密度梯度分离纯化／免疫荧光技术检测饮用水中“两虫”

采用膜溶解、密度梯度分离纯化结合免疫荧光染色法对饮用水中的"两虫"(隐孢子虫和贾第鞭毛虫)进行定性与定量检测,以大幅降低检测成本,简化操作。结果表明,使用Percoll-蔗糖介质可取得良好的分离纯化效果,其卵囊和孢囊初始回收率分别为56%和35%,远高于EPA1623方法的要求。利用该方法对河网型水源水及水厂滤后水进行了检测,发现10L水源水中有1～3个隐孢子虫和0～2个贾第鞭毛虫,但在50L滤后水中均未检出"两虫"。

免疫磁珠法及密度梯度离心法分离纯化人外周血中性粒细胞的比较

目的比较免疫磁珠法和密度梯度离心法分离纯化人外周血中性粒细胞的可靠性。方法用免疫磁珠法和密度梯度离心法分别分离中性粒细胞,使用血球计数仪结合显微镜鉴定细胞纯度、回收率,以台盼蓝检测细胞活力。结果免疫磁珠法与密度梯度离心法分离中性粒细胞纯度分别为(98.76±0.53)%,(92.34±1.57)%,回收率分别为(90.01±2.24)%和(82.20±2.17)%,两种方法分离后中性粒细胞活力分别为(95.60±2.30)%,(94.20±3.11)%。结论免疫磁珠法分离人中性粒细胞纯度及回收率均好于密度梯度离心法,但分离后细胞活性二者差异不大。

基于Percoll密度梯度法的轻老龄红细胞膜表面电荷的研究

红细胞衰老过程中膜表面电荷的变化情况与其结构功能密切相关。针对以往研究对轻老龄红细胞膜表面电荷的差异性不确定的问题,本文从不同的细胞分离方法分离轻老龄红细胞的效果不同的角度,通过比较分离出的轻老龄红细胞表面唾液酸的含量和细胞膜的弯曲弹性模量Kc值,提出高速离心法和Percoll密度梯度离心法分离出的轻老龄红细胞间的细胞年龄差距不同,Percoll法分离出的细胞年龄差距更大。利用Percoll密度梯度离心法,进一步分离出四种不同细胞年龄的红细胞,由红细胞表面唾液酸的含量和表面Zeta电位值检验轻老龄红细胞膜表面带电状态的差异性,结果显示,轻老龄红细胞的膜表面电荷存在明显差别,且随着细胞年龄的增长,红细胞的膜表面负电荷逐渐减少。研究结果对红细胞的衰老机制及体内清除老化红细胞的途径等研究具有重要意义。

煤显微组分分离富集

单组分成烃热模拟实验已成为煤成烃研究的重要组成部分，煤显微组分分离是上述研究的重要前提。实验结果证明：单纯应用某一种方法效果往往不佳，而采用人工碎样→筛选法→浮选法（沉淀法）→高速离心法这一综合的显微组分分离方法，则可以获得高纯度的显微组分。

边界单元法在高梯度磁选机中的应用——鞍形磁系磁感应强度的计算

将边界单元法应用于高梯度磁选领域，获得了高梯度磁选机中鞍形磁系磁感应强度的数值计算方法，论述了它的程序实现过程和处理技巧，通过实例计算并与实测值比较，结果表明该方法简单易行，精度较高。

兔骨髓基质干细胞诱导成骨的实验研究

目的:研究兔骨髓基质干细胞(BMSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法:使用密度梯度法分离骨髓基质细胞并进行培养,传2代后运用成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠(β-Gp)、L-坏血酸(AA)进行诱导,测试骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果:形态学表明骨髓基质细胞呈集落生长,有成纤维细胞样外观,诱导后细胞生长较前明显减慢,逐渐变为立方形、锥形或梭形。汇合时细胞呈铺石状重叠生长,进而形成“钙结节”样表现。染色及电镜观察可见细胞诱导前后有明显区别,细胞增殖吸光度(OD值)及细胞碱性磷酸酶测试表明,随着时间的延长,细胞增殖变慢,但分化能力增强(P<0.05)。结论:骨髓基质细胞作为构建组织工程骨的种子细胞在地塞米松、β-甘油磷酸、L-坏血酸诱导下成骨具有可靠的重复性。

An Independent Component Analysis Algorithm through Solving Gradient Equation Combined with Kernel Density Estimation

A new algorithm for linear instantaneous independent component analysis is proposed based on maximizing the log-likelihood contrast function which can be changed into a gradient equation.An iterative method is introduced to solve this equation efficiently.The unknown probability density functions as well as their first and second derivatives in the gradient equation are estimated by kernel density method.Computer simulations on artificially generated signals and gray scale natural scene images confirm the efficiency and accuracy of the proposed algorithm.

