养的后期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有促进作用。

稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响

目的研究稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响。方法通过正交试验,以石斛小苗为外植体,培养在附加了3种不同稀土元素组合的1/2MS+20%的香蕉提取物的培养基上进行培养。结果3种稀土元素中的镧(La)对试管苗增质量、叶绿素b、总叶绿素和石斛多糖的量都有显著的影响;3种稀土元素都对试管苗的叶片数、根数、分蘖数以及叶绿素a的量影响不显著。结论为铁皮石斛试管苗的壮苗以及品质的提高提供了科学的依据。

束花石斛抗凝血作用的初步研究

目的初步研究束花石斛DendrobiumchrysanthumWallexLindl的抗凝血作用。方法在研究比较束花石斛、金钗石斛DendrobiumnobileLindl、球花石斛DendrobiumthyrsiflorumRchbf和鼓槌石斛DendrobiumchrysotoxumLindl的乙醇提取物对小鼠全血凝血时间的影响基础上,观察束花石斛乙酸乙酯部位、生物碱部位和正丁醇部位对小鼠全血凝血时间和小鼠出血时间的影响,进一步对束花石斛乙酸乙酯部位用小鼠凝血因子和大鼠颈总动脉颈外静脉血流旁路实验性血栓法进行测定研究。结果在全血凝血时间实验中束花石斛乙醇提取物与其他三种石斛乙醇提取物相比对凝血时间的延长作用最为显著;而束花石斛乙酸乙酯部位与其他两个部位相比,对全血凝血时间和出血时间的延长作用最为显著,并能抑制大鼠颈总动脉颈外静脉血流旁路实验性血栓的形成,但对凝血因子没有显著作用。结论束花石斛乙酸乙酯部位可能主要通过抑制血小板聚集来发挥抗凝血作用的。

霍山县3种石斛叶片光合特性及其对光强的响应

目的研究石斛的光合特性,了解其适宜栽种的光强。方法测定霍山县3种石斛(霍山石斛Dendrobiumhuoshanens,铁皮石斛D.candium,铜皮石斛D.moniliforme)的光合速率对光强响应曲线,不同光强处理时叶绿素荧光参数的变化及3.0×104lx瞬时光强下叶片荧光猝灭诱导。结果霍山县3种石斛属于阴生植物对光强的响应,光饱和点、光补偿点较低,净光合速率和表观量子效率都较低;大于4.0×104lx强光下石斛叶片受光抑制严重。结论霍山县3种石斛生长光强,一般为(0.2～2.0)×104lx;可以在(2.5～3.0)×104lx光强的环境中生长;不适宜在大于4.0×104lx光强的环境中生长。

铁皮石斛RNA提取及RT-PCR检测

目的 有效地提取铁皮石斛高质量的RNA,为研究环境胁迫对铁皮石斛生长与代谢影响的分子表达机制奠定基础.方法 建立声波处理的刺激组与对照组,改良苯酚-氯仿法制备的RNA,分光光度法检测其量,1.0%变性琼脂糖凝胶电泳检测其完整性;所得的总RNA经过RT PCR扩增,6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测显示其差异cDNA片段.结果 提取的总RNA A260/A230为3.16,A260/A280为1.96,产量达0.27μg/mg,电泳条带清晰,完整性良好,可筛选出明显的差异cDNA片段,分子质量在240～600 bp.结论 用该方法能高质高量地提取富含多糖的药用植物总RNA.