分离外周血单个核细胞的条件优化

目的比较不同抗凝剂、离心力及离心时间对葡聚糖-泛影葡胺(Ficoll)密度梯度离心法分离单个核细胞的影响,优化实验方案。方法取肝素、EDTA及2种抗凝剂混合后的3种不同抗凝血,采用Ficoll法进行分离,用血细胞分析仪进行分类和计数,计算回收率和纯度;同时对EDTA抗凝血进行不同离心力及离心时间的处理,优化分离效果。结果 EDTA组获得PBMC回收率为(51.32±50.21)%,纯度为(45.38±22.14)%;肝素组获得PBMC回收率为(24.52±19.10)%,纯度为(78.46±11.91)%;EDTA+肝素组获得PBMC回收率为(56.32±24.30)%,纯度为(80.27±12.44)%。经单因素方差分析,PBMC回收率方面,EDTA组与肝素组比较差异有统计学意义(P<0.05),EDTA组回收率较高,而肝素+EDTA组与EDTA组回收率比较,差异无统计学意义(P>0.05);PBMC纯度方面,EDTA组与肝素组比较差异有统计学意义(P<0.05),肝素组PBMC纯度较高,而肝素+EDTA组与肝素组比较,纯度则差异无统计学意义(P>0.05);PBMC存活率方面,肝素+EDTA组与肝素组、EDTA组比较,均差异无统计学意义(P>0.05)。对EDTA抗凝血进行单个核细胞分离实验表明,在离心力为600×g(1 800r/min),离心时间为25min时分离效果最佳。结论肝素+EDTA组回收率、纯度与单种抗凝剂实验组相比,结果差异无统计学意义(P>0.05),故在实验过程中可以混合两种抗凝全血进行细胞分离。EDTA抗凝血在离心力为600g(1 800r/min)、离心时间为25min时,分离单个核细胞效果最佳。

颗粒物对滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法检测贾第鞭毛虫和隐孢子虫的影响

滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法因具有成本低廉和性能稳定的特点,目前已列入《城镇供水水质标准检验方法》(CJ/T 141-2018)用于水源水和城镇供水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫(简称两虫)的检测。针对实际生产中,水中颗粒物会影响该方法回收率和稳定性的情况,在前期研究的基础上,结合颗粒物大小,进一步探索了浑浊度对滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法检测水中两虫的影响。结果表明,颗粒物大小仅对隐孢子虫回收率有影响,对贾第鞭毛虫无显著影响。其中,隐孢子虫在5μm为主要颗粒物的水中获得最高回收率。浑浊度是影响两虫回收率的主要因素,20 NTU以下浑浊度水样适合采用滤膜浓缩法富集浓缩其中的两虫,尤其是3~5 NTU;20 NTU及其以上浑浊度的水样可采用沉淀浓缩法,在30~50 NTU时有最佳回收率。

人胰腺星状细胞的新型分离方法

目的探讨人胰腺星状细胞（PSCs）的新型分离方法。方法通过gentleMACS“组织处理器．恒温震荡消化制备正常胰腺组织、胰腺癌组织的单细胞悬液。通过密度梯度离心法分离获得静息态和活化态的PSCs。结果通过新型的分离法，1g人正常胰腺组织能够获得约（2．6±0．7）×10^6个静息态PSCs，平均活率约为90．0％，细胞形态符合典型的静息态特征，328Jim激发波长下可观察到短暂蓝绿色自发荧光；1g人胰腺癌组织能够获得约（4．1±1．1）×10^6个活化状态的PSCs，平均活率约为92．0％，活化态的细胞均表达d一平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（vimentin）、成纤维细胞特异性蛋白1（FSP-1）等特征性标记。结论本研究所用新型分离方法，适用于静息态与活化态两种表型的PSCs，不但分离纯度较高，分离时间亦极大缩短，值得推广借鉴。

一种改进的蔗糖线性密度梯度溶液制备法

[目的]制备具有良好线性的蔗糖密度梯度溶液。[方法]利用溶液梯度混合仪和蠕动泵组装成新型的蔗糖密度梯度溶液制备器,用该制备器制备50%~0%和50%~10%等不同蔗糖密度梯度溶液,然后利用电脑核酸蛋白检测仪检测所制备的蔗糖密度梯度溶液的光密度,并对蔗糖密度溶液的线性进行评估;比较自制的蔗糖密度梯度溶液制备器与经典的Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的蔗糖密度梯度溶液的优劣。[结果]自制的蔗糖密度梯度溶液制备器制备的50%~0%和50%~10%蔗糖密度梯度溶液的光密度与蔗糖密度的决定系数(R^(2))都在0.98以上;Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的50%~0%蔗糖密度梯度溶液的光密度与蔗糖密度的决定系数(R^(2))为0.95~0.97。[结论]自制的蔗糖密度梯度溶液制备器制备的蔗糖密度梯度溶液优于Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的蔗糖密度梯度溶液。